四种维药对常见呼吸道病毒作用的体外实验研究

李际强 王怀振 买买提艾力·吐尔逊 李 黎 刘 妮 张奉学

(1.广州中医药大学第二附属医院，广东 广州 510120;2.新疆喀什地区第一人民医院，新疆 喀什 844000;3.广州中医药大学热带医学研究所，广东 广州 510405)

维吾尔医药是祖国医药学不可分割的组成部分，也是伊斯兰医药学的重要组成部分。几千年来维吾尔族人民在防病治病的过程中，积累了丰富的经验，尤其是其在治疗感冒方面，现已有多种维药成药上市，应用于临床显示了较好的疗效。随着呼吸道传染病的多发与流行，该类维药是否可以用于治疗病毒性呼吸道传染病，除临床研究外，尚需进一步提供实验室依据。本文选取4种维药进行体外抗常见呼吸道病毒的研究，现将研究结果报道如下。

1 材料

1.1 药物来源:复方祖帕糖浆由喀什地区维吾尔医院提供，为院内制剂，产品批号:201201006;西帕依固龈液由新疆奇康哈博维药有限公司提供，产品批号:11148;祖卡木颗粒由新疆奇康哈博维药有限公司，产品批号:111053;感通丹(史秘感通丹)由新疆萨达凯特生物科技有限公司、奇康哈博制药有限公司提供，产品批号:110906。实验时将复方祖帕糖浆、西帕依固龈液取原液进行稀释，祖卡木颗粒2.55g加纯水5ml，史秘感通丹称5.09g加纯水5ml。煮沸半小时进行灭菌处理，1.5ml管分装4℃冰箱，祖卡木颗粒冷却后有大量黄色沉淀析出，再加热不能溶解。

1.2 毒株与细胞:甲1型流感病毒、鼻病毒、腺病毒3型、呼吸道合胞病毒，均为广州中医药大学热带医学研究所病毒室冻存。甲1型流感病毒FM1株于狗肾细胞(MDCK)传代，以细胞病变及鸡红血球血凝法来判断其滴度;呼吸道合胞病毒long株引自美国典型培养物收藏中心(ATCC，VR-26)，并于人肺癌细胞(A549)中传代扩增，并进行测定;腺病毒3型引进自ATCC(VR-3);鼻病毒R14型引进自ATCC(VR-284)均于人肺二倍体细胞(HEL)细胞上传代，滴定与检测，以上4种病毒均在35℃，5%CO2条件下培养。MDCK、HEL、A549等细胞均由广州中医药大学热带医学研究所病毒室冻存。

2 方法［1］

2.1 药物毒性试验:在96孔培养板内，每96孔培养板内，每孔加入(5×104～2×103/ml)的细胞(HEL、MDCK、A549)，37℃ 5%CO2培养，待细胞长成单层后，分别加入不同浓度的4种药物。逐日观察细胞病变，培养4 d后则终止实验，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药对细胞无毒界限。试验时设阳性药对照、正常细胞对照。

2.2 药物对病毒致细胞病变的体外抗病毒作用:分别加入无毒浓度下的4种药物，分4个浓度，每浓度4孔。其中2孔作为药物对照，2孔攻击100 TC ID50的病毒，100μl/孔。33℃5%CO2培养，每天在倒置显微镜下观察细胞病变(CPE)并记录。试验时设阳性药对照、正常细胞对照及病毒对照。当病毒对照出现“++”时终止实验。细胞出现病变的程度按以下6级标准记录:一为细胞生长正常，无病变出现;±为细胞病变少于整个单层细胞的10%;+为细胞病变约占整个单层细胞的25%;++为细胞病变约占整个单层细胞的50%;+++为细胞病变约占整个单层细胞的75%:++++为细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。

3 结果

3.1 药物的细胞毒性试验结果见表1:药物在以下表中浓度时对细胞无毒性，在该浓度以上表现为细胞空泡，破碎等毒性特征。

表1 药物在不同细胞上最大无毒浓度结果

3.2 药物对病毒致细胞病变的体外抗病毒作用:史秘感通丹在无毒浓度50mg/ml下能完全抑制流感病毒甲型FM1株，西帕依固龈液在无毒浓度1:200倍稀释时能完全抑制腺病毒3型所致病变，复方祖帕糖浆、祖卡木颗粒分别在无毒浓度1:300、15.94mg/ml下能完全抑制呼吸道合胞病毒。其中抗流感病毒A型FM1株、腺病毒实验重复2次，结果与表2一致。

表2 4种维药不同浓度对4种呼吸道病毒致病变的抑制作用

4 讨论

维吾尔族医药在治疗感冒等常见病方面积累了较丰富的经验，目前已出现较多的上市药物。为了明确该类维药是否具有抗常见呼吸道病毒作用，我们对多种维药进行了体外抗病毒筛选，结果表明部分维药显示了较好的体外抗病毒作用。

感通丹，全称为史秘感通丹，由甘草根、神香草、薄荷、大叶破布木等药物组成，用于寒、热引起的各种普通感冒、流行性感冒，临床症状表现为头痛、发热、喷嚏、流涕、鼻塞、咽喉痛、全身酸痛乏力、食欲不振、咳嗽等。感通丹在无毒浓度50mg/ml下能完全抑制流感病毒A型FM1株，表明了其良好的抗流感病毒作用。

西帕依固龈液是新疆维吾尔医学研究所在维吾尔医学传统秘方基础上研制的漱口制剂，主要成分为没食子。该药物在临床及实验室研究中均表现出较好的抗细菌及抗真菌的作用［2-3］，但未见其抗病毒方面的研究，我们研究发现，西帕依固龈液在无毒浓度1:200倍稀释时能完全抑制腺病毒3型所致病变，因此，该药具一定的抗菌、抗病毒作用。

复方祖帕糖浆为新疆喀什地区维吾尔医医院的院内制剂，由神香草、新疆园枣、铁线厥、葫芦巴、甘松、香没药树子、茴香根皮、芹菜根、骛尾根、小茴香等药物组成，具有润肺、纳气、止咳等作用，应用于肺炎、支气管炎及感冒等。本研究表明，复方祖帕糖浆在1:300无毒浓度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

祖卡木颗粒由山柰、睡莲花及罂粟壳等药味的提取物组成，具有调节异常气质、清热、发汗、通窍等作用，用于感冒咳嗽，发热无汗，咽喉肿痛，鼻塞流涕等。临床报道表明，其治疗儿童普通感冒快速有效，而且安全［4］。本研究表明，祖卡木颗粒在15.94mg/ml无毒浓度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

以上维药显示了一定的体外抗病毒作用，尤其是史秘感通丹抗流感病毒甲1型作用明显，需进一步深入探讨该药物的抗流感病毒的作用机理。

［1］富杭育，卢长安，贺玉琢，等.清肺饮抗小鼠流感病毒性肺炎的实验研究［J］.中华实验和临床病毒学杂志，1996，10(4):381

［2］李婷，吴佩玲，闫亮.含漱西帕依固龈液或H202对牙体治疗中细菌性气雾的影响［J］.实用口腔医学杂志，2010，26(4):556-557

［3］李泽慧，聂晶，钟良军，等.西帕依固龈液和没食子体外抗白色念珠菌的活性测定［J］.中华老年口腔医学杂志，2010，8(3):148-149

［4］杨锡明.祖卡木颗粒治疗儿童感冒的临床疗效及安全性［J］.中国当代医药，2010，17(3):79