阿司匹林对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响

李红涛

阿司匹林(ASA)，又名乙酰水杨酸，是非甾体类抗炎药的代表药物，主要通过抑制环氧化酶的活性而降低前列腺素的产生发挥抗炎作用［1］。近年来，流行病学和实验室资料均表明，阿司匹林对食管癌，结肠癌，胃癌等消化道肿瘤均有抗肿瘤作用［2］。本实验选用人乳腺癌MCF-7细胞来探讨阿司匹林对乳腺癌的影响，为临床应用提供实验基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 主要试剂 RPMI1640培养基、胎牛血清、噻唑蓝试剂均购于华美公司。阿司匹林纯品购自Sigma公司。Annexin V-FITC试剂盒购于北京宝赛生物工程公司。

1.1.2 细胞株 MCF-7细胞株购于中科院上海细胞生物研究所。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 MCF-7细胞株培养于含10%小牛血清RPMI1640培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱内培养，培养至70% ～80%融合时，0.25%胰蛋白酶消化、传代。

1.2.2 MTT实验 不同浓度的阿司匹林:2.0 mmol/L，4.0 mmol/L，8.0 mmol/L，16.0 mmol/L，作用细胞 24 h、48 h、72 h后，每孔加入5 mg/ml的MTT20 μl，作用4 h后，每孔加入150 μl DMSO溶液，轻轻震荡15 min，在酶标仪570 nm波长处测定各孔吸光密度值(OD值)。公式:实验组细胞抑制率=(1-实验组OD值/对照组OD值)×100%。

1.2.3 FCM实验 不同药物浓度处理48 h的MCF-7细胞，PBS洗涤3次后，调节浓度为1.0×106/ml，按Annexin/FITC及PI试剂盒提供方法依次加入结合缓冲液。Annexin/FITC及PI 4℃避光30 min后，即可上流式细胞仪检测，计算凋亡率。

1.3 形态学观察 应用电镜观察阿司匹林是否引起MCF-7细胞凋亡。

1.4 统计学方法 采用SPSS 11.0软件对数据进行方差分析和配对t检验。

2 结果

2.1 细胞增殖活性 阿司匹林对MCF-7细胞增殖有抑制作用，呈时间-剂量依赖性，随时间、浓度增加而增加，有显著相关性(如表1)。

表1 不同浓度阿司匹林作用不同时间对MCF-7细胞的抑制率(±s)

表1 不同浓度阿司匹林作用不同时间对MCF-7细胞的抑制率(±s)

阿司匹林浓度(mmol/l)时间(小时)24 h 48 h 72 h 0(对照组)0±0 0±0 0±0 2 5.38±0.29 13.17±0.47 30.25±0.66 4 7.05±0.56 16.50±0.98 32.72±1.01 8 11.23±1.02 19.81±1.10 41.59±1.62 16 16.27±1.35 23.96±1.56 53.31±1.95

2.2 细胞凋亡百分率 以上不同浓度的阿司匹林作用MCF-7细胞48 h后，细胞的凋亡率为(19.09±0.87)% ～(53.75±0.48)%，凋亡率随着药物浓度增加而增高，呈剂量依赖性。

2.3 细胞凋亡 不同浓度阿司匹林作用后MCF-7细胞48 h后，电镜下可以观察细胞呈典型的凋亡形态学变化，出现细胞核固缩，染色质凝集于核膜周边，新月型小体及胞质空泡形成等。

3 讨论

阿司匹林是传统的解热镇痛类药物，目前有文献报道其对肿瘤细胞有抑制作用，并可降低许多肿瘤的发病率［3］，但是其抗肿瘤机制还不是很明确，阿司匹林可能通过多种途径抑制肿瘤的生长。许多研究证实，阿司匹林可通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长。此外，阿司匹林还可以通过干扰线粒体能量代谢、抑制磷酸戊糖途径、增加活性氧的活性而诱导凋亡。

本实验通过MTT法、流式细胞术、形态学方法研究阿司匹林处理的人乳腺癌MCF-7细胞结果显示阿司匹林对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有显著的抑制作用，呈时间-剂量依赖性，对乳腺癌细胞抑制率随时间、浓度增加而增加。本实验结果与王美荣［4］研究结果基本相近。

综上所述，阿司匹林在体外可有效的抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖诱导凋亡，为阿司匹林应用于乳腺癌的治疗提供了实验依据。

［1］ DOHERTY G A，MURRAY F E.Cyclooxygenase as a target for chemoprevention in colorectal cancer:lost cause or a concept coming of age?．Expert Opin Ther Targets，2009，13(2):209-218．

［2］ ROSTON A，DUBE C，LEWIN G，et al.Nonsteroidal anti-infammatory drugs and cyclooxygenase-2 inhibitors for primary prevention of colorectal cancer:a systematic review prepared for the U.S.Preventive Services Task Force．Ann Intern Med，2007，146(5):376-89．

［3］ Ll M，LOTAN R，LEVIN B，et al.Aspirin induction of apoptosis in esophageal cancer:a potential for chemop-revention cancer．Epidemiol Biomarkers Prey，2009，9:545-549．

［4］ 王美荣，戚之琳.阿司匹林对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响．皖南医学院学报，2010，29(4):243-245．