HPLC法测定复方芩兰口服液中连翘苷的含量

2012-07-28李延雪邵礼梅

中国医药导报 2012年26期

李延雪孙菲邵礼梅

黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江鸡西 158100

复方芩兰口服液由金银花、黄芩、连翘、板蓝根四味中药经适宜加工方法制成的中药口服制剂，收载于《国家中成药标准汇编》内科肺系（一）分册[1]，具有辛凉解表，清热解毒的功效，用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。据文献报道[2]，连翘是一种广谱而有效的抗微生物药物，体外试验对许多种细菌有抑制作用，连翘对某些真菌亦有抑制作用。连翘苷作为连翘的主要成分，测定连翘苷的含量具有一定的意义。其原标准中没有连翘的含量测定方法和标准，为完善质量控制方法，参考相关文献[3-8]以连翘苷为测定指标，建立了复方芩兰口服液中连翘苷含量测定的高效液相色谱（HPLC）法，现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010A高效液相色谱仪（岛津）：LC-2010紫外检测器，在线脱气机，四元泵，自动进样器，LC solution色谱工作站，色谱柱为 Agilent Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；KQ-400KDE型高功效数控超声波清洗器，AG-285电子分析天平，TU-1901型双光束紫外可见光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2 试药

对照品连翘苷（中国药品生物制品检定所，批号：110821-200609）；复方芩兰口服液（批号：20110907、20110908、20110909）；中性氧化铝（上海陆都化学试剂厂；粒度：100～200目；层析用）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（25∶75）；检测波长：278 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30℃。理论板数按连翘苷峰计算不低于5000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取经减压干燥12 h的连翘苷对照品10.32 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇约60 mL超声10 min，加50%甲醇至刻度，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品5支混合均匀，精密量取本品 1 mL，加在中性氧化铝柱（粒度：100～200 目，6 g，内径为1 cm）上，用70%乙醇40 mL洗脱，收集洗脱液，将洗脱液置水浴上蒸干，残渣加50%甲醇3 mL，温热使溶解，转移至5mL量瓶中用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备取缺连翘的阴性样品，参照供试品溶液的制备方法，制得缺连翘的阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 阴性干扰试验分别精密吸取“2.2“项下3种溶液各10 μL，注入液相色谱仪。结果供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液色谱相应位置上有色谱峰，阴性对照溶液色谱图中则无此峰，表明在该条件下，阴性样品不干扰连翘苷的测定，见图1。

图1 复方芩兰口服液HPLC色谱图

2.3.2 线性关系考察精密吸取上述对照品溶液2、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标（Y），以对照品进样浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程为 Y=6.2935×103X＋1.6672×103，r=1.0000（n=5）。表明连翘苷在 20.64～206.40 μg/mL 范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验精密吸取上述对照品溶液按上述色谱条件，连续进样5次，每次10 μL，测定连翘苷峰面积，连翘苷峰面积平均值为326389，RSD为0.74%（n=5），实验结果表明，在该条件下仪器精密度良好。

2.3.4 重现性试验分别精密量取样品（批号：20110909）6份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，结果连翘苷的平均含量为 0.493 mg/mL，RSD=0.68%（n=6），表明方法重现性较好。

2.3.5 稳定性试验精密吸取同一批供试品溶液（批号：20110909），分别于配制后 0、2、4、6、8、12、24 h 进样，记录每次进样的峰面积。结果连翘苷的峰面积RSD=0.97%（n=7），表明供试品溶液在配制后24 h内基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验取已知含量的样品（批号：20110909，连翘苷含量为0.493 mg/mL）6份，每份精密量取本品0.5 mL，以两份为一组，共三组，每组分别精密加入连翘苷0.3955、0.4935、0.5920 mg，按供试品溶液的制备方法制备并测定含量，计算回收率，结果见表2。