中国农业大学动物医院犬生化检验项目参考区间的建立

何玉英，陈江楠，张 琼，夏兆飞

（中国农业大学动物医学院，北京 海淀 100193）

动物血清或血浆生化检查是兽医诊所常用的常规检查项目，可用于评估机体的多种代谢和生理过程，用于帮助诊断疾病、麻醉前检查和体检。如今，台式生化分析仪在全世界范围内的动物医院已变得很常见，因此定期检查分析该项目的状况，保证获得可信、可靠和准确的结果对兽医来说是很重要的。临床生化检查所得结果需与相应动物的正常参考区间（reference intervals，RI）相比较，才能判定所得结果是否存在异常［1］。可见RI对临床实验室检验结果的判读是很重要的。但目前多数动物医院所用的RI多直接取自教材，或由仪器制造商提供，在多数情况下，并未说明获得RI的群体情况，如动物数量、年龄和会影响结果的因素，同样未说明建立RI所用的统计方法。此外，随着社会和科学技术水平的发展，动物的饲养管理和品种，以及生化指标检测方法都已发生变化，以前所建立的RI很可能已经过时。因此，为保证生化检查项目在临床的合理利用，有必要建立符合目前实际情况的RI。

1 材料与方法

1.1 调查对象 本调查选择2011年10月1日至2012年3月31日前来中国农业大学动物医院就诊的30只健康成年犬作为检验对象。本试验所选取的均是前来医院进行常规体检和绝育／去势手术的健康成年犬，平均年龄为2.73岁，年龄范围为1～7岁。对每只犬都详细地进行病史记录和体格检查，只有未表现任何疾病症状（包括厌食、嗜睡、抑郁、共济失调、高热、脱水、贫血、黄疸、黏膜苍白、呼吸困难、肿胀、眼鼻分泌物、呕吐或腹泻），且体温、体重、脉搏和呼吸状况均正常的犬才可参与该试验。

1.2 主要试剂与仪器 所使用的仪器包括日本东芝40生化仪、美国MEDICA电解质分析仪Eayslyte Plus和北京时代北利离心机有限公司的DT5－3离心机。共检测20项指标（见表1），其中钙试剂由利德曼厂家提供，其余试剂由中生试剂厂家提供，所有试剂均在有效期内。

1.3 检测方法 使用一次性注射器抽取每只犬2 mL血液，移入促凝管，待血液凝固后，3500r／min离心5min，留取上清液进行各指标的检测，具体方法见表1。

1.4 统计方法 使用SPSS 13.0软件对各指标的检测结果进行Kolmogorov－Smirnov正态性检验，数据属于正态性分布的，采用X±2S表示；属于偏态分布的采用百分位数法（双侧），用P（2.5～97.5）表示。采用与已知均值比较的单样本t检验进行显著性检验，已知均值用1／2（下限＋上限）表示，偏态分布数据因对照参考值P50位的具体值难以确定，故与参考值上限进行比较。

表1 生化指标检测方法

2 结果

本调查的统计结果见表2和表3。

本调查统计所得的AST、Na＋和Cl－的RI要窄于现用RI，且差异显著（P＜0.05），α－AMY 和 K＋的RI的最大值要低于现用RI，且差异极显著（P＜0.01）；GLU的RI的最大值显著高于现用RI（P＜0.05），CK、ALB、GGT和ALP的RI的最大值极显著高于现用RI（P＜0.01）。

表2 偏态分布项目

表3 正态分布项目

3 讨论

现今动物医院所使用的生化RI大多数是指群体中间95%的值，也就是说，群体中5%的健康个体的值是落在RI之外的。因此，没有一个RI是完全“正确”或“错误”的，只有切合实际情况的RI才是最好的［2］。

动物的生化RI取决于许多因素，包括环境、年龄、品种、性别、营养状况、活动情况和采样方法等。如Tian等（2005）研究发现来自不同区域、不同供犬者的比格犬的ALT、AST和BUN值之间有差异［3］。Nielsen等（2010）发现与标准RI不同，大丹犬的 ALP、GGT、AMY 和γCHO 的 RI宽度更大［4］。Kley等（2003）发现寻回犬的 TP值较低［5］。Fukuda等（1999）发现性别会影响犬的TP、CRE、AST、ALT和 ALP值［6］。

本调查中，AST、AMY、CK、GGT 和 ALP的RI与现用RI有差异。本调查统计所得犬的AST的RI为16～35U／L，现用RI为8～38 U／L，而Tian等（2005）统计所得比格犬的AST的RI为5.9～64.7U／L［3］，Kley等（2003）统计所得成年犬的AST的RI为16～96U／L［5］。可见，本调查所得AST的RI均落在上述RI内。许多动物组织都含AST，在肝脏和骨骼肌含量较多。犬的品种、性别、年龄和环境都会对AST值产生影响，推测正是由于参与本调查的犬所处地域、品种、年龄和性别分布情况与其他调查研究有差异，导致RI存在差异。此外，在比较酶的RI时，很重要的一点是要知道检测时的温度。例如，在37℃检测所得ALP和CK活性是在30℃时检测的两倍［7］。

本调查统计所得犬的AMY的RI为249～1175U／L，而现用 RI为300～2000U／L，Kley等（2003）调查研究所得AMY的RI为249～1767U／L［5］，可见现用RI的上限设定过高。但是AMY的半衰期很短，AMY值可能会在几天内发生极显著变化，因此最好是在几天内取一系列样本进行测定。本调查统计所得犬的CK的RI为48～346U／L，现用RI为8～200 U／L，其他调查研究所得RI为28～1516U／L［5］、45～135 U／L［8］和60～359 U／L［9］。可见在不同调查研究中所获得的CK的RI差异均很大，这是由于犬的CK值在个体内差异很高，可能与个体间差异一样高，变异相关系数范围高达13%～35%，其中导致个体内差异的主要因素是活动量，如灰猎犬和西伯利亚爱斯基摩犬在赛跑后，CK值可上升至高于上限13倍［9］。此外，生化检查结果可能由于采样操作不正确，使得血管周围组织污染血样，导入了基质或酶，导致结果受影响，如CK值会因采样时扎针方法不准确，导致值升高［10］。本调查统计所得GGT的RI为1.1～7.4U／L，现用RI为0～6.4U／L，其他调查研究所得RI为1～9U／L［5］，可见现用GGT上限略低。本调查统计所得ALP的RI为7～119U／L，现用RI为0～80U／L，其他调查研究所得 RI为13～336.4 U／L［3］和8～234U／L［5］，可见现用 RI宽度过窄，上限值过低。ALP是一种在大多数组织（骨、肠、肾和肝）均存在的酶，其活性随年龄增长而降低［5］。应注意使用基于群体而获得的RI来评判生化结果的前提假设群体存在同质性。而基于群体的RI的诊断敏感度取决于RI的宽度是由个体内或个体间差异导致的。如果主要由个体间差异导致，那么基于群体的RI对个体本身的变化不敏感。对于犬的ALP来说，个体间差异占主导地位，因此基于群体决定的ALP的RI的诊断敏感度不高，也就是说ALP的RI的临床诊断意义不大［4］。

本调查统计中，Na＋、K＋、Cl－、GLU和 ALB的RI与现用RI存在差异。其中Na＋、K＋和Cl－的RI虽然与现用RI有差异，但均落在现用RI之内。早期血浆／血清中的离子检测是使用火焰光谱法，现在多用离子电解技术检测，但两种方法检测所获得的RI差异均不显著。本调查统计所得GLU的RI为5.1～7.9mmol／L，现用 RI为3.3～6.7mmol／L，其他调查统计所得为3.26～7.29mmol／L［5］。除了疾病因素外，临床上影响GLU值的因素主要是采样时动物挣扎、应激，导致GLU升高［5］。此外，如果采样后不及时将血浆与红细胞分离，会导致红细胞内物质进入血浆或红细胞消耗血浆内的一些物质（主要是葡萄糖），使测定结果不准确［11］。本调查统计所得ALB的RI为30～42g／L，现用RI为24～38g／L，其他统计调查结果为21.5～40.3g／L［3］和27.4～43.1g／L［5］。可见，ALB现用 RI的上限偏低，这可能是由于随着经济发展，现今犬的饮食质量得到极显著改善，饮食中蛋白质含量和质量均得到提高，导致犬消化吸收的蛋白含量升高，体内蛋白合成增加，循环系统中蛋白水平升高。

综上所述，本调查统计所得的 AST、AMY、CK、GGT、ALP、Na＋、K＋、Cl－、GLU和 ALB的RI与现用RI存在差异，说明为在临床通过生化检查获得更准确的诊断结果，有必要根据实际情况统计建立合适的RI。

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