施氮量对小麦氮代谢相关酶活性和子粒蛋白质品质的影响

孟维伟，王 东，于振文

(1山东农业大学农学院，农业部作物生理生态与栽培重点开放实验室，山东泰安271018;2山东省无棣县农业局，山东无棣251900)

氮素对小麦子粒产量和品质有重要影响。施氮或氮磷钾配施均可显著提高子粒蛋白质含量［1－2］。也有研究表明，在较低施氮量条件下，子粒蛋白质含量随施氮量增加而提高，但施氮量超出一定阈值，再增施氮肥子粒蛋白质含量不再增加甚至降低［3］。Saint Pierre等［4］认为，氮素不仅影响子粒蛋白质的数量，亦可调节子粒蛋白质品质，即子粒蛋白质的各组分含量及其比例。随施氮量的增加，醇溶蛋白和谷蛋白含量均逐渐提高［5］。Labuschagne 等［6］则认为，增施氮肥提高了十二烷基硫酸钠可溶性大分子单体蛋白(SDS－soluble larger monomeric proteins)含量，对十二烷基硫酸钠可溶性大分子和小分子聚合体蛋白含量均无显著影响。另有研究认为，子粒蛋白质各组分对氮素反应的差异与小麦品质类型有关［7］。增加施氮量，强筋小麦子粒清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和麦谷蛋白含量提高的幅度较中筋和弱筋小麦大［8］。在不同土壤肥力条件下，蛋白质各组分对施氮的响应亦不同，高肥力条件下，施氮能显著地提高粗蛋白和清蛋白的含量，对其他蛋白组分的作用不大;而低肥力条件下施氮能极显著地提高粗蛋白、清蛋白、醇溶蛋白和麦谷蛋白的含量，对球蛋白影响较小［9］。前人研究表明，谷氨酰胺合成酶(GS)是旗叶中氨同化的关键酶，内肽酶(EP)则是旗叶蛋白质降解的关键酶，二者对子粒蛋白质合成所需氮素的供应有重要影响［10］。已有研究表明，子粒蛋白质含量与旗叶谷氨酰胺合成酶活性呈正相关［11－12］。而有关谷氨酰胺合成酶和内肽酶活性与子粒蛋白质各组分含量的关系鲜见报道。本试验以强筋小麦品种济麦20为材料，采用 Wieser［13］的反相–高效液相色谱法分离子粒蛋白质组分，研究了施氮量对小麦氮代谢相关酶活性和子粒蛋白质品质的影响，以期为优质小麦高产栽培的氮肥运筹提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计

于2003～2004年和2004～2005年小麦生长季进行两年度试验，供试品种为高产强筋小麦济麦20。本文主要以2004～2005年生长季的结果进行分析。

2003～2004 年生长季试验在山东龙口市北马镇中村进行。试验地0—20 cm土层土壤养分含量为：碱解氮84 mg/kg、速效磷11.84 mg/kg、速效钾83 mg/kg。试验在磷、钾肥用量一致的条件下，设置5个施氮量(以纯氮计)，分别为(N kg/hm2)0(CK)、96(N1)、168(N2)、240(N3)、276(N4)，氮肥分两次施入，基施1/2，拔节期追施1/2，P2O5105 kg/hm2、K2O 135 kg/hm2作为基肥一次性施入，氮肥为尿素，磷肥为过磷酸钙，钾肥为氯化钾。小区面积为3 m×8 m=24 m2，3次重复，随机区组排列。2003年10月4日播种，基本苗为150株/m2。田间管理同一般高产田。

2004～2005 年生长季试验在山东农业大学实验农场进行。试验地0—20 cm土层土壤碱解氮含量为49.7 mg/kg、速效磷9.7 mg/kg、速效钾46.6 mg/kg。试验在磷、钾肥用量一致的条件下，设置4个施氮量(以纯氮计)，分别为 N 0、96、168、240 kg/hm2，以 CK、N1、N2、N3 表示，氮肥分两次施入，基施 1/2，拔节期追施 1/2，P2O5105 kg/hm2、K2O 105 kg/hm2作为基肥一次性施入，氮肥为尿素，磷肥为过磷酸钙，钾肥为氯化钾。小区面积为3 m×4 m=12 m2，3次重复，随机区组排列。2004年10月6日播种，于4叶期定苗，基本苗为150株/m2，其他管理措施同一般高产田，2005年6月10日收获。

于开花期在各小区选择同一日开花、发育正常、大小均匀的穗子挂牌标记，自花后7 d开始，每7 d取标记单茎的旗叶30片，经液氮速冻后置－40℃冰柜中，用于旗叶游离氨基酸、谷氨酰胺合成酶和内肽酶活性的测定，每处理重复3次。小麦成熟期取子粒置70℃烘箱烘至恒重以测蛋白质组分含量。

1.2 测定项目与方法

1.2.1 子粒蛋白质含量和组分的测定 采用GB 2905－1982半微量凯氏法测定子粒氮素含量，含氮量乘以系数5.7为蛋白质含量。子粒蛋白质组分含量的测定参照Wieser的方法［13］。色谱系统为美国Waters公司产474色谱仪+996检测器，样品环体积为1.2mL，工作站软件Millium32。色谱柱为Nucleosil 300－5 C8柱(4.6mm ×240mm)。

试剂配制：A液为0.4 mol/L NaCl+0.067 mol/L HKNaPO4(pH=7.6);B液为60%乙醇;C液为50%1－PrOH+2 mol/L尿素+0.05 mol/L Tris-HCl(pH=7.5)+1%DTE(在氮气条件下)。

蛋白质组分提取过程：称取全麦粉100mg于2mL离心管中，加入1.0mL A液，漩涡振荡2min，在20℃条件下用智能型恒温混合器(德国Eppendorf公司产TMC5355型)振荡10 min后，7000 r/min离心15min，连续提取2次，收集上清液，并用提取液定容至2mL(清蛋白 +球蛋白)。残余物中加入0.5mL B液，漩涡振荡2min，在20℃条件下用智能型恒温混合器振荡10min后，7000 r/min离心20 min，连续提取3次，收集上清液，并用提取液定容至1.5mL(醇溶蛋白)。残余物在氮气条件下加入1.0mL C液，漩涡振荡2min后，在60℃条件下用智能型恒温混合器振荡20min，悬浮液在20℃恒温下7000 r/min离心20min，连续提取2次，收集上清液，并用提取液定容至2mL(麦谷蛋白)。样品测定前过0.45μm滤膜，在进样前后分别注入500μL 0.1%(V/V)三氟乙酸，清蛋白+球蛋白、醇溶蛋白、麦谷蛋白进样体积分别为200、80、100μL。

1.2.2 子粒品质测定 用Brabender 880101小型实验磨(德国)制粉，出粉率为60%。面团形成时间和面团稳定时间及吸水率用Brabender 810106002型粉质仪(德国)测定;湿面筋含量用瑞典Perten公司产2200型洗面筋仪，参照GB/T 14608－93测定。

1.2.3 旗叶游离氨基酸含量的测定 采用茚三酮法测定。

1.2.4 旗叶谷氨酰胺合成酶活性测定 酶液提取：取4～5片旗叶，去中脉及首尾部分，剪碎后称取0.5 g，加入6 mL(pH8.0 50 mmol/L)的咪唑 －HCl缓冲提取液(含2 mmol/L的 MgSO4，0.5 mmol/L EDTA，10 mmol/L β － 巯基乙醇)，冰浴研磨，4℃下15 000×g离心20 min，上清液即为酶液。

显色反应：取酶液700 μL两份，分别加入1.6 mL反应混合液A(pH7.8，50 mmol/L的咪唑－HCl缓冲液，含 20 mmol/L的 MgSO4，0.5 mmol/L EDTA，60 mmol/L谷氨酸和10 mmol/L ATP)和1.6 mL反应混合液B(反应混合液A中加入10 mmol/L盐酸羟胺)，混合均匀后，于30℃水浴反应30 min，然后加入1 mL显色剂(0.2 mol/L TCA，0.37 mol/L FeCl3和0.6 mol/L HCl混合液)，摇匀后放置片刻，于5 000×g下离心10 min，取上清液在540 nm波长下测定吸光值。用γ－谷氨酰基异羟肟酸做标准曲线，以加入反应液B和反应液A的吸光值之差，根据标准曲线查得反应生成的γ－谷氨酰基异羟肟酸量，以每克鲜样酶粗液在单位反应时间内催化生成的γ－谷氨酰基异羟肟酸的 μmoL数表示酶活性。

1.2.5 旗叶内肽酶活性的测定 酶液提取：1 g叶片加5 mL pH7.5 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲液(包含4 mmol/L DTT，1 mmol/L EDTA，1%PVP)和少量的石英砂冰浴研磨，然后在15 000×g离心30 min)，上清液用于酶活性的测定。

内肽酶活性测定：酶反应体系由以下组分组成，100 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8)0.4 mL，用pH 4.8醋酸缓冲液溶解的0.05 mol/L牛血红蛋白0.2 mL，酶液0.4 mL。混合反应液于38℃保温1 h，然后加1 mL 10%三氯乙酸终止反应(对照在反应前加入三氯乙酸)，4℃静止30 min，4 000×g离心10 min，上清液用于茚三酮反应，以每克鲜样酶粗液在单位反应时间内生成的氨基酸量表示酶活性。

1.2.6 子粒产量的测定 成熟期调查公顷穗数、穗粒数、千粒重，小麦实收风干后计产，子粒含水率12.5%。

氮肥农学利用率计算：氮肥农学利用率=(施氮区子粒产量－对照区子粒产量)/施氮量［14］。

试验数据及图表处理用Excel 2003及Originpro7.0进行，统计分析和差异显著性检验用DPSv7.05数据处理系统进行。

2 结果与分析

2.1 施氮量对旗叶氮代谢及其关键酶活性的影响

2.1.1 对旗叶游离氨基酸含量的影响 氨基酸是植株中氮化物的主要存在方式和运输形式，为蛋白质的合成和积累提供氮源。由图1可以看出，小麦旗叶游离氨基酸含量花后呈先升后降的趋势，花后7d最高，之后逐渐下降。在开花后0、7、14 d均为N3＞N2＞N1＞CK处理;花后21d，N3、N2＞N1＞CK处理，说明增施氮肥提高了旗叶游离氨基酸的含量，为子粒蛋白质的合成奠定了物质基础。

图1 不同处理对旗叶游离氨基酸含量的影响Fig．1 Effects of different treatments on contents of free amino acids in flag leaves

2.1.2 对旗叶谷氨酰胺合成酶活性的影响 图2显示，旗叶谷氨酰胺合成酶活性在小麦开花后呈持续下降的趋势，不同施氮量之间比较，旗叶谷氨酰胺合成酶活性表现为N3、N2＞N1＞CK，差异显著，而N2和N3处理之间无显著差异。表明适当的增施氮肥增加了小麦旗叶谷氨酰胺合成酶活性，有利于提高氨的同化效率。氮肥过量旗叶谷氨酰胺合成酶活性增加幅度降低。

2.1.3 对旗叶内肽酶活性的影响 由图3可以看出，旗叶内肽酶活性开花后呈先升高后降低的变化趋势。花后21d达最高峰，且花后21d前随施氮量的增加活性显著降低;而21d后，施氮处理的旗叶内肽酶活性逐渐高于对照。说明增加施氮量抑制了小麦灌浆前期和中期旗叶中蛋白质的水解，且促进了灌浆后期旗叶中蛋白质的水解，有利于氮素的再分配。

2.2 施氮量对小麦子粒蛋白质品质的影响

2.2.1 对蛋白质及其组分含量的影响 由表1可以看出，CK处理的各蛋白质组分含量均最低，随施氮量增加蛋白质各组分含量增加，但达到最高值的处理不同，醇溶蛋白在N2处理达到最高值，N3处理与其无显著差异，说明醇溶蛋白对增施氮肥反映敏感;麦谷蛋白和清蛋白+球蛋白含量在施氮量较少的N1处理下，与CK无显著差异，在N3处理达到最高值。

2.2.2 对醇溶蛋白和麦谷蛋白各组分含量的影响由表2可以看出，与不施氮处理比较，增施氮肥显著提高小麦子粒中ω－醇溶蛋白、α－醇溶蛋白及总醇溶蛋白含量，而γ－醇溶蛋白却随施氮量的增加呈先增加后减少的趋势，表明过量施氮不利于γ－醇溶蛋白的积累。

表1 施氮量对子粒蛋白组分含量的影响(%)Table 1 Effect of nitrogen rate on protein component content in grain of wheat

增施氮肥显著提高了高分子量麦谷蛋白亚基(HMW－GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(LMWGS)含量(表2)，其中高分子量麦谷蛋白亚基含量对氮素的效应敏感，表现为N3＞N2＞N1＞CK，处理之间差异显著;低分子量麦谷蛋白亚基为N3＞N2＞N1、CK，N1与CK之间无显著差异。施氮提高了HMW－GS/LMW－GS比值，表现为N3＞N2、N1＞CK，降低了ωb麦谷蛋白的含量。

2.2.3 对面粉湿面筋含量和面团流变学特性的影响 由表3可以看出，湿面筋含量、吸水率、面团形成时间和稳定时间均随施氮量的增加而提高，但是效应不一致。湿面筋含量和面团稳定时间为N3＞N2＞N1＞CK处量，面团形成时间为N3、N2＞N1＞CK，说明湿面筋含量和面团稳定时间比面团形成时间对氮素效应敏感;吸水率受施氮量的影响较小。说明适量增加施氮量可改善与小麦子粒品质相关的一些指标，但是不同指标对增施氮肥量的效应是不同的。

2.3 施氮量对子粒产量及氮肥农学利用率的影响

如表4所示，两年度试验结果趋势一致。2003～2004年生长季，在0～240 kg/hm2施氮范围内，随施氮量增加公顷穗数、穗粒数、子粒蛋白质含量、子粒产量和蛋白质产量均显著提高，施氮量增至276 kg/hm2时，公顷穗数、穗粒数、子粒产量、蛋白质产量和氮肥农学利用率显著降低。2004～2005年生长季，在0～168 kg/hm2施氮范围内，随施氮量的增加公顷穗数、穗粒数、子粒蛋白质含量、子粒产量和蛋白质产量均显著提高，千粒重显著降低，施氮量增至240 kg/hm2时子粒产量和氮肥农学利用率显著降低，公顷穗数、穗粒数、蛋白质产量与168 kg/hm2的施氮量处理无显著差异。

上述结果表明，在本试验条件下，在一定施氮量范围内，随施氮量增加公顷穗数和穗粒数的增加幅度大于千粒重的降低幅度，显著提高了子粒产量;继续增加施氮量，公顷穗数和穗粒数减少或增加幅度降低，导致产量显著降低。综合小麦子粒产量、蛋白质含量、蛋白质品质和氮肥农学利用率可以看出，在本试验条件下，高产优质高效的施氮量为168～240 kg/hm2。

表4 不同施氮量对子粒产量、蛋白质含量及氮肥农学利用率的影响Table 4 Effects of nitrogen rates on grain yield，protein content and nitrogen agronomic efficiency

3 讨论

谷氨酰胺合成酶(GS)是氮同化过程中的关键酶之一，为子粒蛋白质合成提供氨基酸源［15］。内肽酶(EP)是蛋白质水解的关键酶，其活性大小与小麦花后叶片衰老过程中蛋白质的降解及氮素向子粒中的运转密切相关，为子粒中谷蛋白大聚合体的积累补充有效氮源［16］。有研究表明，子粒蛋白质产量与叶片中GS活性的关系密切［17］，子粒蛋白质含量与旗叶GS活性呈显著正相关［11－12］。本试验条件下，在0～168 kg/hm2施氮量范围内，旗叶GS活性与子粒蛋白质含量均随施氮量的增加而显著升高，但施氮量增至240 kg/hm2，GS活性无显著变化，开花后21d的旗叶内肽酶(EP)活性和子粒蛋白质含量仍显著提高，说明提高灌浆后期旗叶內肽酶活性对增加子粒蛋白质含量亦有重要作用。前人研究表明，降低小麦旗叶GS活性，会影响子粒谷蛋白的合成，导致子粒谷/醇比值降低［18］。本试验表明，提高开花后旗叶GS活性和灌浆后期旗叶EP活性，有利于高分子量谷蛋白亚基(HMW－GS)和低分子量谷蛋白亚基(LMW－GS)的积累及HMW－GS/LMWGS比值的提高，这是适量施氮改善子粒蛋白质品质的酶学基础。

有研究认为，氮素代谢和碳素代谢之间存在同化力和碳架的竞争［19］。供氮过多会使叶片C/N比值过低、氮代谢旺盛以及光合产物的输出率降低，造成光合产物对光合器官的反馈抑制，不利于干物质的积累［20］。还有结果表明，在0～300 kg/hm2施氮量范围内，子粒蛋白质含量、形成时间和稳定时间等品质指标均与施氮量呈显著正相关［21］，而子粒产量与施氮量呈二次曲线关系［22］，每公顷施用300 kg氮素仅比施225 kg的处理增产3.1%［23］。本试验条件下，2003～2004年生长季在较高土壤肥力条件下，0～240 kg/hm2施氮范围内，随施氮量增加公顷穗数、穗粒数、子粒蛋白质含量、子粒产量和蛋白质产量均显著提高，施氮量增至276 kg/hm2子粒产量和蛋白质产量均显著降低。2004～2005生长季在较低土壤肥力条件下，0～168 kg/hm2施氮量范围内，随施氮量增加，子粒蛋白质含量、面团形成时间和稳定时间均显著提高，公顷穗数和穗粒数显著增加，子粒产量和蛋白质产量均显著提高;施氮量增至240 kg/hm2，面团稳定时间继续延长，但子粒产量显著降低。说明无论土壤肥力高低，只有适量施氮才能实现子粒品质和产量的同步提高。在一定施氮量范围内，小麦库容(公顷粒数)的扩大及子粒灌浆所需氮源供给能力的提高，增加了单位面积上的氮素和光合产物在子粒中的贮存，是实现子粒品质和产量同步提高的生理原因。

［1］Souza E J，Martin J M，Guttieri M Jet al．Influence of genotype，environment and nitrogen management on spring wheat quality［J］．Crop Sci．，2004，44(2)：425 －432.

［2］付国占，严美玲，蔡瑞国，等．磷氮配施对小麦子粒蛋白质组分含量和面团特性的影响［J］．中国农业科学，2008，41(6)：1640－1648.

Fu G Z，Yan M L，Cai R Get al．Effects of application of phosphorus combined with nitrogen fertilizer on contents of grain protein components and dough rheological characteristics in wheat［J］．Sci．Agric．Sin．，2008，41(6)：1640 －1648.

［3］王月福，姜东，于振文，等．氮素水平对小麦子粒产量和蛋白质含量的影响及其生理基础［J］．中国农业科学，2003，36(5)：513－520.

Wang Y F，Jiang D，Yu Z Wet al．Effects of nitrogen rates on grain yield and protein content of wheat and its physiological basis［J］．Sci．Agric．Sin．，2003，36(5)：513 －520.

［4］Saint Pierre C，Peterson C J，Ross A Set al．Winter wheat genotypes under different levels of nitrogen and water stress：Changes in grain protein composition ［J］．J．Cereal Sci．，2008，47(3)：407－416.

［5］赵广才，常旭虹，杨玉双，等．施氮量和比例对冬小麦产量和蛋白质组分的影响［J］．麦类作物学报，2009，29(2)：294－298.

Zhao G C，Chang X H，Yang Y Set al．Grain yield and protein components responding to the amount and rate of nitrogen application in winter wheat［J］．J．Tritic．Crops，2009，29(2)：294 －298.

［6］Labuschagne M T，Meintjes G，Groenewald F P C．The influence of different nitrogen treatments on the size distribution of protein fractions in hard and soft wheat［J］．J．Cereal Sci．，2006，43(3)：315－321.

［7］石玉，张永丽，于振文．施氮量对不同品质类型小麦子粒蛋白质组分含量及加工品质的影响［J］．植物营养与肥料学报，2010，16(1)：33－40.

Shi Y，Zhang Y L，Yu Z W．Effects of nitrogen fertilization on protein components contents and processing quality of different wheat genotypes［J］．Plant Nutr．Fert．Sci．，2010，16(1)：33 －40.

［8］程兵，王珏，殷允春，等．施氮量对不同品质类型小麦蛋白质及组分的影响［J］．青岛农业大学学报(自然科学版)，2010，

27(4)：289－292.Cheng B，Wang J，Yin Y Cet al．Effects of nitrogen application on the contents and components of protein in wheat［J］．J．Qingdao Agric．Univ．(Nat．Sci．)，2010，27(4)：289 －292.

［9］吴国梁，崔秀珍，宋小顺，等．不同土壤肥力条件下施氮量对强筋小麦产量和蛋白质组分的影响［J］．河南农业科学，2004，(10)：46－49.

Wu G L，Cui X Z，Song X Set al．Effects of nitrogenous fertilizer application on the yield and protein component of strong gluten wheat under different soil fertilities［J］．J．Henan Agric．Sci．，2004，(10)：46－49.

［10］孙永健，孙园园，李旭毅，等．水氮互作下水稻氮代谢关键酶活性与氮素利用的关系［J］．作物学报，2009，35(11)：2055－2063.

Sun Y J，Sun Y Y，Li X Yet al．Relationship of activities of key enzymes involved in nitrogen metabolism with nitrogen utilization in rice under water-nitrogen interaction［J］．Acta Agron．Sin．，2009，35(11)：2055－2063.

［11］王小纯，熊淑萍，马新明，等．不同形态氮素对专用型小麦花后氮代谢关键酶活性及子粒蛋白质含量的影响［J］．生态学报，2005，25(4)：802－807.

Wang X C，Xiong S P，Ma X Met al．Effects of different nitrogen forms on key enzyme activity involved in nitrogen metabolism and grain protein content in speciality wheat cultivars［J］．Acta Ecol．Sin．，2005，25(4)：802 －807.

［12］赵鹏，何建国，熊淑萍，等．氮素形态对专用小麦旗叶酶活性及子粒蛋白质和产量的影响［J］．中国农业大学学报，2010，15(3)：29－34.

Zhao P，He J G，Xiong S Pet al．Studies on the effects of different nitrogen forms on enzyme activity in flag leaves in wheat and protein and yield of grain for specialized end-uses［J］．J．China Agric．Univ．，2010，15(3)：29 －34.

［13］Wieser H，Antes S，Seilmeier W．Quantitative determination of gluten protein types in wheat flour by reversed-phase high-performance liquid chromatography［J］．Cereal Chem．，1998，75：644－650.

［14］刘立军，桑大志，刘翠莲，等．实时实地氮肥管理对水稻产量和氮素利用率的影响［J］．中国农业科学，2003，36(12)：1456－1461.

Liu L J，Sang D Z，Liu C Let al．Effects of real-time and sitespecific nitrogen managements on rice yield and nitrogen use efficiency［J］．Sci．Agric．Sin．，2003，36(12)：1456 －1461.

［15］戴廷波，曹卫星，孙传范，等．增铵营养对小麦光合作用及硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶的影响［J］．应用生态学报，2003，14(9)：1529－1532.

Dai T B，Cao W X，Sun C Fet al．Effect of enhanced ammonium nutrition on photosynthesis and nitrate reductase and glutamine synthetase activities of winter wheat［J］．Chin．J．Appl．Ecol．，2003，14(9)：1529 －1532.

［16］王小燕，于振文．不同小麦品种主要品质性状及相关酶活性研究［J］．中国农业科学，2005，38(10)：1980－1988.

Wang X Y，Yu Z W．Differences in characteristics of quality and related enzymes activity of different wheat cultivars ［J］．Sci．Agric．Sin．，2005，38(10)：1980 －1988.

［17］Xie Z J，Jiang D，Cao W Xet al．Effects of post-anthesis soil water status on the activities of key regulatory enzymes of starch and protein accumulation in wheat grains［J］．J．Plant Physiol．Biochem．，2003，29(4)：309－316.

［18］赵辉，荆奇，戴廷波，等．花后高温和水分逆境对小麦子粒蛋白质形成及其关键酶活性的影响［J］．作物学报，2007，33(12)：2021－2027.

Zhao H，Jing Q，Dai T Bet al．Effects of post-anthesis high temperature and water stress on activities of key regulatory enzymes involved in protein formation in two wheat cultivars［J］．Acta Agron．Sin．，2007，33(12)：2021－2027.

［19］Evans R J．Nitrogen and photosynthesis in the flag leaf of wheat(Triticum aestivumL) ［J］．Plant．Physiol．，1983，72(2)：297－302.

［20］曹翠玲，李生秀．供氮水平对小麦生殖生长期间叶片光合速率、NR活性和核酸含量及产量的影响［J］．植物学通报，2003，20(30)：319－324.

Cao C L，Li S X．Effect of nitrogen level on the photosynthetic rate，NR activity and the contents of nucleic acid of wheat leaf in the stage of reproduction［J］．Chin．Bull．Bot．，2003，20(3)：319－324.

［21］张耀兰，曹承富，杜世州，等．施氮水平对不同类型小麦产量和品质的影响［J］．麦类作物学报，2009，29(4)：652－657.

Zhang Y L，Cao C F，Du S Zet al．Effect of nitrogen on yield and quality of different types of wheat［J］．J．Triticeae Crops，2009，29(4)：652－657.

［22］曹承富，孔令聪，汪建来，等．施氮量对强筋和中筋小麦产量和品质及养分吸收的影响［J］．植物营养与肥料学报，2005，11(1)：46－50.

Cao C F，Kong L C，Wang J Let al．Effeats of nitrogen on yield，quality and nutritive absorption of middle and strong gluten wheat［J］．Plant Nutr．Fert．Sci．，2005，11(1)：46 －50.

［23］赵广才，常旭虹，刘利华，等．施氮量对不同强筋小麦产量和加工品质的影响［J］．作物学报，2006，32(5)：723－727.

Zhao G C，Chang X H，Liu L Het al．Effect of nitrogen application on grain yield and processing quality in different strong gluten wheats［J］．Acta Agron．Sin．，2006，32(5)：723 －727.