子宫颈鳞癌中 PTEN、C-myc、P27的表达及其临床意义

郭艳萍，杨广英，王建君，孙 丽，李 军

(郑州人民医院 病理科 河南郑州 450002)

肿瘤的发生发展是一个多步骤的过程，是多种癌基因的激活和抑癌基因的失活或缺失、细胞凋亡基因表达的紊乱导致的。子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，其发生发展、侵袭转移是多因素共同作用的复杂的病理过程。PTEN 又称为(MMAC1/TEP1)基因［1］，是至今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，在调控细胞生长及细胞调亡过程中发挥重要作用，并与肿瘤细胞的侵袭、转移能力密切相关。C-myc基因是发现较早的原癌基因之一。其编码蛋白具有转录因子活性，有促进细胞增殖、调节细胞周期、抑制细胞分化、参与细胞凋亡的作用。P27为一种抑癌基因，其表达产物P27蛋白参与调控细胞周期和细胞凋亡，为细胞周期负性调控因子［2］。本研究采用免疫组化SP法检测PTEN蛋白、C-myc蛋白和P27蛋白在正常宫颈黏膜上皮、宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)及宫颈鳞癌中的表达，进而探讨其与宫颈鳞癌发生发展、侵袭转移的关系，以及三者的相关性，为宫颈癌诊断和治疗提供更为有效的判断指标。

1 材料与方法

1.1 材料 收集郑州人民医院2007年至2010年经活检或手术病理检查的存档蜡块标本，其中正常宫颈黏膜上皮标本40例、CINⅡ-Ⅲ标本40例和宫颈鳞癌标本40例，年龄(41.0±0.5)岁，有淋巴结转移标本18例、无淋巴结转移标本22例，组织学分级高分化17例、低分化23例;浸润深度＜1/2肌层28例，＞1/2肌层12例。全部标本由有经验的病理医师确诊，采集前未治疗。

1.2 试剂和方法 实验用兔抗人PTEN多克隆抗体、P27单克隆抗体均购自北京中山生物公司。生物素-链霉菌抗生物素SP免疫组化试剂盒、鼠抗人C-myc单克隆抗体及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司。免疫组化(SP法)组织蜡块做4μm连续切片，烤片后脱蜡和水化，3%H2O2孵育10 min，灭活内源性过氧化物酶，高压抗原修复20 min。SP三步法进行染色，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封固。

1.3 结果判断 PTEN蛋白染色阳性在细胞膜或胞质内出现黄色颗粒，C-myc蛋白阳性表达主要定位于细胞核，以胞核或胞质出现明显的黄色或棕黄色颗粒视为阳性着色;P27以细胞核内出现棕黄色染色为阳性细胞。每张切片检测10～20个视野(倍数×400)，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计1 000个细胞，计算出每张切片的阳性百分数。

1.4 统计学方法 所有数据采用SPSS 13.0统计学软件进行处理，阳性率之间的比较采用χ2检验(包括校正)，两变量之间的相关性检验采用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 PTEN、C-myc和P27在不同宫颈病变组织中的表达 PTEN和P27正常宫颈黏膜上皮、宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)及宫颈鳞癌中的表达逐渐降低，及C-myc表达的逐渐增高，差异具有统计学意义(P＜0.05);PTEN、C-myc和P27在有、无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者癌组织中的阳性表达率，比较差别有显著性意义(P＜0.05);在浸润深度＜1/2肌层、＞1/2肌层中宫颈鳞癌组织中PTEN、C-myc和P27阳性表达率间的差别也具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 PTEN、C-myc和P27在不同病变宫颈组织中的表达

2.2 PTEN、C-myc和 P27之间的相关性结果PTEN和P27的表达具有相关性(P＜0.01)，二者与C-myc无相关性。

表2 PTEN和P27的相关性

3 讨论

3.1 宫颈癌组织中PTEN蛋白表达及意义 PTEN是迄今为止发现的第1个具有双特异性磷酸激酶活性的抑癌基因。PTEN基因定位于染色体 10q23.3。PTEN具有脂质磷酸酶活性，使磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸(PIP3)去磷酸化，负性调节PI3K途径，使细胞凋亡和(或)抑制细胞周期进程，并诱导其停止G。期，从而抑制细胞生长繁殖［3］。PTEN还具有蛋白磷酸酶活性，可抑制有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径。MAPK具有酪氨酸蛋白激酶活性，PTEN通过拮抗促生长的蛋白酪氨酸激酶而抑制肿瘤的生长和增殖［4］。PTEN还能使聚集粘连激酶(FAK)去磷酸，抑制其活性，负性调节细胞的粘连、转移和浸润［5］。由此可见PTEN主要通过其双重底物特异性磷酸酶活性，经由PI3K信号系统和MAPK信号级联途径发挥肿瘤抑制作用，对细胞生长、凋亡、增殖及黏附产生影响。现已发现在多种原性恶性肿瘤和肿瘤细胞系中均有PTEN的基因改变［6］。近年研究发现，在子宫内膜癌、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、肺癌及胃癌等多种肿瘤中存在PTEN基因的缺失或(和)突变。但是其与宫颈癌的关系研究较少，且结论不甚一致。张晨丽［7］等研究发现PTEN在子宫颈鳞癌中阳性表达率为34.5%，在正常子宫颈组织中阳性表达率为88.2%，两者差异有显著性(P＜0.01)。PTEN在淋巴结未转移组中阳性表达率明显高于淋巴转移组(P＜0.01)。PTEN表达与临床分期呈负相关，而与患者年龄、病理分级无相关性(P均＞0.05)。舒宽勇［8］等研究发现宫颈癌组PTEN蛋白表达率明显高于慢性宫颈炎组，与有关宫颈癌PTEN基因突变编码蛋白表达下调的报道不相符，本研究发现PTEN蛋白在宫颈癌组织中阳性表达(32.10%)明显低于宫颈上皮内瘤变(CIN Ⅱ-Ⅲ)(50.00%)、正 常 宫 颈 黏 膜 上 皮(87.50%)，且与宫颈癌组织的分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移呈明显相关性，分化程度越低、浸润越深、有淋巴结转移时PTEN蛋白表达明显降低，表明PTEN蛋白表达水平下调或缺失在一定程度上促进了细胞的恶性转化和肿瘤的形成。

3.2 宫颈癌组织中P27蛋白表达及意义 P27是周期依赖性蛋白激酶抑制剂家族(cyciin dependentkinase inhibitors，CDKIs)的成员之一，其表达产物P27蛋白在人体多种恶性肿瘤细胞增殖和分化的调控中起着非常重要的作用，它的过度表达可使细胞周期停止在G1中期［9］。Palmqvist等［10］采用免疫组织化学方法研究了89例结直肠癌组织中的P27表达，发现P27蛋白低水平表达很普遍。本研究发现P27蛋白在宫颈癌组织中明显低表达，仅为12.50%，且在低分化和有淋巴结转移及浸润深层的肿瘤细胞中表达缺失更加明显，随着肿瘤分化程度降低，P27表达也降低，提示P27基因在宫颈癌进展中逐渐失去细胞周期负调控能力，使癌细胞具有更高的恶性程度，这提示P27与肿瘤的预后及生物学行为有关。在无淋巴结转移组P27蛋白阳性率(50.00%)明显高于有淋巴结转移组(27.27%)，表明P27蛋白在宫颈癌的进展及转移过程中逐渐丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌作用，使得癌细胞具有更高的恶性程度和侵袭力。另外P27蛋白缺乏还可导致细胞间粘附力下降，使肿瘤容易转移。

3.3 C-myc基因是发现较早的原癌基因之一 其编码蛋白具有转录因子活性，有促进细胞增殖、调节细胞周期、抑制细胞分化、参与细胞凋亡的作用。国外报道在女性乳腺癌中C-myc基因扩增率在15.7%～25.0%不等，过度表达的阳性率为22%～45%［11］。Rao［12］等认为C-myc在良性增生、非典型增生、乳腺癌中的基因扩增是逐渐递增的。C-myc基因扩增在乳腺癌的发生、发展过程中具有重要的作用。有研究认为，在乳腺癌中标记肿瘤内部异质性的是C-myc和Cyclin D1的扩增，而不是CerBb-2的扩增［13］。这从侧面证明，C-myc基因扩增在乳腺癌的发展中起着重要作用。赵云霞等研究显示，C-myc的表达与乳腺癌分级、淋巴结转移、病理类型相关。组织学分级高低、淋巴结有无转移、临床病理类型相关。本研究显示，C-myc的表达与宫颈癌组织的分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移呈明显相关性，分化程度越低、浸润越深、有淋巴结转移时C-myc蛋白的表达越高，表明C-myc蛋白表达水平增高在一定程度上促进了细胞的恶性转化和肿瘤的形成。

3.4 PTEN、C-myc和P27蛋白在宫颈癌组织中表达的相关性 作为PTEN的下游靶分子之一，P27起着PTEN和底物间的桥梁作用。Bruni等［10］研究甲状腺癌发现P27的表达在癌组织中下降，PTEN的表达与之平行，二者之间存在着密切的关联。An等［14］报道在子宫内膜癌病例中PTEN和P27蛋白表达存在相关性。本研究发现宫颈癌组织中PTEN和P27蛋白表达具有相关性(P＜0.05)，提示PTEN可能通过上调P27的表达来抑制细胞周期，达到抑制肿瘤发展的作用。C-myc与二者的关系有待研究。

［1］Pennisi E.New tumor suppressor found-twice［J］.Science，1997，275(5308):1876-1878.

［2］郭光红，马振滨，边瑞民，等.P27在胃癌中的表达及意义［J］.滨州医学院学报，2006，29(1):6-8.

［3］柯细松.PTEN抑癌机制的最新进展［J］.国外医学·遗传学分册，2001，24(4):194-197.

［4］Hamada Sasaki T，Koni P A，et a1.The PTEN/P13K pathway Governs normal vascular development and tumor angiogenesis［J］.Genes Dev，2005，19(17):2054-2065.

［5］周琦，叶学正，唐郢，等.抑癌基因PIEN在宫颈癌中的表达及与预后的关系［J］.肿瘤学杂志，2007，13:121-122.

［6］AIU.Gatekeeper for endometrium:the PTEN tumor suppressor gene［J］.J Natl CancerInst，2000，92(11):861-863.

［7］张晨丽，张煦，史淑霞，等.子宫颈鳞状细胞癌中Stat3和PTEN的表达及意义［J］.临床与实验病理学杂志，2008，24(4):419-421.

［8］舒宽勇，熊树华，王晨，等.抑癌基因PTEN在宫颈癌变中的表达及意义［J］.中国肿瘤，2007，16(8):654-655.

［9］Goel A，Arnold C N，Niedzwieeki D，et a1.Frequent inacfivation of PT＇EN by promoter hypermethylation in miemsatellite instability-hish sporadic coloreetal cancers［J］.Cancer Res，2004，64(9):3014-3021.

［10］Bmni P，Boecia A，Baldassarre G，et al.PTEN expression is reduced in a subset of A sporadic thyroid carcinomas:evidence that PTEN growth suppressing activity in thyroid cancer ells is mediatedby P27 kipl［J］.Omogene，2000，19(28):3146-3155.

［11］NaiduR，Wahab N A，Yadav M，et al.Protein experession and molecular analyasis of Cmy-c gene in primary brest carcinomas as using immunohistochemistry and differential pomerase chain reaction［J］.Mol Med，2002，9(2):189-196.

［12］Rao J Y，Apple S K，Jin Y，et al.Comparative polymerase chain reaction analyasis of Cmy-c gene amplification archival breast fine needle aspiration materials［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.2000，9(2):175-179.

［13］Glockner S，Buurman H，Kleeberger W，et al.Marked intratumoral heterogeneity of C-myc and cyclin D1 but not of C-erbB-2 amplification in breast cancer［J］.Invest，2002，82(10):1419-1426.

［14］An H J，Lee Y H，Cho N H，et al.Alteration of PTEN expression in endometrial carcinoma is associated with down-regulation of cyclin dependent kinase inhibitor，P27［J］.Histopathdagy，2002，41(5):437-445.