APP下载

不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾肝胰腺蛋氨酸腺苷转移酶活性的影响

2012-09-22迟淑艳谭北平杨奇慧董晓慧刘泓宇

饲料工业 2012年24期
关键词:凡纳滨包被蛋氨酸

迟淑艳 谭北平 杨奇慧 董晓慧 刘泓宇

(广东海洋大学水产学院,广东湛江524088)

蛋氨酸在肝细胞内和三磷酸腺苷(ATP)通过蛋氨酸腺苷转移酶(Methionine adenosyl transferase,MAT)催化形成具有活性甲基的S-腺苷蛋氨酸(S-adenosyl Methionine,SAM),从而在体内参与诸多合成和分解代谢的化学反应,MAT是该反应的限速酶,属胞内酶。蛋氨酸是凡纳滨对虾的第一限制性氨基酸,但是,晶体蛋氨酸和微胶囊化的蛋氨酸哪种能更有效地被动物吸收、利用还不清楚。本试验通过在凡纳滨对虾饲料中添加晶体蛋氨酸和微胶囊蛋氨酸,通过放射性同位素检测方法,研究不同形式的蛋氨酸对凡纳滨对虾蛋氨酸腺苷转移酶活性的影响,以期为晶体氨基酸在对虾饲料中有效利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

配制5种等氮、等能的低鱼粉饲料(表1)。缺乏的蛋氨酸分别添加晶体L-蛋氨酸(MET,Adisseo,法国)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(Fluka,美国)包被蛋氨酸(CAP)、棕榈酸甘油酯(Fluka,美国)包被蛋氨酸(TPA)、树脂(Eudragit П,元升工业,江苏连云港)包被蛋氨酸(RES)、羟基蛋氨酸(MHA,Alimet,Novus Internation⁃al,Inc.上海)5种形式,其中以MET为对照组。将所有粉碎好的饲料原料(过60目筛)按饲料配方(表1)混合均匀,经双螺杆制粒机[F-26(Ⅱ),华南理工大学监制]挤压成直径1.5 mm的条状,在60℃恒温下烘干至水分为10%左右,破碎,封装备用。各处理组饲料氨基酸含量见表2。

表1 饲料配方和营养成分(%干物质)

表2 饲料中氨基酸含量(%)

1.2 饲养管理

养殖试验在粤海饲料东海岛试验场进行,选择健康凡纳滨对虾虾苗,投喂商业饲料暂养2周后随机选择600尾健康对虾进行分组。共5个处理组,每个处理3个重复,每个重复放养40尾虾[初始重(0.81±0.01)g]于300 L玻璃钢养殖桶中,每天投喂4次,饱食投喂,时间7:00、11:00、18:00、21:00,每天记录投饵量,根据查饵情况变动投喂量,每次投喂前虹吸除去残饵和蜕掉的壳。养殖期间24 h供氧,溶解氧10.45~10.5 mg/l,水温29~30 ℃,pH值7.8~8.0,养殖试验持续50 d。

1.3 样品收集及化学分析

饲养试验进行到28 d和50 d时,分别于7:00投料摄食后0.5、1、3、6、12 h进行肝胰腺取样,以蒸馏水为介质进行匀浆,1×104r/min离心取上清液,测定蛋氨酸腺苷转移酶活性(MAT)(检测方法由美国田纳西大学外科学院Malak Kotb老师和他的学生Ramy Attia提供),具体方法如下:取10 μl、5×缓冲液(250 mmol/l TES缓冲液,250 mmol/l KCl,75 mmol/l MgCl2,1.5 mmol/l EDTA,0.5 mg/ml BSA溶液),5 μl 50 mmol/l ATP,1 μl 1 mmol/l14C-L-蛋氨酸(经由中国同位素公司购自Amersham),0.2 μl、1 mol/l DTT,加入去离子水,将混合物在37 ℃孵育5 min,取40 μl放入10 μl样本中反应20 min,反应结束后分别取管中溶液20 μl,点样在经冰醋酸处理的2 cm2的P81离子交换纸,在大容器中(4 L)流水冲洗30 min,上液闪仪(Packard,Tri-carb 2900TR,Liquid scitillation analyzer)测定14C-L-蛋氨酸放射活性。MAT活性的测定在广州中山大学中山医学院放射核医学教研室完成。

2 结果分析

养殖第28 d、第50 d摄食不同形式氨基酸凡纳滨对虾肝胰腺MAT活性见图1及图2。

图1 养殖第28 d摄食不同形式蛋氨酸后12 h内凡纳滨对虾肝胰腺蛋氨酸腺苷转移酶活性

由图1看出,养殖试验进行到第28 d时,摄食后0.5 h时CAP处理组MAT活性最高,1 h时RES处理组MAT活性上升至最高,而0.5 h和1 h时,TPA处理组均保持最低;3 h时RES组回落而TPA组和CAP组上升,并且TPA组在6 h时升至最高后于12 h时回落。MET组在0.5、3 h和6 h时MAT活性均较低,但是在12 h时骤然升高,不仅高于其他各组,还高于该组在整个取样点时的MAT活性。MHA处理组在3 h时MAT活性最高。

图2 养殖第50 d摄食不同形式蛋氨酸后6 h内凡纳滨对虾肝胰腺蛋氨酸腺苷转移酶活性

在养殖第50 d时,凡纳滨对虾摄食不同形式蛋氨酸饲料6 h内,MAT活性发生了变化。摄食后0.5 h时,MET和MHA组的MAT活性较高,到1 h时3个微胶囊组的MAT活性开始上升而MET组下降,RES组上升较缓慢;3 h时RES组MAT活性持续上升,且达到观察期内的最高点,6 h时RES组MAT活性回落至最低,而此时MET组的MAT活性却突然上升至最高。MHA处理组在0.5、1和3 h时始终保持较高的MAT活性,在6 h时有所下降。

3 讨论

水生动物饲料中鱼粉蛋白源被部分或全部替代后,会导致氨基酸的缺乏,通过添加晶体氨基酸(CAA)可以弥补限制性氨基酸的不足,同时提高蛋白质的利用效率,改善凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)[1]、日本对虾(Penaeus japonicus)[2]、罗非鱼(Tilapia nilotica)[3-4]、虹鳟 (Salmo gairdnerii Richardson)[5]、斑 点 叉尾 鮰(Ictal⁃urus punctatus)[6-7]、鲤鱼(cyprinus carpio)[8]和尖吻鲈(Lates calcarifer Bloch)[9]等动物的生长。然而,水生动物利用晶体氨基酸的效果并非一致。有研究指出,动物肠道吸收CAA的速度比吸收肽和蛋白质要快[10-12],导致由饲料来源的蛋白分解出的游离氨基酸利用效率降低,部分氨基酸分解作用加剧[13]。有关CAA在动物体内代谢程度的研究较少,Segovia-Quintero等通过饲喂尼罗罗非鱼含放射性35S的蛋氨酸结果表明,蛋氨酸在整个肠道都有吸收,在前肠吸收最高[14]。

蛋氨酸吸收入血最初在肝脏聚集,首先经MAT在ATP的作用下形成SAM,成为体内最重要的甲基供体并且参与多种细胞信号传递过程。本试验通过测定凡纳滨对虾养殖第28 d和第50 d时的MAT活性间接反映蛋氨酸的吸收速度和代谢程度。结果表明,养殖试验进行至第28 d和50 d时,摄食后的不同时间点凡纳滨对虾肝胰腺MAT活性是有差异的。28 d时摄食0.5 h时CAP组的MAT活性最高,并且几种蛋氨酸添加形式除了TPA微胶囊蛋氨酸组以外均高于MET组,提示晶体蛋氨酸是否在0.5 h内已经被吸收代谢,也就是说在0.5 h以内,由于晶体蛋氨酸进入消化道后以较高的底物浓度刺激了MAT的活性,使得该处理组在0.5 h时已经过了该酶活性的最高峰值;而微胶囊蛋氨酸的不同处理均具有一定的缓释作用,在0.5 h时CAP组MAT活性最高,已经有一定量蛋氨酸释放被吸收进入代谢途径,分析可能由于包被技术的原因使该处理组表现出蛋氨酸的突释,三种微胶囊蛋氨酸的制作工艺是不同的,包被的时间也不同,导致其释放的速度以及包被的效果存在差异[15]。1 h时MET组活性上升提示蛋白结合态中的蛋氨酸可能已经分解游离出来,通过肠道黏膜吸收而使MAT活性上升;第50 d时0.5 h,MET和MHA处理组的MAT活性较高,提示蛋氨酸已经被吸收代谢,到1 h时三个微胶囊组的MAT活性开始上升,图2显示,CAP和TPA处理组微胶囊的蛋氨酸吸收可能快于RES组,RES组MAT活性逐渐上升,3 h时达最大,提示此时RES组的蛋氨酸吸收较高,可能与蛋白质结合态分解出的蛋氨酸同步,并被动物较好利用,积极参与了蛋氨酸的代谢过程。MET组在第28 d摄食后12 h MAT活性最高,在第50 d摄食后6 h MAT活性最高(12 h样本损坏)提示可能在此时已经完成一个蛋氨酸循环并进入到下一个循环,而此时蛋氨酸浓度较高致使蛋氨酸形成SAM时MAT表现出较高的活性。

Segovia-Quintero等认为强饲尼罗罗非鱼含有MET和CAP蛋氨酸的饲料后,肝脏35S的活性在1 h和6 h时显著增高,并且一直保持到12 h,TPA处理组肝脏中35S放射活性在整个观察期内显著低于另外两个组,因此,认为TPA包被的蛋氨酸吸收速率低于晶体蛋氨酸和CAP包被的蛋氨酸,TPA的缓释效果好于CAP[14];本试验中第28 d的结果显示,微胶囊处理的三个蛋氨酸组在12 h的MAT活性均有下降,MET组的MAT活性高于微胶囊处理的三个蛋氨酸组,以RES组最低,这和前者结果相似;第50 d时12 h的样本损坏,未能获得此时的结果。

4 小结

本试验条件下的数据表明,生长过程中的不同时期,凡纳滨对虾对氨基酸的吸收是存在差异的,微胶囊化对晶体蛋氨酸的吸收有一定的缓释作用,可以改善晶体蛋氨酸和蛋白质结合态蛋氨酸的吸收效率。需要进一步优化蛋氨酸的微胶囊壁材、包被工艺和了解凡纳滨对虾机体蛋氨酸的代谢动力学,在提高蛋氨酸吸收的基础上改善其代谢效率。

[1]Fox J M,Lawrence A L,Li-Chan E.Dietary requirement for ly⁃sine by juvenile Penaeus vannamei using intact and free amino ac⁃id sources[J].Aquaculture,1995,131:279-290.

[2]Teshima S,Kanazawa A,Yamashita M.Dietary value of several proteins and supplemental amino acids for larvae of the prawn(Penaeus japonicus)[J].Aquaculture,1986,51:225-235.

[3]El-dahhar A A,El-shazly K.Effect of essential amino acids(me⁃thionine and lysine)and treated oil in fish diet on growth perfor⁃mance and feed utilization of Nile tilipia,Tilapia nilotica(L.)[J].Aquac Fish Manag,1993,24:731-739.

[4]Viola S,Angeoni H,Lahav E.Present limits of protein sparing by amino acid supplementation of practical carp and tilapia feeds[J].J.Aquac-Bamidgeh,1994,46:203-211.

[5]Kaushik S J,Luquet P.Influence of bacterial protein incorpora⁃tion and of sulphur amino acid supplementation to such diets on growth of rainbow trout[J].Aquaculture,1980,19:163-175.

[6]Zarate D D,Lovell R T.Free lysine(L-lysine·HCl)is utilized for growth less efficiently than protein-bound lysine(soybean meal)in practical diets by young channel catfish(Ictalurus punctatus)[J].Aquaculture,1997,159:87-100.

[7]Li M H,Robinson E H.Effects of supplemental lysine and methio⁃nine in low protein diets on weight gain and body composition of young channel catfish Ictalurus punctatus[J].Aquaculture,1998,163:295-305.

[8]Chen B A,Leng X J,Li X Q,et al.Study on the effect of crystal⁃line or coated amino acid for cyprinus carpio[J].Acta hydrobiologi⁃ca sinica,2008,32:774-778.

[9]Williams K,Barlow C,Rodgers L.Efficacy of crystalline and pro⁃tein-bound amino acid enrichment of diets for barramundi/Asian seabass(Lates calcarifer Bloch)[J].Aquacult.Res.,2001,32(Suppl.1):415-429.

[10]Rojas-García C R,Rønnestad I.Assimilation of dietary free ami⁃no acids,peptides and protein in postlarval Atlantic halibut(Hip⁃poglossus hippoglossus)[J].Mar.Biol.,2003,142:801-808.

[11]Rønnestad I,Conceição L E C,Aragão C,et al.Assimilation and catabolism of dispensable and indispensable free amino acids in post-larval Senegal sole(Solea senegalensis)[J].Comp.Biochem.Physiol C.2001,130:461-466.

[12]Rønnestad I,Conceição L E C,Aragão C,et al.Free amino ac⁃ids are absorbed faster and assimilated more efficiently than pro⁃tein in postlarval Senegal sole(Solea senegalensis)[J].J.Nutr.,2000,130:2809-2812.

[13]Lovell T.Nutrition of aquaculture species[J].J.Anim.Sci.,1991,69:4193-4200.

[14]Segovia-Quintero M A,Reigh R C.Coating crystalline methio⁃nine with tripalmitin-polyvinyl alcohol slows its absorption in the intestine of Nile tilapia,Oreochromis niloticus[J].Aquacul⁃ture,2004,238:355-367.

[15]Chi S Y,Tan B P,Lin H Z,et al.Effects of supplementation of crystalline or coated methionine on growth performance and feed utilization of the pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei[J].Aquac.Nutr.,2011,17:e1-e9.

猜你喜欢

凡纳滨包被蛋氨酸
蛋氨酸对奶牛乳腺酪蛋白合成及其上皮细胞自噬的影响
凡纳滨对虾白斑综合征病毒防治研究进展(一)
ELISA两种包被方法在牛乳氯霉素测定中的比较
2016年第一季度蛋氨酸、赖氨酸市场走势分析
坐公交
凡纳滨对虾与点带石斑鱼的混养模式
跟一天了
肉鸡蛋氨酸的营养研究进展
凡纳滨对虾CTSL基因与生长相关的SNP位点的特征
2013年蛋氨酸市场回顾及2014年趋势展望