HPLC法测定桃仁膝康丸中芍药苷的含量

杜天信 李 洁

（1 河南省正骨研究院，河南 洛阳 471002；2 河南中医学院，河南 郑州 450008）

桃仁膝康丸是“世界非物质文化遗产”“平乐郭氏正骨”的传统药物之一，由桃仁、白芍、红花等十余味中药组成处方，具有活血止痛，祛风湿，补肝肾之功效，用于治疗骨关节病早期关节疼痛，屈伸不利，膝部疼痛等症。为了更好地控制产品质量，本文采用高效液相色谱法对白芍中芍药苷的含量进行了测定。

1 实验材料

1.1 实验仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪；DAD检测器，Agilent化学工作站；色谱柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5µm）；XS205DU电子天平（梅特勒-托利多有限公司）。

1.2 药品与试剂

芍药苷对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号：110736-201035）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5µm）；流动相：乙腈-水（13∶87）；检测波长230nm；流速1.0 mL/min；柱温30℃。理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇配制成浓度为0.1532mg/mL的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇30mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45µm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

按处方比例和样品制备方法制成缺白芍的阴性制剂，再按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.5 专属性试验

按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取阴性样品溶液、对照品溶液及供试品溶液各20µL，注入液相色谱仪测定。结果显示，阴性样品在芍药苷保留时间处无干扰峰，结果见图1。

图1 桃仁膝康丸HPLC图谱

2.6 线性关系考察

分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液4µL、8µL、12µL、16µL、20µL，注入色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。以芍药苷进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:Y=756.56X+67.5，r=0.9999。结果表明，芍药苷进样量在0.6128～3.0640µg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液20µL，注入液相色谱仪，连续进样5次，按“2.1”项下色谱条件测定，以芍药苷峰面积计算，RSD为0.82%，试验表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于配置后0、1、2、4、8h，精密吸取20µL，注入色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。结果芍药苷峰面积RSD为1.84%，表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.9 重复性试验

精密称取同一批号（20100205）供试品5份，分别按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液20µL，按“2.1”项下色谱条件测定，结果样品中芍药苷的平均含量为0.71mg/g，RSD为2.04%，结果表明本方法重现性良好。

表1 桃仁膝康丸中芍药苷加样回收率试验

2.10 加样回收率试验

取已知含量（0.66 mg/g）的同一批号样品适量，精密称定，称取6份，分别精密加入浓度为0.1585mg/mL的芍药苷对照品溶液10mL，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备样品溶液，分别精密吸取20µL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。结果见表1。

2.11 样品含量测定

取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算芍药苷含量，结果见表2。

表2 三批样品含量测定结果

3 讨 论

试验考察了稀乙醇、50%甲醇和甲醇的提取效果[1-3]，发现用稀乙醇提取时，芍药苷含量较高，故采用稀乙醇作为提取溶剂。另外，实验还比较了不同比例的流动相[4-6]：乙腈-水（14∶86）、乙腈-水（13∶87）、乙腈-水（12∶88）、乙腈-水（17∶83），结果发现，流动相为乙腈-水（13∶87）时，基线平稳，芍药苷可达到较好分离，且分析时间短，阴性无干扰。

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