长白山区野生毛茛总黄酮的含量测定

秦汝兰，吴昌军

（1.通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化 134002;2.通化师范学院长白山药用植物研究实验室，吉林通化 134002）

毛茛（Ranunculus japonicus Thunb.）是多年生草本毛茛科（Ranunculaceae）毛茛属（Ranunculus）植物，在长白山地区广泛分布，全草入药，味辛，性温，具有利湿、消肿、止痛之功效，中医临床用于主治疟疾、黄疸、偏头痛、胃痛等疾病［1］.毛茛中含有内酯类化合物、黄酮类化合物、皂苷类、生物碱等多种化学成分［2］.近年来，对毛茛的研究主要集中在皂苷类物质分析.但是，对于毛茛中总黄酮的含量测定未见报道.因此，本文以芦丁为对照品，采用分光光度法测定了长白山区野生毛茛的总黄酮含量，以期为更好的开发利用长白山区药用植物毛茛提供一定的参考依据.

1 材料与方法

1.1 试验材料、仪器与试剂

长白山区野生毛茛于2011年8月采自通化师范学院后，经通化师范学院于俊林教授鉴定为毛茛科植物毛茛的干燥全草;TU－1901型双波束紫外－可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司;Sartorius－CP225D电子分析天平，北京赛多利斯仪器有限公司;KQ－200KDB超声波清洗器，昆山市超声波仪器有限公司;芦丁对照品（含量测定用），购自中国药品生物制品检定所，批号:100080－200506;NaNO2，NaOH，Al（NO3）3，乙醇等试剂均为分析纯.

1.2 试验方法

（1）对照品溶液的制备［3］.精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品5.8mg，置50mL容量瓶中，用75%乙醇溶解、摇匀、定容至刻度，制成质量浓度为0.116 mg/ml的对照品溶液，备用.

（2）供试品溶液的制备.取毛茛粉末约5g，精密称定，置于索氏提取器中，加石油醚100ml回流提取2h，放冷，弃去石油醚液，将药渣中石油醚挥干，药渣加75%乙醇40ml超声提取2次，每次30min，合并滤液，浓缩，定容于25ml的容量瓶中备用.

（3）标准曲线的绘制.精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于 10ml刻度试管中制成一系列标准溶液.分别加5%亚硝酸钠0.4ml摇匀，静置 6min，再加 5%硝酸铝 0.4ml摇匀，静置6min，最后加入5%氢氧化钠试液4.0ml，用75%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15min后以相应的试剂为空白，将上述溶液在510nm波长处测定吸光度值.

2 结果与分析

2.1 标准曲线的线性范围

根据标准曲线，计算得到回归方程Y=0.0108X+0.0194，r=0.9996.结果表明芦丁在 11.60 ～58.00ug/ml范围内呈良好线性关系.

2.2 精密度试验

精密量取对照品溶液1ml，置10ml刻度试管中，按（3）项下方法操作，测定吸光度，结果 RSD为1.11%（n=5），表明该方法精密度良好.

2.3 稳定性试验

取供试品溶液1ml，按（3）项下方法操作，每隔10分钟测定其吸光度值，结果吸光度在30min内无明显差异，RSD为1.26%（n=5），表明显色后的供试品溶液在30min内稳定性良好.

2.4 重复性试验

称取毛茛粉末约1g，5份，精密称定，按照（2）项下方法制备供试品溶液，精密量取1.0 ml置于10ml刻度试管中，按照（3）项下方法操作，测定吸光度，结果RSD为1.08%（n=5），表明本方法重现性良好.

2.5 加样回收率试验

取已知含量的毛茛粉末约0.5g，加入芦丁对照品约4mg，按（2）项下方法制备供试品溶液，5份，按（3）项下方法操作，测定吸收度值，结果表明加样回收试验良好（见表1）.

表1 加样回收率试验（n=5）

2.6 样品含量测定

取（2）项下供试品溶液1ml，按（3）项下方法操作，平行3次，测出吸光度值，代入回归方程，计算得到毛茛总黄酮含量为1.81%.

3 讨论

本实验曾对提取方法进行了筛选，实验结果表明，采用连续回流和超声提取相结合的方法，效果最佳，既能去除一部分脂溶性色素的干扰，同时又能使毛茛中总黄酮提取的充分完全，其含量为1.81%.

近年来大量资料研究表明，黄酮类化合物具有降血脂、抗血栓、抗氧化等多种药理作用，广泛用于医药、食品等行业.本实验首次对长白山区野生毛茛中的总黄酮进行了含量测定，为该药材的进一步开发利用奠定了坚实基础，而且该方法简单、易于操作、实验结果可靠.

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［1］江苏新医学院.最新中药大辞典［M］.第1册.北京:中国中医药出版社，2005.

［2］郑威，周长新，张水利，等.毛茛化学成分的研究［J］.中国中药杂志，2006，31（11）:892 －894.

［3］赵亮，刘恩荔，李青山，等.紫外分光光度法测定海红果中总黄酮的含量［J］.山西医科大学学报，2006，37（2）:169－171.