珠子肝泰对实验性慢性肝损伤的影响

张 颖 刘晓丽

（1 铁岭卫生职业学院，辽宁 铁岭 112008；2 铁岭市中心医院，辽宁 铁岭 112000）

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂：珠子肝泰，批号11050614，由昆明制药股份有限公司提供，取胶囊内容物（每g含原生药4.03g），加蒸馏水配成所需浓度的药液。四氯化碳（CCl4），批号1007162，广东汕头市西陇化工厂。加蒸馏水碾匀溶解配成所需浓度的药液备用。酶谱测定：ALT，AST，ALP（南京建成生物工程研究所）；MAO（北京鼎国生物工程公司提供的试剂盒）测定。统计数据处理：计量资料均以（±s）表示进行两两均数的比较，使用SPSS13.0分析统计。

1.1.2 动物：Wistar大鼠，雄性，体质量150～230g，由中国医科大学实验动物部提供。

1.2 方法

1.2.1 动物处理：实验动物（除外正常对照组） 均饲以高脂大鼠饲料（10%猪油+79%玉米粉+1%胆固醇），以上材料由中国医科大学实验动物部提供。饮水为清水。喂养4周后，给所有大鼠（除外正常对照组），皮下注射40% CCl4-橄榄油溶液1mL/kg，后每4日注射1次。2个月后，随机将大鼠分为6组，正常对照组、模型对照组、阳性对照组（肌苷片）、珠子肝泰低、中、高剂量组，每组10只。正常组大鼠饲以正常饮食；模型：对照组予以灌胃蒸馏水10mL/kg，1次/日；阳性对照组予以灌胃肌苷片10mg/kg，1次/日；治疗组低剂量组灌胃珠子肝泰供试液5mL/kg，1次/日；治疗组中剂量组灌胃珠子肝泰供试液10mL/kg，1次/日；治疗组高剂量组灌胃珠子肝泰供试液20mL/kg，1次/日。各实验动物组（正常组除外）给药期间，继续每隔3日注射1次四氯化碳（CCl4）。

1.2.2 检验方法：给药2个月后，到期眼眶静脉丛取血，分离血清进行肝脏功能检查，测定ALT、AST、CHE及A/G，将大鼠处死后剖取肝脏称重，计算肝脏的重量指数。大鼠肝脏切片进行肝脏组织胶原纤维定量检查：从大鼠肝脏固定部位取肝组织标本，浸泡于10%甲醛溶液固定2h后，逐级递度酒精脱水，石蜡包埋，常规切片，HE染色后，光镜下观察。另外常规切片一份，采用Masson染色法做肝Masson染色。将所有各检大鼠肝Masson染色切片在Mias22000型图形图像分析仪进行胶原纤维定量分析（测量肝组织Masson染色切片上5个视野肝胶原纤维的含量）。剩余大鼠肝组织制成匀浆，测定CHE，MAO等酶学指标。

2 结 果

2.1 病理组织学检查

光镜观察组织形态。

2.1.1 HE染色观察：镜下见以中央静脉为中心，肝细胞向四周呈放射状排列且吻合成网，肝血窦亦吻合成网，可见结缔组织及肝小叶构成的汇管区，肝细胞呈多边形，较大，胞质嗜酸。模型对照组大鼠肝组织正常结构破坏，并有较明显的纤维形成，肝细胞明显肿胀变性，肝索排列紊乱，脂肪变多见。中央静脉周围可见肝细胞少量坏死，伴有单核细胞、中性粒细胞等炎性细胞侵润。汇管区结缔组织增生变宽。各药物治疗组与模型对照组比较，肝组织结构无明显破坏，肝细胞脂肪变性不明显。珠子肝泰大剂量组肝组织破坏程度显著减轻，肝细胞坏死减少，无明显汇管区结缔组织增生。小剂量组程度轻微减轻，肝细胞坏死减轻，汇管区结缔组织增生。

2.1.2 胶原纤维染色观察：模型对照组大鼠肝脏内胶原纤维大量增生，积聚形成间隔和条索，自汇管区向肝小叶内延伸，形成多个假小叶。各药物治疗组胶原纤维轻度增生，未见假小叶形成，肝正常结构破坏较轻微。

2.2 肝损伤酶活性变化：珠子肝泰能显著性降低血清ALT酶，升高血清和肝匀浆CHE，显著性高于模型组（P＜0.01），ALT、AST、ALP、MAO活性均较模型组明显降低（P＜0.01），见表1。

2.3 对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠ALP与自由基的影响：四氯化碳并不导致胆汁瘀积，在ALT升高时ALP并不急剧升高，但GSH与MAO显著升高，珠子肝泰大剂量组ALP值与正常组相似，对ALP却有明显降低作用（P＜0.01），对MAO有显著清除作用（表2）。

表1 珠子肝泰合剂对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠肝功能和肝脏重量指数的影响（±s）

表1 珠子肝泰合剂对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠肝功能和肝脏重量指数的影响（±s）

注：与肝损伤模型组比较▲P＜0.05，★P＜0.01

组别 剂量 ALT AST TP ALB A/G 肝脏指数[g/(kg·d)](u/L) (u/L) (g/L) (g/L) (g/100g体质量)正常对照 34.11±3.21 110.72±17.09 84.89±8.16 43.88±2.89 1.74±0.18★ 3.528±0.343模型对照 66.48±17.30 156.11±13.27 97.93±2.66 45.50±2.72 0.92±0.25▲ 4.190±0.403珠子肝泰 15 42.95±17.44▲ 125.69±21.90 90.57±4.13 45.33±3.41 1.39±0.41 3.284±0.545▲珠子肝泰 10 44.14±15.18▲ 133.37±14.16▲ 90.88±5.40▲ 45.29±3.79 1.07±0.27 3.465±0.343珠子肝泰 5 50.96±10.69▲ 156.70±13.71▲ 95.53±7.17▲ 45.27±3.10▲ 1.27±0.27 4.176±0.685★肌苷片 1.0 47.39±7.39★ 158.35±13.15★ 96.07±6.12★ 45.93±3.88★ 1.31±0.27▲ 3.705±0.814

表2 珠子肝泰合剂对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠自由基的影响影响（±s）

表2 珠子肝泰合剂对四氯化碳所致慢性肝损伤大鼠自由基的影响影响（±s）

注：与肝损伤模型组比较▲P＜0.05，★P＜0.01

组别 剂量 CHE MAO GSH[g/(kg·d)](u/L) (nmol/L) (mg/L)正常对照 181.2±41.0 122.5±29.1 66.0±13.9模型对照 262.6±26.2 156.9±23.4 90.0±23.1珠子肝泰 15 303.9±63.6▲ 120.2±19.9 70.0±13.5珠子肝泰 10 292.2±58.9▲ 123.6±14.7▲ 80.0±9.3珠子肝泰 5 281.6±51.5▲ 129.4±15.5▲ 90.0±10.2肌苷片 1.0 275.9±43.6★ 112.5±17.6★ 60.0±11.4

3 讨 论

临床实践证实，乙型肝炎进展为肝硬化等重症肝病不能单纯依靠抗病毒治疗来阻断。研究发现抗肝纤维化治疗对本病患者的预后有重要的地位，它对延缓或阻止慢乙型肝炎向肝硬化等重症肝病发展起着不可替代的作用[1]。

四氯化碳（CCl4）是一种经典的肝脏毒物，它往往通过复合因素造成大鼠肝损伤及肝硬化模型，是由营养不良和化学中毒造成的肝细胞损伤，肝细胞脂肪变性、炎症、坏死、网状支架塌陷，胶原纤维结缔组织增生，进而发展为肝硬变[2]。四氯化碳致慢性肝损伤的主要机制是产生三氯甲基自由基，引起肝细胞内脂质过氧化以及直接的膜溶解作用，促使肝细胞坏死，最终肝功能衰竭。摄入大量高脂低蛋白膳食，对慢性肝损伤的形成及恶化起了辅助作用[3]。

珠子肝泰是一种纯中药制剂，是以苦味叶下珠的主要成分并辅以青叶胆、黄芪和甘草制成的复方制剂。具有明显的抗HBV作用且对肝损伤有一定的防护作用，能提高机体的细胞免疫功能，改善体液免疫功能，特别是通过提高红细胞免疫黏附功能，从而可促进HBV的进一步清除[4]。

本实验中病理组织学检查结果提示，模型对照组大鼠肝细胞变性、坏死、纤维组织增生明显著于药物治疗组，药物治疗组大鼠均未出现肝硬化。其中珠子肝泰大剂量组的疗效优于阳性对照组及其他各组。专家认为，肝内转氨酶含量约为血中的100倍，因此若肝细胞有1%坏死，可使血清中酶活力增加1倍；此外肝内转氨酶浓度约较血清中高1000～5000倍左右，肝细胞膜通透性增加时，细胞内转氨酶也可顺浓度梯度差而进入血液中，因此血清转氨酶（ALT、AST）测定是判断肝细胞损害的敏感指标，在一定程度上，血清转氨酶升高反映了肝细胞的损害程度。ALP的活性主要反映了胆汁淤积[5]。在胶原纤维形成过程中，MAO参与胶原成熟最后阶段的架桥形成，因而MAO活性与肝纤维化程度有关[6]。本实验以ALT、AST、ALP、MAO 4种酶联合检测，反映肝脏各方面的病理变化。本实验结果显示，模型对照组酶活性均较各治疗组显著升高。结果与病理组织学结果相一致。统计学分析认为珠子肝泰对CCl4所致大鼠慢性肝损伤有保护作用。具体原因可能是通过改善肝脏微循环，抗肝纤维化，改善肝脏病理，抗脂质过氧化，继而取得抗慢性肝损伤的效果。能有效地降低CCl4所致慢性肝损伤大鼠血清与肝匀浆ALT，升高血清和肝匀浆中CHE，说明受损的肝细胞得以恢复，GSH是GSH-PX与GSH-ST的底物，并受GGT的调节[7-9]。张明娟等的研究也证实，珠子肝泰对HBeAg有灭活作用，能抑制细胞分泌HBcAg，HBeAg，对急性肝损伤有显著的保护作用，并能抑制肿瘤细胞的生长，具有调节免疫、保肝和抑制病毒多种作用[10]。当肝功能衰竭时谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）与谷胱甘肽-S转移酶（GSH-ST）的合成降低，GSH蓄积肝内解毒功能下降，珠子肝泰合剂使肝匀浆中GSH水平显著下降，MAO减少，提示珠子肝泰使肝细胞得以保护和修复，间质细胞的解毒与清除功能加强，组织形态学表明肝细胞受损的程度低于模型组，肝组织修复增强，珠子肝泰这种作用可能是抑制氧自由基对细胞胞膜的损伤有关。CCl4可导致胆汁瘀积，珠子肝泰有消除瘀胆作用，组织病理学显示肝组织内未见胆汁瘀积。珠子肝泰对四氯化碳所致高血清ALT有显著的抑制作用，血清与肝匀浆CHE值明显上升，MDA降低，但肌苷片对四氯化碳损伤的肝细胞内GSH蓄积仍未清除，提示GSH-PX合成受阻，说明前者的恢复还只是部分恢复。珠子肝泰组织形态学特征与生化结果有一致性，提示珠子肝泰对四氯化碳所致慢性肝损伤的作用优于肌苷片，珠子肝泰对四氯化碳的作用可能与抑制炎细胞浸润，加强肝细胞器修复有关。珠子肝泰对免疫性肝损伤小鼠ALT与AST有显著降低作用，微粒体内NO水平升高，另外，本实验中病理组织学结果表明，珠子肝泰的疗效优于肌苷片，且服用方便、起效快，未发现毒副作用，有较高的临床应用价值。

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[2]程丽娟,陈晓农,刘青川,等.灵五颗粒对四氯化碳诱导大鼠慢性肝损伤的影响[J].医药导报,2011,30(7):16-17.

[3]王心童,王虹蛟,王强,等.抑肽酶对实验性慢性肝损伤肝组织纤维化影响的研究[J].中国实验诊断学,2011,15(12):2033-2034.

[4]刘建平.阿德福韦脂联合珠子肝泰胶囊治疗慢性乙型肝炎68例临床观察[J].临床合理用药,2011,3(11):48-49.

[5]杨波,吴元凯,陈忠诚,等.ALT、AST、TBil及PT变化趋势与慢加急性乙型肝炎肝衰竭预后的关系[J].临床肝胆杂志,2012,28(3):205-208.

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[7]Shen GX,Zhou RL.Modern experimental technology in immunology[M].Wuhan:Hubei Science Press,1998: 261.

[8]Xu SY,Bian RL,Chen X.Themethod of pharmacological experiment[M].Beijing:People's Health Press,1994: 489.

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[10]张明娟,方娟,李志贤,等.珠子肝泰胶囊治疗慢性乙型肝炎720例[J].陕西中医,2006,27(11):1405-1406.