老年骨肉瘤组织中生存素与组织蛋白酶D的表达及关系

徐远坤 陈久毅 (贵阳中医学院第一附属医院骨科，贵州 贵阳 550001)

生存素(Survivin)是新发现的抑制凋亡蛋白，在肿瘤发生及进展中有重要作用〔1〕。组织蛋白酶D(Cath-D)作为雌激素调节的溶酶体蛋白酶，具有促进细胞有丝分裂、松解细胞黏附的能力，进而促进癌细胞转移〔2〕。目前对老年骨肉瘤组织中Survivin及Cath-D的表达未见报道。本实验应用免疫组织化学技术检测老年骨肉瘤组织Survivin及Cath-D的表达，探讨其在不同临床特征中的表达差别。

1 材料与方法

1.1 材料 2004年1月至2009年6月我院行骨肉瘤手术后存留的蜡块组织作为骨肉瘤组。纳入标准:①经两位病理专家确诊;②患者术前均未进行任何放、化疗。骨肉瘤组70例，年龄60～83〔平均(69.45)〕岁，其中男40例，女30例。选取同期70例老年良性骨肿瘤术后蜡块组织作为对照组，其中骨样骨瘤60例，骨母细胞瘤10例，年龄60～81(平均68.36)岁，其中男40例，女30例。两组患者在性别、年龄等一般临床特征的比较中，无明显差别，具有可比性。

1.2 免疫组织化学方法 Survivin及Cath-D(购自武汉博士德生物技术有限责任公司)检测应用免疫组化S-P法，实验步骤严格按照说明书，均由同一病理学技师完成，严格质量控制。

1.3 结果判定标准 Survivin及Cath-D蛋白阳性染色均定位于细胞质中，计算高倍镜下(×400)随机选择的10个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率，取平均值，计算阳性反应细胞的百分率。以≥10%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应的细胞数＜10%为阴性。

1.4 统计学处理 采用SAS6.12软件进行组间χ2检验和线性相关分析。

2 结果

2.1 两组Survivin及Cath-D阳性表达比较 骨肉瘤组Survivin〔50例(71.43%)vs 21例(30.00%)〕及Cath-D蛋白阳性表达率〔55例(78.57%)vs 24例(34.29%)〕显著高于对照组(χ2=24.0335，P ＜0.0001;χ2=27.9187，P ＜0.0001)。

2.2 骨肉瘤组中不同临床特征患者Survivin和Cath-D的表达骨肉瘤组Survivin和Cath-D在有、无软组织浸润及不同Ennecking分期中阳性表达率有显著差异(P＜0.01)。见表1。

表1 骨肉瘤组不同临床特征患者Survivin和Cath-D阳性表达率的比较〔n(%)〕

2.3 骨肉瘤组Survivin和Cath-D表达的关系 骨肉瘤组Survivin和Cath-D的表达进行线性相关分析，结果显示Survivin和Cath-D表达呈正相关(r=0.42，P=0.0129)。

3 讨论

老年骨肉瘤患者多为继发性，且病情发展快，肿瘤可于数月内通过血道出现肺部转移，因此其恶性程度高，预后极差。在此过程中，机体与转移相关的基因和蛋白相对活跃，对病变具有明显促进作用。Survivin基因定位于17q25，编码含有142个氨基酸，是分子量为16.5 kD 的蛋白质〔3，4〕。Survivin具有抑制细胞凋亡，干扰细胞周期，调节细胞分裂，参与肿瘤微血管形成的功能，也是目前发现的最强的凋亡抑制因子〔5〕。Cath-D是一种溶酶体中天冬氨酸肽链内切酶，具有肽链内切酶活性，在肿瘤侵袭和转移中发挥作用，Cath-D的促有丝分裂活性有利于肿瘤生长。而且Cath-D还可以作为雌激素调节的溶酶体蛋白酶，具有分解细胞外基质(ECM)与松解细胞黏附的能力，进而导致癌细胞的转移，同时具有促进细胞有丝分裂作用〔6〕。Cath-D作为一种蛋白水解酶，活化后可以直接催化基底膜和ECM的降解，形成局部溶解区，构成肿瘤细胞移动的通道，并间接破坏血管基膜〔7〕。有研究认为癌细胞对Cath-D合成较正常组织多，分布形态也不同，易于分泌到细胞外〔6〕。还有观点认为肿瘤侵袭和转移时，瘤细胞自脱离原瘤灶到转移灶的过程中，至少应穿越两次血管壁并向周围组织侵袭，而此过程中，Cath-D、胶原酶、血纤溶酶原激活剂均起重要作用，因此，Cath-D高表达可以有效促进肿瘤侵袭和转移。

本实验结果提示Survivin和Cath-D对骨肉瘤发生发展有重要作用，骨肉瘤组中Survivin和Cath-D均与有、无软组织浸润及不同Ennecking分期有关，由于有、无软组织浸润及不同Ennecking分期均与患者的预后密切相关，因此术后对骨肉瘤标本进行Survivin和Cath-D免疫组化检测，可能对判断患者预后有一定价值。侵袭和转移是恶性肿瘤生物学行为的重要标志，是导致死亡和影响预后的主要原因之一。本实验结果提示Survivin和Cath-D可能相互作用，但是其具体调节机制尚不清楚。有观点显示Survivin和Cath-D均可以促进血管内皮生长因子的表达〔8〕，因此，Survivin和Cath-D是否通过中介蛋白血管内皮生长因子起作用尚需证实。当Survivin和Cath-D激活后，二者分泌明显增多，可以直接催化ECM降解，并间接破坏血管基膜，而且Cath-D还可以激活组织蛋白酶B，从而触发链式反应，引发更广泛的侵袭和转移。而且Survivin和Cath-D协同作用时，还参与肿瘤相关蛋白的水解级联反应，共同促进老年骨肉瘤的生长、侵袭和转移。

1 吉向民.Surivivin和MMP-9在骨肉瘤中的表达及意义〔J〕.中国现代医生，2010;48(4):72-3.

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3 孙彩勤，胡景岚.PTEN、Survivin在子宫内膜癌中的表达及临床意义〔J〕. 中原医刊，2006;33(14):51-3.

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5 匡小根，蒋先镇.Survivin、MMP-2在肾透明细胞癌组织中的表达及关系〔J〕.医学临床研究，2007;24(7):1115-7.

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7 Vasudev NS，Sim S，Cairns DA，et al.Pre-operative urinary cathepsin D is associated with survival in patients with renal cell carcinoma〔J〕.Br J Cancer，2009;101(7):1175-82.

8 Shariat SF，Youssef RF，Gupta A，et al.Association of angiogenesis related markers with bladder cancer outcomes and other molecular markers〔J〕.J Urol，2010;183(5):1744-50.