醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平影响
2012-09-12黄川峰
黄川峰
脑缺血再灌注损伤是由于缺血缺氧后,脑细胞在再灌注情况下发生损伤,在此损伤过程中,有多种机制参与,其中炎症反应、氧自由基损伤、钙超载的等起着重要作用。研究认为,脑缺血下诱导的炎症细胞因子如白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等表达在脑缺血再灌注损伤中其着重要作用。醒脑静注射液是由麝香、栀子、郁金、冰片等成分制成,具有清热泻火,凉血解毒,开窍醒脑之功效。本文观察醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平影响。
1 材料和方法
1.1 动物 选择健康昆明雄性小鼠共60只,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,体重为20~22 g,SPF级。
1.2 试验仪器、试剂和药物 主要试验仪器:γ-放射免疫计数器、离心机等。醒脑静注射液(河北天地药业股份公司生产,国药准字Z41020664,批号:110219);TNF-а和IL-6放免检测试剂盒(购于深圳市科润达生物工程有限公司)。
1.3 脑缺血再灌注损伤小鼠模型 各组小鼠均在25℃下无菌环境下手术造模,10%水合氯醛麻醉,剂量为350 mg/kg。麻醉成功后,仰卧位,四肢固定。分离双侧颈总动脉,4号丝线扣待用,拉紧丝线扣即可阻断血流,松开丝线扣,血流可再灌注。阻断血流后可见小鼠惊厥、呼吸深且慢、心率增加。阻断血流10 min后丝线扣松开血流灌注10 min,而后再次拉紧丝线扣阻断血流10 min,再次松开丝线扣再灌注血流10 min。观察小鼠呼吸心跳,如平稳,可关闭切口。而假手术组仅仅分离出颈总动脉,不阻断血流及再灌注。
1.4 试验分组和给药方法 试验分为5组:假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组小鼠12只。5组均在术后的第二天给药。假手术组和模型组给予生理盐水腹腔注射,体积同其他三组。高、中、低三个剂量组均在造模后第2天给予醒脑静注射液,剂量分别为10 ml/kg、5 ml/kg、2.5 ml/kg,稀释为0.5 ml后腹腔注射。1次/d,连续注射液5 d。
1.5 指标测定 各组小鼠在末次给药后12 h后采用摘除眼球法取血,离心后取血清,采用放射免疫法测定小鼠血清IL-6和TNF-α水平。具体测定步骤依据试剂盒提供的步骤进行。
1.6 统计学方法 采用统计学软件SPSS 14.0进行统计学分析,各组均数比较采用单因素方差分析,组件比较采用t检验,P<0.05显示差异有统计学意义。
2 结果
各组IL-6和TNF-α水平测定结果比较:模型组IL-6和TNF-α水平分别高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);高、中、低剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 各组IL-6和TNF-α水平测定结果
3 讨论
白介素-6属于一种重要的炎症细胞因子。但是,在正常状态下,白介素-6水平很低,其在脑内的表达处于低水平状态。但是当脑发生缺血再灌注损伤后,中性粒细胞和巨噬细胞的浸润加强,此时白介素-6表达水平升高。而肿瘤坏死因子-а在脑组织中主要是由星形细胞和小胶质细胞分泌,肿瘤坏死因子-а具有多方面生理作用,它可介导白介素-6等多种炎症介质,对免疫过程也有不同程度的调节作用,而肿瘤坏死因子也参与脂质代谢,同时对糖的代谢也有一定的影响[1-3]。当脑组织发生缺血缺氧及血流再灌注时,肿瘤坏死因子-а通过刺激损伤的血管内皮细胞,提高白细胞对血管内皮粘附作用,内皮细胞相关状态发生改变,导致血栓素A2、内皮素等缩血管物质释放增加,从而导致血管收缩,引起血管闭塞。肿瘤坏死因子-а能够促使兴奋性氨基酸释放水平提高,神经毒性增强。研究表明,炎症反应在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用。而在脑缺血再灌注损伤中,IL-6和TNF-а等炎性细胞因子的释放增加,同时二者水平增加可导致级联反应,使血脑屏障受损,局部脑组织发生肿胀,导致神经元损伤,引发局部神经功能缺损症状[4,5]。
本文结果显示,模型组IL-6和TNF-α水平分别高于假手术组;高、中、低剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于模型组;高剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于中剂量组;中剂量组IL-6和TNF-α水平分别低于低剂量组。说明IL-6和TNF-а在脑缺血再灌注损伤中表达水平升高,参与了脑缺血再灌注损伤,而醒脑剂注射液能够降低IL-6和TNF-α表达,对脑缺血再灌注损伤中的炎症反应有一定的抑制作用。但醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤中的氧自由基损伤、钙超载等机制是否有影响,尚待进一步研究。
[1] 向赞,董大翠,刘庆莹.脑缺血与白细胞介素-6的变化.江汉大学学报(自然科学版),2005,23(2):83-87.
[2] 张莉莉,王景周,周华东,等.肿瘤坏死因子-a在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制.中华老年医学杂志,2003,22(2):102-104.
[3] Caso JR,Moro MA,Lorenzo P,et al.Involvement of IL-1 beta in acute stress induced worsening of cerebral ischaemia in rats.Eur Neuropsychopharmacol,2007,17(9):600-607.
[4] 吴建华,方云祥.法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响.中国临床药理学与治疗学,2008,13(4):377.
[5] 陈寿权,王万铁,王明山,等.醒脑静对家兔脑缺血再灌注时TNF、IL-1、IL-6水平及脑超微结构影响的实验研究.中国急救医学,2000,20(11):637.