RP－HPLC法测定蒙药沙日崩－8汤中甘草酸的含量

菅艳艳 杨永利

(1.内蒙古包头市药品检验所，内蒙古 包头 014030;2.内蒙古包头市妇幼保健所，内蒙古 包头 014030)

沙日崩－8汤为黄花蒿、草乌芽、瞿麦、甘草、玉簪花等8味药组成的复方制剂，属于蒙药验方，至今尚无质量控制标准。甘草为处方中的主药，笔者选用本品中甘草的主要成分甘草酸作为检测指标。采用高效液相色谱法对本品中的甘草酸建立含量测定方法。

1 仪器与试药

岛津LC—10ATvp泵，SPD－10Avp型检测器，进样器为岛津SIL－10AF，CLASS－VP工作站，sartorious BP211D型电子天平，METTLER TOLEDO AB104型电子天平，UV－1100紫外－可见分光光度仪。沙日崩－8汤(包头市蒙中医院提供，批号为090416、090518、090622)。甘草酸单铵盐(批号:110731－200615，供含量测定用):中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱:色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相:乙腈 －0.017mol/L－1磷酸(35:65)为流动相，在该条件下，甘草酸单铵盐具有较好的保留时间，与其他杂质分离完全，且峰形好，阴性样品不干扰测定，理论板数较高，甘草酸单铵盐的理论板数为3000以上。

检测波长的选择:精密称取甘草酸对照品适量，用60%甲醇制成1ml含0.1mg的溶液，在200～600nm波长范围扫描。结果:甘草酸在250.0nm处有最大吸收。参照中国药典2005年版第59页甘草含量测定项下甘草酸的测定方法，故选择250.0nm作为检测波长。

2.2 对照品溶液的制备:取甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液(相当于每1mL含甘草酸97.95μg)，即得。见图1。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照品色谱图

2.3 供试品溶液的制备:取样品，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 －0.017mol/L－1磷酸(13:7)的混合溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率350W，频率40KHz)40分钟，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图2。

2.4 阴性对照液的制备:按处方配比取缺甘草的阴性对照3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 －0.017mol/L－1磷酸(13:7)的混合溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率350W，频率40KHz)40min，放冷，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图3。

2.5 线性关系考察:精密称取甘草酸单铵盐对照品12.5mg(实际为12.11mg)，置50mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取 1、2、4、6、8和 10mL，分别置10ml量瓶中，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，各取10μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对对照品进样量进行回归分析，结果甘草酸在0.2372～2.3723μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为:Y=724077.29X+8347.76 ，r=0.999。

标准曲线数据见表1。

表1 标准曲线数值表

2.6 提取效率的考察:取同一份样品(批号:090614)以甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)作为提取溶剂进行超声提取(功率350W，频率40kHz)，实验中考察了超声提取30min、40min和50min不同超声提取时间对提取效率的影响，含量测定结果见表2。

表2 提取效率结果表

从表中数据可见，超声处理30min甘草酸的含量稍低，超声处理40min和50min甘草酸的含量基本一致，故超声提取时间定为40min。

2.7 稳定性试验:取同一份样品(批号:090614)溶液，分别在 0h、4h、8h、12h 进行测定，结果见表3。

表3 不同时间测定样品中甘草酸的峰面积积分值

从表中数据可见，甘草酸单铵盐在12小时内峰面积积分值基本稳定不变。

2.8 重复性试验:取同一批号(090614)供试品6份，按样品测定项处理，分别测定甘草酸的含量，其RSD为1.1%。结果表明，本方法重复性好。结果见表4。

表4 甘草酸含量重现性试验结果

2.9 加样回收率试验:加样回收试验 取供试品(批号:090416，含量 1.62mg·g－1)9 份，各约 1.5g，精密称定，再分别在其中3个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为0.2372mg/ml的甘草酸对照品60%甲醇溶液5mL(约相当于供试品含有量的50%)及甲醇 －0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)45ml、另3个具塞锥形瓶中各精密加浓度为0.8584mol/L－1的甘草酸对照品60%甲醇溶液3mL(约相当于供试品含有量的100%)及甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)47mL、其余3个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为0.8584mg·ml－1的甘草酸对照品60%甲醇溶液5mL(约相当于供试品含有量的150%)及甲醇 －0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)45mL，分别称定重量，超声处理40min，取出，再称重，用甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)补足减失的重量，摇匀，滤过。各取续滤液10μL进样，测定每份含量，计算回收率，结果见表5。结果表明本方法回收率良好。

表5 甘草酸加样回收率试验结果

2.10 样品测定:取本品按质量标准【含量测定】项下的方法处理并测定，3批样品的测定结果见表6。

表6 样品中甘草酸含量测定结果

2.11 药材的含量测定:实验中分别用上述的方法和药典方法对上述3批样品中使用的甘草药材进行了含量测定，测定结果见表7。

表7 甘草药材中甘草酸含量测定结果

按理论值折算，成品应含甘草酸1.89mg·g－1，转移率=1.67/1.89 ×100%=88.4.0%(以模拟样计算)。《中国药典》2005年版一部甘草项下规定:含甘草酸(C42H62O16)不得少于2.0%。含量低限=1772/15001×2.0% ×1000×88.4% ×90%=1.88mg·g－1。因此暂定本品每 1g 含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于1.8mg。

3 讨论

沙日崩－8汤作为蒙医验方，尚无质量标准。本研究旨在建立对其中的主药的含量测定方法，通过测定主药中目标成分的含量，从而有效地进行质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社，2005年版一部，59－60