冷沉淀制备的关键控制环节

苏红 谭爱玲 许少英 胡文娟 车胡毓

冷沉淀是新鲜冰冻血浆在1 ℃～4 ℃条件下不溶解的白色沉淀物，其中主要含有五种成分：纤维蛋白原(Fg)、FⅧ、血管性假血友病因子(vWF)、凝血因子XⅢ、纤维结合蛋白(Fn)等多种成分。冷沉淀是存在于血液中的一种功能性成分，具有广泛的生理功能和很高的临床应用价值。近年来，冷沉淀的应用已突破传统的用于甲型血友病、纤维蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治疗，在临床肿瘤手术、多发伤和手术创伤、弥散性血管内凝血(DIC)、深度烧伤、黏膜和皮肤疾病、自发性气胸、糖尿病足等方面得到广泛应用，并且取得了显著的效果。冷沉淀中FⅧ 因子极其不稳定，FⅧ的体内生物半衰期变化较大，一般为8～12 h，其活性易丧失[1-2]。新鲜速冻血浆(FFP)融化后，FⅧ因子活性随着时间的延长而有明显的降低，其活性衰减了41.17%[3]。从全血采集到新鲜冰冻血浆的制备再到冷沉淀的制备的很多环节都会影响冷沉淀的最终质量。因此，笔者通过实际工作中证明，在制备冷沉淀过程中注意把握关键环节，才能制备出优质的冷沉淀。

1 资料与方法

1.1 一般资料 冷沉淀原料浆来源：本中心流动采血车采集的四联袋全血，要求在6 h之内制备并冻结成块的且各项检测合格的新鲜冰冻血浆。

1.2 仪器设备 美国 SORVALL RC-12BP大容量冷冻离心机，费森尤斯 Compomat G4血液分离机，低温操作台，低温周转冰箱，4 ℃贮血冰箱/恒温水浴箱，塑料卡子，MBF21血浆速冻机、热合机。

1.3 方法

1.3.1 制备优质的冷沉淀原料浆 (1)全血(原料)的选择：制备冷沉淀选择采血顺畅、采集到的全血及时将资料录入电脑后即放贮血专用冰箱储存。目前我国自愿无偿献血已取代计划无偿献血，多以街头采血为主，接血司机应按规定及时将血接回中心待检库。(2)保持良好的冷链系统：街头采集的血液应储存在2 ℃～6 ℃冰箱中，血液从采血点到待检库的运输必须装入已降温的血液专用隔热冷藏箱中，不能放入常温容器更不能仅用塑料袋包装。(3)尽快低温分离成分血：血液从全血到分离成红细胞和血浆操作过程，要尽量缩短暴露于室温下的时间，因此尽快并保持低温分离是保证血液质量、减少FⅧ 因子衰减的关键。把握好时间、温度这两个关键环节，能够最大限度减少血浆中FⅧ等不稳定成分的损失，得到优质的新鲜冰冻血浆，新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ含量必须≥0.7 IU/ml[2]。

1.3.2 制备优质的冷沉淀 (1)设备的准备：采用冰箱融化法制备时，需提前10～14 h将原料浆放在4 ℃贮血冰箱内融化，每层摆放200 ml血浆10袋(室温超过30 ℃进摆放13袋)。每部冰箱放5层，血浆之间不能重叠，使其融化成带小冰碴的糊状半流质。采用恒温摇摆式水浴融化法制备时，原料血浆提前放入预置温度为2 ℃的融化箱中，制备当日解冻期间将离心机温度设定在0 ℃～4 ℃ ，并打开低温操作台及开始预冷血浆速冻机使温度降至-50 ℃。做好设备预设达到适合该成分血温度要求是保证产品质量的一个关键环节。(2)融化冷沉淀原料血浆：将血浆轻放入血浆解冻箱，启动解冻程序，在2 ℃循环水浴中自行融化，随时观察血浆的融化情况，此环节可设定时钟。由于血浆融化需99～120 min，定时钟可提醒工作人员，避免出现融化过度的情况。选择恰当的融化终点很关键，以笔者经验，当多数血浆融化至冰块直径4～5 cm、厚度约l cm时，终止融化最为恰当。经过配平、离心，待分离时，冰块基本融化剩少量冰渣，冷沉淀达最佳分离状态。如果选择冰渣量很少或基本无冰渣为终点，就会融化过度，待分离时，有的会出现冷沉淀溶解的状况，造成冷沉淀含量降低；如果选择终点提前，冰块过大，会造成冷沉淀容量超标。快速在低温操作台上配平血浆，在已降温的离心机离心。美国 SORVALL RC-12BP大容量冷冻离心机可设0 ℃～4 ℃、4036 g、8 min。尽快分离热合速冻。(3)质量标准：由200 ml FFP制备的冷沉淀：FVⅢ含量≥80 IU/200 ml，Fg含量≥(150～200)ml，容量(25±5)ml/袋。符合质量标准则为合格[4]。

2 结果

笔者所在中心2010年2-5月份冷沉淀质量控制结果显示，被抽检16份冷沉淀中有12份合格，4份不合格，每月抽检的冷沉淀都有一份不合格，不合格率25%。不合格原因均为FⅧ 因子含量达不到80 IU。通过对上述各个环节的不断改进和控制，2010年6-9月份冷沉淀质量控制科抽检16份全部合格，合格率为100%。

3 讨论

冷沉淀制备的质量控制涉及到全血的采集、储存和运输、分离以及新鲜冰冻血浆的融化、分离、入库等诸多环节，任何一个环节的失控，都会影响到冷沉淀的最终质量。质量控制的关键是减少冷沉淀中的不稳定成分FⅧ 因子的损失。在工作量大时，要先分离用做冷沉淀原料浆的血液，减少FⅧ因子损失。分离出的血浆尽快置-50 ℃血浆速冻机30 min速冻成型后，移入-18 ℃以下冰箱保存，留作冷沉淀原料浆。冷沉淀原料浆各袋容量差别最好不超30 ml，这样能保证基本同步融化。若容量差超过40 ml，血浆融化程度差别很大，影响冷沉淀质量。本中心已全部采用费森尤斯 Compomat G4血液分离机分离血浆，按照设定的程序进行操作，容量达到标准化，避免了人为做成的容量差异，为制备优质的冷沉淀打下良好基础。密闭式分离在低温操作台上进行，所得冷沉淀成品入库前应放在低温操作台上，注意尽量降低环境温度。因FⅧ的活性随温度的升高破坏很大，所以控制的核心内容是保持血液的冷链系统，最大限度地减少血液/血制品在常温下的时间。尽快放到速冻机复冻后将冷沉淀在-18 ℃以下冰箱保存。控制好设备和环境温度、制备的最佳时间等环节，才能保证制备出合格优质的冷沉淀。要保证各个环节的的严格受控，制备优质的冷沉淀，除了配备必要的设备外，还要提高员工的质量意识和效率意识，提高专业技能，两个方面缺一不可。

[1]田兆嵩.临床输血进展(何子毅，田兆嵩，冷沉淀的临床应用)[M].成都：四川科学技术出版社，2010：9.

[2]杨孝顺，安梅，阮光萍，等.冷沉淀在临床外科手术中的应用[J].中国输血杂志，2005，18(3)：255-257.

[3]杨江存，李芒会，于青，等.新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化[J].中国输血杂志，2005，18(3)：2l1-2l2.

[4]中华人民共和国国家标准.GB18469-2001.全血及成分血质量要求[S].北京：中国标准出版社，2002：9-10.