HPLC法测定不同产地黑丹皮中丹皮酚的含量

秦伟瀚，赵纪峰，阳 勇，罗维早，杨荣平

重庆市中药研究院，重庆市 400065

牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清热凉血、活血散瘀之功效［1］。根据其采收加工方法的不同，有黑丹皮和粉丹皮之分，刮皮去心晒干者，称之为粉丹皮;抽心不刮皮晒干者则谓之黑丹皮［2-5］。粉丹皮为我国传统药用品种，主要在国内市场销售并有少量出口。近年来，黑丹皮随着国际市场需求的增加，大量远销日本、韩国、香港等国家和地区，仅山东省菏泽市每年的出口量就在3000吨左右。我们选择丹皮酚作为指标性成分对5个主产地黑丹皮进行了含量测定。结果表明不同产地黑丹皮药材中丹皮酚含量存在着较大差异。为今后进一步开发利用黑丹皮提供了科学参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

安捷伦1200型高效液相色谱仪，ChemStation化学工作站、VWD检测器;KQ250DB型数控超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司);AW-220型电子天平(岛津公司)。

1.2 材料

药材样品分别购自于山东菏泽、陕西渭南、重庆垫江及长寿、安徽铜陵、南陵及河南洛阳5个省市的药用牡丹生产基地、合作社及个体种植大户，经本院中药生药研究所秦松云副研究员鉴定均为毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮。丹皮酚(批号0708-0506)，中国药品生物制品检定所提供;甲醇(色谱纯，SK Chemicals公司)，甲醇(分析纯，重庆川东化工有限公司)，水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:菲罗门 LunaC18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(45∶55);流速:1.0 mL/min;检测波长:274 nm;进样量:10 uL。对照品、供试品图谱见图1。

图1 丹皮酚对照品(A)、黑丹皮供试品(B)HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of paeonol for the standard(A)，sample of black cortex moutan(B)

2.2 对照品溶液制备

精密称取丹皮酚对照品适量，加色谱甲醇制成每1 ml含0.0216 mg的溶液，作为对照品储备液。

2.3 供试品溶液制备

取本品粗粉约0.3 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

取粗细均匀的陕西黑丹皮数段，平均切成两段，其中一段用小刀刮皮，得皮及粉丹，另一段便为黑丹皮，三份样品均按照上述方法制备。

2.4 线性关系考察

按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、15 μL 进样，测定其峰面积，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程为 Y=4897.3X-8.9674(r=0.9999)。结果表明丹皮酚进样量在 0.0432～0.324 ug范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.5 精密度实验

精密吸取对照品溶液10 μL，按上述色谱条件连续进样5次，测定。结果，RSD=0.043%(n=5);表明仪器精密度良好。

2.6 重复性实验

取菏泽样品5份，按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品，进样10 μL，测定。结果，RSD=0.06%;表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取菏泽样品一份，按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品，分别在 0、2、4、6、8 h 进样 10 μL，测定。结果，RSD=0.20%，表明供试品在8 h内稳定。

2.8 加样回收实验

取已知含量的菏泽样品5份，每份约0.15 g，精密称定，分别加入相当于样品含量的对照品(0.5 mg/mL)5 mL，按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品，进样10 μL，测定，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果Table 1 Recovery rate of samples

2.9 样品测定

取重庆、陕西、河南、山东、安徽等地黑丹样品，陕西黑丹所制备的粉丹及表皮样品各一份，按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品，测定峰面积，并计算含量;结果见表2、图2。

表2 样品含量测定结果Table 2 Content determination result of sample

图2 表皮(A)、黑丹皮(B)及粉丹皮(C)比较图Fig.2 Epidermis(A)，black cortex moutan(B)and pink cortex moutan(C)comparison chart

3 讨论

含测结果表明:不同产地黑丹皮中丹皮酚含量有很大的差异，如重庆垫江样品含量高达2.72%，安徽铜陵和南陵样品含量均在2.00%以上，河南洛阳和山东菏泽样品含量分别为1.96%、1.69%，而重庆长寿和陕西渭南样品含量最低，均未达到药典规定的丹皮酚含量要求。从表2可以看出:同一产地不同采收季节丹皮酚含量也有较大的差别，秋季样品丹皮酚含量明显高于春季样品，如重庆垫江秋季样品含量为2.72%，春季样品为1.15%;安徽铜陵秋季样品为2.26%，春季样品为1.08%。由此可见，丹皮酚含量的高低与产地环境、药材采收季节具有特定的相关性。

通过对来自陕西渭南不同制法所得的粉丹皮、黑丹皮及表皮三种样品中丹皮酚含测比较:表皮＞黑丹皮＞粉丹皮。丹皮酚是评价牡丹皮药材质量优劣的重要指标，以上结果表明黑丹皮的质量应该优于粉丹皮，临床疗效也应该会更好，且同等规格黑丹皮的市场价格还较粉丹低［6］，而国内药房却沿用粉丹至今。从比较图2中可以看出，在波长274 nm下，表皮中的某些成分与黑、粉丹皮也存在较大差异;是由于表皮入药会影响临床疗效，还是去皮后更容易通过断面、色泽来判断其质量，有待于进一步的研究和探讨。

1 State Pharmacopoeia Committee.China Pharmacopoeia，part one.Beijing:Chemical Industry Press，2005，119.

2 Zhao XL(赵学龙).Cortex moutan processing the history of research.J Chin med(中华中医药学刊)，2008，26:1907-1909.

3 Wang SJ(王善检)，Ma ST(马书太)，Liu SE(刘素娥).牡丹皮炮制的现代研究.中医药动态，1997，(3):9-11.

4 Su GY(苏桂云)，Liu Y(刘颖).牡丹皮的炮制工艺.Capital med(首都医药)，2009，12:42.

5 Zhou LY(周立艳)，et al.Study on the processing technologies of cortex moutan.Lishizhen Med Mater Med Res(时珍国医国药)，2008，19:842-843.

6 Zheng P(郑平).潮起潮落话丹皮.全国药材信息，2010，(27):5-6.