千柏鼻炎胶囊质量标准研究

王秀芹， 林 彤， 顾利红

(1.广州市药品检验所，广东广州510160)

千柏鼻炎胶囊由千里光、卷柏、决明子、麻黄、羌活等七味中药加工制成，为常用中药品种，用于急慢性鼻炎，过敏性鼻炎，鼻窦炎及咽炎等。千柏鼻炎胶囊原质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂 (第十四册)》，其中仅有千里光和麻黄薄层色谱鉴别，以此两项鉴别来控制产品的质量远远不够。为了更好地控制产品质量，提高人民用药安全性，作者对千柏鼻炎胶囊的质量标准进行研究，进一步完善千柏鼻炎胶囊的质量标准。在部颁标准基础上增加决明子和羌活薄层鉴别，同时千里光作为处方中君药，占整个处方量的76%，原标准没有定量测定项，为此采用HPLC法对千里光药材中的主要成分对羟基桂皮酸和金丝桃苷进行定量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津 LC-10AT HPLC色谱仪;SPDM20A检测器;CLASS-VP色谱工作站。

1.2 试药 对照药材:千里光 (批号120964-200707)，决明子 (批号 120923-200912)，麻黄(批号121051-200704)。对照品:大黄酚 (110796-201017)，盐酸麻黄碱 (批号171241-201007)，金丝桃苷 (批号11521-200303)，对羟基桂皮酸 (批号30-2018)。上述对照药材及对照品除对羟基桂皮酸对照品购买于上海中药标准化研究中心外，其余均购自中国药品生物制品检定所。千柏鼻炎胶囊样品 (批号8004、8005、8006)及阴性对照均由广州奇星药业提供。所有试剂除乙腈为色谱纯;其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 鉴别试验

2.1.1 千里光TLC鉴别［1］取本品10粒的内容物，研细，加乙醇40 mL，置水浴中加热回流1 h，滤过，取滤液约15 mL(剩余的滤液备用)，水浴上浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另外称取千里光对照药材25 g，加水后煎煮1 h，滤过，滤液浓缩成稠膏，加乙醇40 mL，同法制成对照药材溶液。取相当于成品量10粒的缺千里光阴性对照品，按同法制备千里光阴性对照溶液。按照TLC法［2］试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL、对照药材溶液5 μL后点于硅胶G薄层板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1)为展开剂进行展开，取出后晾干，喷茴香醛-硫酸-甲醇 (2.5∶2.5∶100)显色剂，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中在对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，并且千里光阴性对照未出现相同颜色斑点。结果见图1。

图1 千里光TLC图谱Fig.1 TLC of Senecionis scandentis Herba

2.1.2 决明子TLC鉴别［3］取2.1.1项下的备用滤液，水浴蒸干后残渣加水10 mL溶解，加盐酸1 mL后置水浴中加热回流30 min，立即冷却，分液漏斗经乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并提取液后挥干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取决明子对照药材1 g，加水适量，电炉上煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至10 mL，按同法制备决明子对照药材溶液。取相当于成品量10粒的缺决明子阴性样品，按同法制成阴性对照溶液。大黄酚对照品以甲醇溶解后制成溶液 (1 mg/mL)作为对照品溶液。按照TLC法［2］试验，吸取供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL、对照药材溶液和大黄酚对照品溶液各 5 μL，分别点于硅胶 H薄层板(0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂)后以石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯—甲酸 (15∶5∶1)展开剂展开，取出后晾干，喷氢氧化钾饱和乙醇溶液后于日光下观察。供试品色谱中，在对照药材色谱及大黄酚对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，决明子阴性对照未出现相同颜色斑点。结果见图2。

图2 决明子TLC图谱Fig.2 TLC of Cassiae Semen

2.1.3 麻黄TLC鉴别 取本品10粒的内容物，加浓氨试液1 mL和三氯甲烷20 mL，置水浴上回流30 min，过滤后蒸干滤液，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取麻黄对照药材1 g，按同法制成对照药材溶液。取相当于成品量10粒的缺麻黄阴性样品，按同法制成阴性对照溶液。盐酸麻黄碱对照品以甲醇溶解后制成溶液 (1 mg/mL)作为对照品溶液。按照TLC法［2］试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于硅胶G薄层板 (0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂)，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (4∶1∶0.1)为展开剂进行展开，取出后晾干，喷以茚三酮试液后于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，分别在与对照药材及盐酸麻黄碱对照品色谱相应的位置显相同颜色红色斑点，麻黄阴性对照未出现相同颜色斑点。见图3。

图3 麻黄TLC图谱Fig.3 TLC of Ephedrae Herba

2.1.4 羌活TLC鉴别［4-5］取本品15粒的内容物，研细，加乙醚20 mL，摇匀，浸泡30 min，滤过后挥干滤液，残渣以乙酸乙酯1 mL溶解作为供试品溶液。另取羌活对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取相当于成品量15粒的缺羌活阴性对照样品，按同法制成阴性对照溶液。按照TLC法［2］试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚 (60～90℃)-乙酸乙酯 (3∶1)展开剂进行展开，取出后晾干，喷5%香草醛硫酸溶液显色剂后于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，羌活阴性未出现相同颜色斑点。见图4。

2.2 定量测定［6-12］

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 Kromasil色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈-0.2%冰醋酸 (15∶85);柱温35℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长310 nm(0～20 min)，360 nm(20～30 min);进样量10 μL。该条件下对羟基桂皮酸峰和金丝桃苷峰与相邻峰分离度均大于1.5，千里光阴性对照无干扰。色谱图见图5。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取对羟基桂皮酸和金丝桃苷对照品适量后分别以甲醇溶解，质量浓度均为30 μg/mL，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 将千柏鼻炎胶囊样品研细后称取约0.5 g，精密称定后置圆底烧瓶中，精密加入75%甲醇25 mL后称定质量，水浴中加热回流1 h后放冷、称定质量，用75%甲醇补足损失的质量后摇匀过滤，取续滤液，即得。

图5 HPLC色谱图Fig.5 HPLC chromatagrams

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取相当于成品量0.5 g的缺千里光阴性对照样品，同法制成千里光阴性对照溶液。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取对羟基桂皮酸和金丝桃苷对照品溶液1、2、5、10、15、20、25 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定，用最小二乘法进行线性回归，得线性方程为对羟基桂皮酸Y=6×108X+6 143.6，r=1;金丝桃苷Y=2×106X-6 521.8，r=0.999 9。结果表明对羟基桂皮酸在0.035 75～0.893 75 μg范围内与其峰面积线性关系良好;金丝桃苷在0.032 86～0.821 5 μg范围内与其峰面积线性关系良好。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，连续测定6次，对羟基桂皮酸峰面积积分值RSD为0.5%，金丝桃苷峰面积积分值RSD为0.8%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取同一批号千柏鼻炎胶囊(批号8004)样品细粉约0.5 g，精密称取6份，按2.2.3项下方法处理并测定，结果对羟基桂皮酸平均质量分数为 1.108 7 mg/g，RSD为 1.3%(n=6);金丝桃苷平均质量分数为0.612 7 mg/g，RSD为2.0%(n=6)。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品 (批号8004)溶液，分别于0、2、4、8、16、24 h测定样品中对羟基桂皮酸和金丝桃苷的含有量，结果对羟基桂皮酸、金丝桃苷含有量的RSD均为1.3%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.2.9 加样回收率试验 取已知含量千柏鼻炎胶囊 (批号8004)的样品粉末约0.25 g，精密称取共6份，置圆底烧瓶中，分别精密加入对羟基桂皮酸和金丝桃苷混合对照品溶液25 mL，称定质量，按2.2.3项下方法制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。

2.2.10 样品测定 取千柏鼻炎胶囊样品3批，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表2。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)Tab.1 Results of recovery tests(n=6)

表2 样品测定结果Tab.2 Determination results of samples

3 讨论

3.1 千里光的薄层色谱鉴别实验中按照原方法喷三氯化铁显色，结果阴性对照有干扰，实验中将喷三氯化铁试液显色改为喷茴香醛-硫酸-甲醇 (2.5∶2.5∶100)溶液，结果供试品溶液显色斑点清晰，且千里光阴性对照无干扰。

3.2 决明子的薄层色谱鉴别为新增加的薄层鉴别，实验方法参照《中国药典》2010年版一部“千柏鼻炎片”的［鉴别］(2)，结果供试品薄层色谱中在与决明子为对照药材相应位置处只有大黄酚一个黄色斑点一致，实验中将其检视方式由紫外光灯(365 nm)下观察改为喷氢氧化钾饱和溶液于日光下检视，结果斑点对应性好，决明子阴性对照无干扰，具有专属性。

3.3 定量测定中曾比较甲醇、75%甲醇、50%甲醇回流1 h的提取效果，结果以75%甲醇为提取溶剂，对羟基桂皮酸和金丝桃苷两者均较完全提取，为此选择75%甲醇为提取溶剂。实验中考察了回流提取30、60 min和90 min的提取效果，结果3个回流提取时间含有量测定结果基本一致，为保证提取完全，最后选择回流时间为60 min。

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