鱼肉中硝基苯残留量检测

2012-08-24赵全东刘铁钢

时代农机 2012年11期

郭军，赵全东，刘铁钢

（吉林省水产科学研究院，吉林长春 130000）

我们参考各种农残食品分析方法和水中硝基苯的检测方法，根据硝基苯的物理化学性质，经过大量实验验证。采取丙酮匀浆提取鱼肉中的硝基苯，水蒸气提取纯化，正己烷萃取，无水硫酸钠+氧化铝柱净化，浓缩，GC，ECD检测器检测的方法检测鱼肉中的硝基苯。

1 试验

（1）试剂和仪器。所有试剂在硝基苯出峰处应无干扰峰，最好选择优级纯或色谱纯试剂。丙酮：色谱纯。正己烷：色谱纯。无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。中性氧化铝：层析用，100-200目，650℃灼烧4h，加5%（W/W）去离子水脱活，震荡1h后，放置过夜。硝基苯标准品：购于国家标准物质中心。氯化钠：分析纯。水：实验用水符合GB/T 6682中一级水标准。

实验室常规仪器、设备及下列各项：气相色谱仪：agilent 6890N、配63Ni电子捕获检测器；电子天平：0.0001g；匀浆机；离心机：4000r/min、100ml；电热恒温水浴锅；旋转蒸发器；Snyder浓缩柱；水蒸气蒸馏装置；无水硫酸钠+氧化铝净化柱：在玻璃层析柱下端放入少量玻璃棉，依次干法装入4g氧化铝和10g无水硫酸钠。轻敲柱壁，使填充物尽可能致密。

（2）色谱条件。色谱柱：HP-5石英毛细管柱，固定相：甲基硅油，30m×0.32mm×0.5μm载气：氮气，载气流量：1.0mL/min保持至 6min；0.5ml/min2→1.2ml/min 保持至 8min；1.2ml/min→最后。进样口温度：240℃。温度程序：初始柱温40℃，维持1min；20℃/min→120℃，维持 1min；15℃/min→240℃；检测器：63Ni电子捕获检测器；温度：300℃。进样方式及进样量：无分流方式进样，自动进样1μL。

（3）标准曲线。将硝基苯标液用正己烷稀释定容，配成浓度为 0.0202 μg/mL、0.0606 μg/mL、0.101 μg/mL、0.1414 μg/mL、0.202μg/mL的标准使用液。采用以上色谱条件进样，进样量1ul,以峰面积为纵坐标、标物浓度为横坐标，建立校准曲线回归方程：

Area=1912.013×Amt-11.397

R=0.9955

Area:峰面积

Amt:标准的量（浓度）

2 样品的预处理和测定

（1）样品预处理。鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，每一样品总样品量不低于50g，放置冰箱中-18℃冷冻贮存备用。

（2）提取。将样品解冻，称取样品10g（精确到0.01g），置于50mL匀浆机试管中，加入丙酮25mL，匀浆机匀浆2min，分散均匀，提取硝基苯，4000r/min离心5min，收集上清液。转移鱼样品至匀浆机试管中，再加入丙酮20mL匀浆2min，同上条件离心分离，合并上清液。将丙酮提取液置于500mL圆底烧瓶中，在105℃温度下，水蒸气蒸馏出300ml，并置于500mL分液漏斗中，向其中加入20gNaCl，用每次20ml正己烷萃取2次，静止分层30min，再用200ml硫酸钠水溶液反萃正己烷萃取液一次，弃去水相。将正己烷萃取液过无水硫酸钠+氧化铝净化柱（柱内径12mm，10g无水硫酸钠（上层）+4克氧化铝）。

（3）浓缩。用10mL正己烷洗涤分液漏斗和无水硫酸钠脱水柱，一并和正己烷萃取液置于旋转蒸发器中，旋转蒸发浓缩至10mL，将10mL浓缩液转移至K.D浓缩瓶中，Snyder柱浓缩至0.6mL左右，以正己烷定容至1mL。GC/ECD测定。

（4）样品测定。分别注入1μL适当浓度的硝基苯标准溶液及样品提取物溶液于气相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积；响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，外标法定量如图1所示。

NB：硝基苯