气相色谱法测定滴耳油中薄荷脑和龙脑含量

钟慧敏，黎德源

(1.广东恒健制药有限公司，广东 江门 529040; 2.广东药学院，广东 广州 510006)

滴耳油质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第一册)》[1]，由黄柏、五倍子、薄荷油、冰片、核桃油组方，具有清热解毒、消肿止痛的功效，主要治疗因肝经湿热上攻引起的耳鸣耳聋[2]、耳内生疮、肿痛刺痒、破流脓水、久不收敛等耳疾。然而该标准项下无含量测定，不利于控制产品质量。笔者采用气相色谱法[3]对制剂中的薄荷脑、龙脑进行含量测定，方法简便、准确可靠，能有效地控制药品质量，现报道如下。

1 仪器与试药

GC－2014C型气相色谱仪(日本岛津，DFID－氢火焰离子化检测器，CS－Light色谱工作站);Sartorius CPA26P型电子分析天平。薄荷脑对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110728－200506);龙脑对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110881－200706);滴耳油(广东恒健制药有限公司，批号为070702，080401，081001);其他试剂均分析纯，水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:玻璃填充柱，以聚乙二醇－20M为固定相，涂布浓度为10%;检测器:DFID，进样口温度:180℃，柱温:140℃，检测器温度:180 ℃;载气:氮气(高纯);流速:50mL/min;分流比:10 ∶1;进样量:1μL。在此条件下，薄荷脑、龙脑和内标峰具有较好的分离度，分离度应大于1.5;薄荷脑、龙脑的理论板数均应不低于2000。见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取水杨酸甲酯0.2 g，置100mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1mL含2mg的溶液，作为内标溶液。精密称取薄荷脑对照品12mg，置100mL容量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，即得薄荷脑对照品溶液。另精密称取龙脑对照品350mg，置100mL容量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，即得龙脑对照品溶液。取滴耳油样品0.5 g，精密称定，置10mL容量瓶中，加内标液定容至刻度，密塞，超声处理(功率250W，频率50 kHz)30min，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取薄荷脑对照品30mg，置25mL容量瓶中，加内标溶液适量使其溶解后稀释至刻度，摇匀，制得薄荷脑对照品贮备液;另取龙脑对照品175mg，置10mL容量瓶中，并精密量取薄荷脑对照品贮备液5mL加入其中，以内标溶液稀释后定容至刻度，摇匀;精密量取该溶液 0.5，1.5，2.5，3.5，4.5 mL，分别置10mL容量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，摇匀。制得薄荷脑质量浓度为 0.03～0.27 g/L及含龙脑质量浓度为 0.175～0.875 g/L的混合对照品溶液。在上述色谱条件下，依次进样1μL，记录色谱峰面积。以对照品与内标物的峰面积比为纵坐标(Y)，对照品质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，得薄荷脑回归方程Y=0.666X+0.004(r=0.999); 龙 脑 回 归 方 程 Y=0.514X+0.109(r=0.999)。结果表明，薄荷脑质量浓度线性范围为0.03 ～0.27 g/L，龙脑质量浓度线性范围为 0.175 ～0.875 g/L。

精密度试验和校正因子的测定:分别取薄荷脑对照品溶液和龙脑对照品溶液，在同一色谱条件下，重复进样5次，进样1μL，考察精密度。结果薄荷脑的 RSD为0.86%(n=5)，平均校正因子为 0.679 1;龙脑的 RSD为 0.58%(n=5)，平均校正因子为0.685 1。可见，方法精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液1μL，在同一色谱条件下，分别在 0，2，4，8，16 h时进样测定。分别计算薄荷脑和龙脑峰面积的 RSD，薄荷脑为 0.99%(n=5)，龙脑为 0.68%(n=5)。结果表明，供试品在16 h内稳定性良好。

重复性试验:取批号为070702的样品5份，依法制备供试品溶液并测定。结果薄荷脑含量的 RSD为0.39%(n=5);龙脑含量的 RSD为0.51%(n=5)。可见，本方法的重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品适量(批号为081001)，各6份，分别精密加入一定量的薄荷脑、龙脑对照品，依法制备供试品溶液。按拟订的色谱条件进行测定，结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

依法测定了批号分别为070702，080401，081001的3批样品，结果薄荷脑含量分别为 0.24%，0.25%，0.25%，龙脑含量分别为 5.46%，5.57%，5.50%。

3 讨论

由于处方中含有黄柏、五倍子等药材粉末，可能对玻璃填充柱造成损耗，因此本试验采用超声处理样品。经超声处理后，既可消除对填充柱的损耗，还可使有效成分提取完全。笔者曾考虑以无水乙醇作为溶剂，但反复试验发现，乙酸乙酯作溶剂提取龙脑更充分，且分离度和对称性较无水乙醇好，故最终选用乙酸乙酯作为溶剂。方法学研究结果表明，本法操作简便、结果准确、重复性好，能够有效控制产品质量。

[1]WS3－B－0165－89，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第一册)[S].

[2]曹卫华.“耳浓净”滴耳油治脓耳[J].湖北中医杂志，1997，19(3):56.

[3]韩海红.气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中龙脑含量[J].中国药业，2007，16(14):37.