宝曲对家兔实验性动脉粥样硬化影响的研究

孟健

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是危害人类健康最常见的一种疾病，累及冠状动脉、脑动脉及肢体动脉，后果严重。近年来大量研究表明宝曲在调节血脂、抗氧化保护血管内皮细胞等方面发挥着重要的作用。本实验旨在通过宝曲对兔动脉硬化形成的影响，分析其抗动脉粥样硬化的作用途径。

1 材料与方法

1.1 材料 ①实验动物:健康的日本大耳兔24只，雌雄各半，兔龄4个月，由北京科宇动物养殖中心提供(许可证号:SCXK京2010-0003)。②药品与试剂:宝曲由上海德丰堂生物科技有限公司生产，批号为20100702;总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)检测试剂盒由上海名典生物工程有限公司提供;高密度脂蛋白(HDL)检测试剂盒由波音特生物科技有限公司提供;其他试剂均为分析纯。③主要仪器:7170全自动生化分析仪(日立公司)。

1.2 方法 ①动物饲养环境:分笼开放饲养，普通兔饲料和高脂兔饲料(普通饲料+10 g/L胆固醇+80 g/L猪油)均由北京科奥协力饲料有限公司提供。②动物分组及模型建立:普通饲料适应性喂养1周后，随机分为3组，各8只。空白组给予普通饲料加蒸馏水喂养;模型对照组给予高脂饲料加蒸馏水喂养;宝曲量组给予高脂饲料加蒸馏水喂养。除空白对照组外，其余各组给予兔耳中动脉部一次性注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)，使动脉发生免疫损伤，5周后形成类似人的动脉粥样硬化病变。③给药方法:宝曲组给予87.2 mg/kg，灌胃容量2 ml/kg，1次/d。高脂组、空白组每日给与相同剂量蒸馏水一次，试验周期为7周。

1.3 观测治标及方法

1.3.1 血脂测定 喂饲12周后，各兔禁食12 h后，于各组兔耳缘静脉取血分离血清，按试剂盒方法测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。

1.3.2 主动脉的病理学检查 ①动脉粥样斑块面积、斑块指数的测算:空气栓塞法处死实验动物，取部分颈动脉，包埋做切片，观察动脉粥样斑块;从主动脉弓到腹主动脉髂前分叉处取下主动脉，生理盐水洗净后苏丹染色，数码相机照相，输入计算机用Adobe illustrator图片处理软件测算斑块面积。于10×10倍光学显微镜下观察主动脉壁形态，并用测微尺测量斑块厚度及主动脉壁厚度，计算斑块指数(斑块指数=斑块面积斑块厚度)。②内膜厚度与中膜厚度比值的测算:在10×10倍放大条件下，用1/10目镜测微尺测量动脉内膜厚度及中膜厚度。以内膜最厚处为中心，测量该点的内膜厚度及中膜厚度，算出其比值，然后将动脉等距分成5点(包括中心点)，分别测其比值，取该样本的平均值。③动脉内膜单位面积内泡沫细胞数(内膜泡沫细胞密度):在40×10倍放大条件下，用目镜测微尺及手控计数器分别计算上述5个点，25个小格内的泡沫细胞数，取该动物全部切片的平均值，算出每mm2内的泡沫细胞数，即为该动脉内膜单位面积内的泡沫细胞数。

2 结果

2.1 宝曲对血脂的影响 结果表明，给予高脂饲料12周后，模型组兔空腹血清TC、TG较空白组显著升高，而HDL-C值明显降低。但在相同饲养条件下，给予宝曲组兔的空腹血脂变化和高脂组相比表现为TC、TG显著降低，HDL-C显著升高，见表1。

表1 宝曲对兔血脂水平的影响(mg/dl，±s)

表1 宝曲对兔血脂水平的影响(mg/dl，±s)

注:与空白组比较，△△P ＜0.01，△P＜0.05;与模型组比较，＊＊P ＜0.01

组别TC TG HDL-C空白组47.21±14.63 49.05±10.02 24.58±4.38模型组 288.46±19.57△△ 83.27±9.50△△ 19.05±6.33△宝曲组 151.38±8.09＊＊ 60.91±8.85＊＊ 49.32±8.81＊＊

2.2 主动脉形态学变化空白组主动脉内膜等结构完整，内皮下无脂质沉淀或斑块形成;模型组与空白组比较内膜增厚，内膜厚度/中膜厚度比值显著增加，同时形成明显的粥样斑块，可见大量泡沫细胞，严重者泡沫细胞崩解，胆固醇结晶形成;宝曲组的内膜增厚程度及结缔组织成分与模型组比较均显著减轻，泡沫细胞也少于模型组。表明宝曲据有减轻主动脉AS形成的作用。

表2 宝曲对主动脉形态学的影响表(±s)

表2 宝曲对主动脉形态学的影响表(±s)

注:与空白组比较，△△P＜0.01，△P＜0.05;与模型组比较＊＊P＜0.01，*P＜0.05

2组别 斑块面积(mm) 斑块指数 内膜厚度/中膜厚度 泡沫细胞数(个/mm2)空白组0.05±0.01 1.5±1.2模型组 653.4±199.5△△ 296±158△△ 0.94±0.15△△ 14.2±6.9△△宝曲组 273.8±101.1＊＊ 16±6＊＊ 0.11±0.09＊＊ 4.1±1.9 0 0*

3 讨论

现代医学研究表明，血管内皮细胞损伤是动脉粥样硬化形成的始动环节，两者又相互影响，兼顾这两种致病因素是非常必要的。近年研究表明血管壁内中膜厚度(IMT)是AS的早期改变，斑块形成是AS的明显特征，它可反应AS的程度［1］。在动脉粥样硬化形成过程中，由于单核细胞和平滑肌细胞迁移、黏附、增生，并形成泡沫细胞。泡沫细胞崩解后释放出的脂质形成脂质核心，从而使病变进入不可逆阶段并形成粥样斑块［2，3］。

本实验证实，应用宝曲的两治疗组血清中TC、TG显著降低，HDL-C明显升高，提示宝曲能通过降低TC、TG和升高HDL-C干预动脉粥样硬化的发生发展。应用宝曲能显著减轻内膜增厚程度、结缔组织成分以及泡沫细胞，表明宝曲据有减轻主动脉AS形成的作用。

［1］ Raso EM，Kramer C，Castrol.Association between coronary arterya the roscie rosis and the intima-media thickness of the common carotid artery measured on ultrasonography.ArqBras Cardiol，2003，80(3):589-592．

［2］ 李欣，廖新学，廖晓星，等.银杏叶提取物对动脉粥样硬化的防治作用研究.中华急诊医学杂志，2004，13(9):609-611．

［3］ GalleJ，Quaschning T，Seibold S，et al.Endothelial dysfunction andi nflammation:what is the link．Kidney Int Suppl，2003(84):45-49．