灰毡毛忍冬芽的毒理学评价

2012-09-06李金玲徐晓玉

食品工业科技 2012年23期

李金玲，张辉，陈刚，王琴，徐晓玉，*

(1.西南大学药学院，重庆400716;2.重庆九龙坡区第五人民医院，重庆401329;3.重庆工商大学药物研究中心，重庆400067)

灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand-Mazz)俗称大花忍冬，是中国药典规定的山银花项下的品种之一。灰毡毛忍冬的花蕾具有清热解毒、凉散风热的功效，现代药理研究发现其有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、免疫调节、降血脂等作用［1］。灰毡毛忍冬的藤［2-3］也具有药用价值，有祛风除湿，通络止痛的功效，用于治疗肢体关节风湿痹痛。重庆灰毡毛忍冬产量大、发展快［4］，为当地山区农民带来了良好的经济效益。但是，目前国内外对灰毡毛忍冬的利用［5］主要集中在花、茎、叶、藤上，对于灰毡毛忍冬芽的利用还未见报道。课题组为了进一步拓展灰毡毛忍冬的药用价值，充分利用药材资源，增加药农的收入，对灰毡毛忍冬芽进行了系列研究，拟开发成为新的药用部位或者茶叶原料，相关论文已有发表［6］。本文按照2005年颁布的《新药(中药)研究指导原则》［7-9］对灰毡毛忍冬芽进行了急性毒性、亚急性毒性等系列研究，旨在对灰毡毛忍冬芽的毒理学做出初步的客观评价。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

灰毡毛忍冬芽采自重庆秀山坝芒基地，批号:110510;本研究所用的各种血液生理生化试剂盒南京建成生物工程研究所;灌胃用的灰毡毛忍冬芽提取物供试液按干燥灰毡毛忍冬芽(g)∶蒸馏水(mL)=1∶10煮沸提取3次，每次45min，合并提取液并真空加热干燥，配制1000mL浓度为1500、750、375mg·mL-1的灰毡毛忍冬芽提取物供试液，4℃保存备用;SPF级昆明种小鼠体重18～22g;SPF级 SD大鼠体重180～220g;均为雄性，购于重庆医科大学实验动物中心，生产许可证号:SCXK(渝)2007-0001，饲养于西南大学药学院SPF级实验动物中心，使用许可证号:SCXK(渝)2009-0002。

Eos-Bravo自动生化分析仪意大利HOSPITEX DIAGNOSTICS s.r.l公司;CM1900冰冻切片机德国徕卡仪器有限公司;BI-2000医学图像分析系统成都泰盟科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 急性毒性实验

表1 灰毡毛忍冬芽对小鼠体重的影响±s，n=10)Table 1The effect of Lonicera bud on weight of mice(±s，n=10)

表2 灰毡毛忍冬芽对大鼠体重及体重增长的影响(单位:g;±s，n=10)Table 2Effect of Lonicera bud on weight and weight gain of rats(unit:g;±s，n=10)

1.2.1.1 预实验取昆明种小鼠16只，雌雄各半，分成4组，每组2只，分别按1、5、15g·kg-1(最大耐受量)给药，若在某个剂量上给药后动物死亡，则从低一级剂量(例如5g·kg-1)开始给药，每组增加剂量5g·kg-1，直到出现动物死亡为止［10-11］，得到 Dmax，对所有死亡动物进行尸检。

1.2.1.2 正式实验选用健康、成熟，体重18～22gKM小鼠20只，雌雄各半。按实验的最大给药剂量给药一次，连续观察14d，并称量小鼠给药前、给药后第3、7、14d的体重。小鼠的一般症状(皮肤、毛发，行为活动，呼吸，心跳，眼泪、瞳孔和饮食等)和死亡情况，对死亡动物进行尸检并记录死亡原因，必要时做病理检查。

1.2.2 亚急性毒性实验 SD大鼠，180～220g，雌雄各半，80只随机分为4组，每组20只，对照组给予纯水，忍冬芽提取物三个剂量组，按高中低剂量分别给1500、750、375mg·mL-1浓度的供试药液 2mL，折合生药量为15、7.5、3.75g·kg-1。各组灌胃给药，每天一次，给药前4h，给药后2h动物禁食不禁水，其他时间自由饮食。实验期间观察动物的一般症状，每周称重。喂养30d后，股动脉取血做生化指标及血常规测定，对肾、肝、脾等称重，并做相应的病理学检查［12-13］。观察的指标主要有:

a.一般情况观察:记录动物的一般症状(皮肤、毛发，行为活动，呼吸，心跳，瞳孔、眼泪和饮食等)、死亡情况和每周体重等。

b.血液学指标:血红蛋白、血小板数、红细胞计数、白细胞计数。

c.血液生化指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、肌酐(CR)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)和总胆固醇(TCH)。

d.病理检查:脏体比(脏器系数)、大体观察及病理组织检查。

1.2.3 数据处理用SPSS 18.0对相关数据进行t检验或单因素方差分析。

2 结果与分析

2.1 急性毒性实验结果

2.1.1 预实验结果当剂量达到15g·kg-1时小鼠仍未死亡，因此未能测出LD50，初步确定了最大耐受量为 15g·kg-1。

2.1.2 正式实验结果给药2h内，小鼠活动减少、食量减少，12h后症状基本消失，24h后症状完全消失。13d实验恢复期间，20只小鼠无死亡，其毛色、活动和饮食均正常。在给药前，给药后3d、7d、14d动物称重(表1)，显示体重随周龄而增长，且雌雄各组间无显著性差异。确定了灰毡毛忍冬芽对小鼠经口的最大给药量为15g·kg-1·BW，说明灰毡毛忍冬芽对小鼠正常生长影响小，安全性高。

2.2 亚急性毒性实验结果

2.2.1 一般体征观察实验期间各组的雌、雄大鼠均正常生长，各组动物皮毛光滑、毛色正常，无死亡［14-16］。给药30d后，各剂量组雌、雄大鼠的体重增长情况良好，雄性大鼠体重增长都略高于雌性大鼠，但各剂量组的体重和体重增重与纯水组相比无显著性差异(p＞0.05)，大鼠体重及体重增长变化值见表2。

2.2.2 血液学指标见表3。大鼠给药30d后，在血液学各项指标中，各剂量组与纯水组比较无显著性差异(p＞0.05)，均在正常值范围内。

2.2.3 血液生化指标见表4。大鼠给药30d后，各剂量组的血液生化指标与纯水组比较无显著性差异性(p＞0.05)，均在正常值范围内。

2.2.4 病理组织检查见表5。解剖后经切片、染色、镜检检查，大体标本未发现明显病变。取各脏器称重比较知各组脏器系数与纯水组相比差异无显著性(p＞0.05。

3 讨论

通过急性毒性实验确定了灰毡毛忍冬芽对KM小鼠的最大给药量为15g·kg-1·BW，据此可以得出结论，灰毡毛忍冬芽的急性毒性很小，在常规剂量下服用是安全可靠的。从急性毒性来看，饮用灰毡毛忍冬芽具有很高的安全性，但是任何事物都有一个合理的使用范围，超过这个限量就不可能发挥好的作用，据研究大鼠在摄入过高量的蒸馏水也会致死，因此科学地饮用灰毡毛忍冬芽则是饮茶健身的必然要求。

表3 灰毡毛忍冬芽灌胃给药30天对大鼠血液的影响(±s，n=10)Table 3Effects of Lonicera bud on rats’blood by ig in 30 days(±s，n=10)

表4 灰毡毛忍冬芽灌胃给药30天对大鼠血液生化指标的影响(±s，n=7)Table 4Effect of Lonicera bud on biochemical indexes of rat blood by ig in 30 days(±s，n=7)

表5 灰毡毛忍冬芽灌胃给药30天对大鼠脏器系数的影响(g/100g，±s，n=10)Table 5Effect of Lonicera bud on organ index of rat by ig in 30 days(g/100g，±s，n=10)

通过慢性毒性实验得到灰毡毛忍冬芽对SD大鼠生长发育无不良影响，血常规、血液生化指标和脏器指数均在正常值范围内，皆无潜在的毒性作用［17-18］，病理学检查未见明显病变。表明灰毡毛忍冬芽无明显毒性，可为其应用推广的安全性提供相关实验依据。

综上所述，灰毡毛忍冬芽具有丰富的营养价值，经过一定的卫生处理和加工后，对人体健康不会造成危害，可作为新食品资源进行开发利用。

［1］贾晓东，冯煦，董云发.灰毡毛忍冬中皂苷类成分的研究［J］.中草药，2007，38(10):145-149.

［2］Yu C，Feng X，Xiaodong J，et al.Triterpene glycosides from Lonicera Isolation and structural determination of seven glycosides from flower buds of Lonicera macranthoides［J］.Chemistry of Natural Compounds，2008，44(1):392-431.

［3］陈敏，吴威巍，沈国强，等.灰毡毛忍冬化学成分研究［J］.药学学报，1994，29(8):6172-6201.

［4］陈君，许小方，柴兴云，等.灰毡毛忍冬花蕾的化学成分［J］.中国天然药物，2006，4(5):347-351.

［5］茅青，曹东，贾宪生.灰毡毛忍冬化学成分的研究［J］.药学学报，1993，28(4):2732-2811.

［6］李金玲，王永胜，马强，等.忍冬茶及其加工过程中氨基酸和微量元素分析［J］.食品工业科技，2012，33(12):75-78.

［7］中华人民共和国卫生部(GB/T15193，3-2003).急性毒性实验标准［S］.中国国家标准化管理委会，2003:9.

［8］中华人民共和国卫生部(GB/T15193，13-2003).30天和90天喂养实验［S］.中国国家标准化管理委会，2003:9.

［9］国家食品药品监督管理局.中药、天然药物研究技术指导原则［M］.2005:27-34.

［10］CHEN D，MILACIC V，CHEN M S，et al.Tea polyphenols，their biological effects and potential molecular targets［J］.Histol Histopathol，2008，23(4):487-496.

［11］PETER J R，JESSICA E S，SUSAN V.Time for tea mood，blood pressure and cognitive performance effects of caffeine and theanine administered alone and together［J］.Psychopharmacology，2008，195(4):569-577.

［12］MANDEL S A，AMIT T，KALFON L，et al.Targeting multiple neurodegenerative diseases etiologies with multimodal-acting green tea catechins［J］.J Nutr，2008，138(8):1578-1583.

［13］王冬平，隋丽华，尚世臣，等.清洁级SD大鼠血液生理生化指标的测定［J］.中国比较医学杂志，2009，19(9):44-46.

［14］杨锋，王红星，何永亮，等.清洁级、SPF级SD大鼠血液生理、生化测定与比较［J］.四川动物，2008，27(4):648-650.

［15］王菌，楼正清，来伟旗.SD大鼠血液生化指标正常参考值探讨［J］.卫生毒理学杂志，2001，15:122.

［16］YE Pian，ZHANG Shuling，ZHAO Lei，et al.Tea polyphenols exerts anti-hepatitis B virus effects in a stably HBV-transfected cell line［J］.Journal of Huazhong University of Science and Technology:Medical Sciences，2009，29(2):169-172.

［17］付立杰.现代毒理学及其应用［M］.上海:上海科学技术出版社，2001:134-136.

［18］沈建忠.动物毒理学［M］.北京:中国农业出版社，2002:256-258.