膜式法与离心法TCT检测结果的对比分析

2012-08-21蓝云飞罗志峰

中国医学创新 2012年31期

蓝云飞罗志峰

宫颈癌是我国妇女最常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率仅次于乳腺癌位居第二，它是感染性疾病，是可以预防、可以治愈的疾病[1]。近年来，我国宫颈癌的发生率有上升和年轻化趋势[2-3]。宫颈液基薄层细胞学检测（TCT）是细胞学发展里程碑式的突破，按照TBS（The Bethesda System）诊断标准，能为临床早期诊断宫颈病变提供有力证据，尤其是CIN检出率达到60%左右。宫颈细胞学是诊断和发现宫颈癌及其癌前病变的有效手段[7]。宫颈癌及癌前病变的早期诊断是提高宫颈癌治疗率及生存率的关键。笔者所在医院于2006年6月开展TCT，用于宫颈病变的筛查检测，因而大大提高了宫颈病变的检出率，使患者得到早发现，早诊断，早治疗，有效降低宫颈癌的发病率。2006年6月-2011年5月用膜式法TCT检测，2011年6月开始用离心法（Cytospin）TCT检测。工作中笔者不经意发现离心法TCT阳性病例不少，随意抽取两个时段的相同病例数以两种方法TCT检测结果进行对比分析，探讨不同方法对提高TCT检出率的作用，现将分析结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年1-12月和2011年5-12月笔者所在医院妇科门诊分别有2000例患者接受TCT检查。年龄17～73岁，平均年龄36岁，将4000例患者按时间段分成两组，一组是用膜式法TCT检测2000例，设为膜式组；另一组是用广州柏嘉生物科技有限公司Cytospin TCT离心法检测2000例，设为离心组。

1.2 方法 CytospinTCT离心法，取样标本保存液瓶、宫颈细胞刷、吸管和滤网薄膜是由广州柏嘉生物科技有限公司提供，膜式法耗材是另外一家公司提供，标本由清远市妇幼保健医院妇科门诊取材，病理科完成制片和同一医生阅片。

1.3 取材方法充分暴露宫颈后用宫颈刷紧贴宫颈管口顺时针旋转5圈，取宫颈管、宫颈移行带及宫颈表皮细胞，然后将刷头取下放入盛有固定液的标本瓶中密封并送检。取样前若有过多黏液或分泌物必需用棉签檫拭干净然后再取样，以保证取样为宫颈细胞样品。膜式法取材与离心法取材基本相同，只是各家细胞保存液和制片方法不同。膜式法是通过仪器高速打散标本瓶内的细胞，然后通过负压将细胞吸在过滤薄膜上，再将薄膜上细胞转移印压在玻片上，2 min制成1张薄片。而离心法是通过离心力分散、过滤、转移等功能，精确使细胞贴附在限定区内制成12 mm×20 mm的薄片，4 min制成6～12张薄片。两种方法制定薄片均用95%酒精固定，巴氏染色。

1.4 诊断标准按TBS诊断标准专人分类报告。分别报告为上皮内低度病变（LSIL）、上皮内高度病变（HSIL）、鳞癌（SCC）、非典型腺上皮（AGC）和腺癌（AIS）。

1.5 统计学处理采取SPSS 11.0软件进行统计分析，计数资料采取字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2009年2000例宫颈细胞标本采用膜式法TCT检测，标本满意例数1910例，满意率为95.5%（1910/2000）。其中低度鳞状上皮内病变（LSIL）236例，检出率为11.8%（236/2000）；高度鳞状上皮内病变（HSIL）27例，检出率为1.35%（27/2000）；鳞癌1例，检出率为0.05%（1/2000）；非典型腺上皮（AGC）0例，检出率为0（0/2000）；腺癌0例，检出率为0（0/2000）；2011年2000例宫颈细胞标本采用离心法（Cytospin）TCT检测，标本满意数有1997例，标本满意率为99.9%（1997/2000）。其中低度鳞状上皮内病变（LSIL）305例，检出率为15.3%（305/2000）；高度鳞状上皮内病变（HSIL）40例，检出率为2%（40/2000）；鳞癌（SCC）3例，检出率为0.15%（3/2000）；非典型腺上皮（AGC）6例，检出率为0.3%（6/2000）；腺癌（AIS）2例，检出率为0.1%（2/2000）。LSIL、HSIL、SCC、AGC、AIS均有病理组织学证实。两组宫颈病变检出与标本满意情况见表1。

表1 两组宫颈病变检出与标本满意情况例（%）

3 讨论

宫颈癌的早诊、早治是提高宫颈癌治愈率及生存率的关键，而细胞学检测是宫颈癌早期病变筛查的主要手段。我国是一个有13 亿人口的发展中国家，国民的生活水平在发达的东部沿海地区和人口众多的西部欠发达地区之间很不一致，就是东部发达地区也有很大的差别，因此在考虑大众的健康问题时，必须要采用适宜的医学技术，将一些经济实用型技术广泛引入贫困人群的疾病筛查中[7]。Cytospin TCT细胞学技术其保存液能很好保存宫颈各类病变细胞，在4 min内可同时制作6～12张薄层长方形的细胞片，细胞分布均匀，巴氏染色效果好，尤其适合工作量大或体检任务多的单位使用，避免单张制片的繁琐[4]。在实际工作中体会到柏嘉公司这一套仪器及耗材经济、实惠，制片简便快捷，细胞薄片达到TBS诊断标准的要求，非常实用于我国、尤其是西部欠发达地区开展宫颈癌筛查使用，可替代传统的宫颈细胞涂片，造福于广大的妇女同胞。

TCT是近十年发展起来的一项新的检测技术，检测方法有膜式法、沉淀法和离心法。膜式法制片过程分为3个步骤：（1）分散：是仪器旋转瓶内的过滤柱状桶分离随机聚合在一起的细胞微粒。（2）收集：轻微的负压作用于滤膜上，将细胞吸附在滤膜表面。（3）转送：过滤柱状桶又转到玻片上，由于细胞的自然吸附性和玻片的静电作用，细胞对玻片比对滤膜更具附着力。玻片与滤膜分开并放入固定液容器中[7]。我们随意用膜式法TCT检测2009年的病例2000例，用离心法TCT检测2011年的病例2000例，检测结果对比分析发现，对LSIL、HSIL、鳞癌、非典型腺上皮、腺癌阳性检出率和标本满意率存在差异。膜式法与离心法的临床取材方法步骤相同，标本保存都是湿保存，只是保存液的量不同，离心法的保存液10 ml量少使标本细胞浓度高，同时保存液有一定去除血液、黏液、非诊断性杂质的作用，而膜式法保存液20 ml量多使标本细胞浓度低，我们认为这可能是导致两法制片的满意度差异大的重要原因。

对宫颈癌及癌前病变的检出率Cytospin TCT离心法明显高于膜式法TCT，许多病理界同道从不同方向研究得出类似结果。尤燕等研究认为Cytospin离心式液基薄层细胞学检测（TCT）对宫颈癌和CIN的阳性检出率高，因此可以把TCT作为首选的宫颈癌普查方法，不仅适用于体检，而且具有重要的临床实用价值[4]。孙艺等研究亦认为Cytospin TCT细胞技术能明显提高宫颈异常细胞的检出率，且与病理诊断有较高的一致性，是宫颈病变筛查的有效方法，具有重要的临床实用价值[5-6]。任丽芳等用改良CytospinTCT作免疫组化得出改良cytospin法优于TP （液基薄层制片法，Thinprep，TP）法行免疫细胞化学染色[5]。笔者完全赞同支持上述论文的观点，20世纪中叶，第一台Cytospin问世，作为液基细胞薄片制片仪，开创了细胞离心涂片机的先河。迄今，世界各地逾16 000多所实验室在使用Cytospin。Cytospin以其独特的制片原理，精确地控制细胞离心力并在限定区域内作薄层制片，成为近40年来细胞学薄层制片技术倍受信赖的仪器。马博文[7]教授亦撰文指出“离心法即Cytospin离心机式制片装置，又称细胞离心涂片机（Cytospin），是利用离心旋转的原理制备细胞学涂片的一种仪器，由于其兼有离心、过滤、旋转、转送等综合功能，成为细胞学实验室必备的仪器设备”。

为何两种方法在非典型腺上皮和腺癌的检出率上存在明显差异（P<0.05），笔者认为是制片方法不同所致，膜式法是通过仪器高速旋转打散标本瓶内的细胞，然后通过负压将细胞吸在过滤薄膜上，再将薄膜上细胞印压在玻片上。在仪器高速作用下，对腺上皮细胞的结构容易破坏，这样不利于对非典型腺上皮和腺癌细胞的辨认。而离心法是通过离心力分散、过滤、转移标本中的细胞成分，使其在一限定范围12 mm×20 mm形成细胞薄片，因此对细胞结构破坏少，宫颈腺上皮病变比较容易发现（图1、2）。因此，离心法TCT技术对诊断宫颈非典型腺上皮和腺癌病变有一定优势。从两组研究结果分析可以看出，离心法TCT标本满意率亦比膜式法高。宫颈癌及癌前病变阳性检出率明显优于膜式法TCT。