卵巢早衰患者血清白介素－1、淋巴细胞亚群的水平及临床意义

马小红 徐 仙

宁夏医科大学总医院生殖医学中心，宁夏生殖与遗传重点实验室(银川，750004)

卵巢早衰(POF)是由多种病因所致的卵巢功能过早衰竭，发生于40岁以下的妇女，发病率约1%～3%［1，2］。POF 的病因复杂，尽管国内外学者提出众多假说，诸如遗传、感染、理化/代谢因素、药物等，但均不能更好地解释POF的病理生理变化及其临床特征。近年来有学者提出POF并非不可逆的，残存的卵泡功能可能再度恢复，POF的发生与自身免疫功能紊乱密切相关［3］。本研究对POF患者和正常妇女进行对照研究，通过测定血清中白介素(IL)－1α、IL－1β、淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平，从分子水平进一步阐明POF的自身免疫致病机制，以期寻找治疗POF的有效方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料

筛选2009年5月～2010年12月在本中心就诊的POF患者30例为研究组，年龄30.45±6.12(21～38)岁;已婚24例(9例无生育要求)，未婚6例;原发不孕7例，继发不孕8例。选择同期月经周期规律，尿黄体生成激素(LH)或B超监测有正常排卵，因男性因素或者输卵管因素不孕的妇女(需首先征得患者同意)为对照组(30例)，年龄29.21±3.58岁。研究对象3个月内均未使用过甾体激素药物，在进入本研究前2个月内无妊娠、手术史，肝肾功能均正常。

1.2 POF 患者诊断标准［4］

①青春期以后至40岁前闭经;②卵泡刺激素(FSH)＞40U/L;③雌二醇(E2)＜25pg/ml。

1.3 方法

1.3.1 仪器及试剂 505型酶标测定仪(美国BIORAD公司)，5745型洗板机(美国 BIO－RAD公司)，FACSCalibur流式细胞仪(美国BD公司);IL－1α及IL－1β检测试剂盒(美国ABI公司);淋巴细胞亚群检测试剂盒(美国BD公司)。

1.3.1 标本采集 研究组于任意日的早晨，对照组于月经周期第3～5d，空腹12h，晨8时采集静脉血3ml，3 000rpm/min 离心 5min，留取血清保存，集中测定血清中 IL－1α、IL－1β、淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平。

1.3.2 测定方法 各因子测定均严格依照试剂盒说明书进行。IL－1α、IL－1β采用ELISA法测定;淋巴细胞亚群采用荧光免疫法测定。

1.4 数据统计

采用SPSS 11.5软件对资料数据进行χ2检验。

2 结果

2.1 两组血清中IL－1α、IL－1β 比较

研究组血清中 IL－1β水平(27.90±6.63pg/ml)低于对照组(33.73 ±8.63pg/ml，t=2.359，P ＜0.05);血清 IL－1α 水平研究组(18.15 ±5.30pg/ml)和对照组(19.25 ±3.35pg/ml)无差异(t=0.041，P ＞0.05)。

2.2 两组血清中T淋巴细胞亚群比较

两组全血T+B+自然杀伤细胞(NK)、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均无差异(P ＞0.05)，见表1。

表1 研究组与对照组T淋巴细胞亚群测定值比较(pg/ml，±s)

表1 研究组与对照组T淋巴细胞亚群测定值比较(pg/ml，±s)

组别T+B+NK CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD19 CD16+56研究组 99.30 ±3.16 70.50 ±7.62 34.7 ±5.52 31.5 ±7.09 1.15 ±0.30 11.90 ±3.63 16.9 ±7.33对照组 92.97 ±24.45 70.64 ±8.92 35.75 ±4.25 30.38 ±8.91 1.73 ±1.98 10.44 ±8.70 21.13 ±5.37 t 0.809 0.041 0.547 0.337 0.915 0.502 1.67

3 讨论

3.1 IL－1β对 POF的影响

IL－1又称淋巴细胞激活因子，是一种主要由血液中的单核细胞、巨噬细胞以及其它多种类型细胞合成和分泌的重要细胞因子和多肽调节因子。IL－1系统由IL－1α、IL－1β、IL－1Ⅰ型受体、IL－1Ⅱ型受体、IL－1受体拮抗剂5种成分组成。其中，IL－1β和生殖内分泌的关系最为密切。IL－1系统参与白细胞不同群体间信息传递，在卵泡发育、排卵和黄体功能调节等方面均具有重要作用。Karagouni等［5］用ELISA法证实了卵泡液中IL－1β的存在，并发现卵泡液中IL－1β的水平较血清中明显增高。由此可见，IL－1β为卵巢源性。免疫组化研究亦表明在卵细胞发育的全过程中卵泡液都存在IL－1β的强阳性表达。IL－1β有较强的抗促性腺激素作用，可阻断颗粒细胞分泌孕酮(P)和形成LH受体，并通过抑制雌激素、P、雄激素和LH受体的形成，阻止卵泡闭锁。当体内的IL－1β下降时，卵泡的发育及闭锁受到影响，出现排卵障碍，分泌雌、孕激素下降，卵泡闭锁加速，而卵泡闭锁的加速是POF的发病原因之一。本研究结果显示:对照组卵泡早期血清IL－1β 水平为 33.73 ±8.63pg/ml，与早期文献报道不一致，研究组IL－1β水平低于对照组，而IL－1α水平无差异，提示IL－1β对卵泡发育具有重要调节作用，其作用过程有待进一步探讨。

有研究回顾近30年有关卵巢炎和POF的文献，发现POF患者活化T淋巴细胞增加，该细胞表达主要组织相容性抗原－Ⅱ(MHC－Ⅱ)类分子，产生IL－1β，进而活化卵巢上皮巨噬细胞，分泌细胞因子，进入卵泡液，参与生长卵泡的闭锁过程［6，7］。

3.2 淋巴细胞亚群在POF组织中的病理作用

近年来，众多的研究表明细胞免疫在POF中起着至关重要的作用，而CD4+和CD8+T细胞是细胞免疫中的主要细胞。CD4+T细胞根据分泌细胞因子的不同，分为Th1(分泌IL－2，IFN－γ等)、Th2(分泌IL－6，IL－10等)两大类，分别参与细胞免疫和体液免疫，两者之间为动态平衡，如某种因素打破了这种状态，则可能导致各种免疫相关的疾病。Th1细胞占优势，其分泌的细胞因子IL－2、IFN－γ等可诱导颗粒细胞及黄体细胞MHC－Ⅱ类抗原表达诱发自身免疫应答，使颗粒细胞和卵泡受到破坏，从而发生POF。CD8+T细胞主要指细胞毒性T细胞，其主要功能是特异性杀伤靶细胞。在POF中，卵巢功能减退闭经时，CD8+T增加是自身免疫性卵巢炎在外周血的反映。谢梅青［8］报道:在POF患者体内，CD8+T细胞作为一个整体，虽然其数量是增加的，但其调节功能下降，机体的自身免疫反应亢进。所以在POF中，CD8+T细胞亚群水平升高。其升高的程度与疾病的严重程度、病情变化、治疗反应及预后密切相关。

本研究结果显示:两组全血T+B+NK、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均无差异，这与文献报道不一致，其原因可能是:①研究对象的选择及病程长短的差异;②实验技术和测定方法等因素的影响。

总之，POF病因复杂，其发病机制与神经内分泌免疫网络之间存在着复杂的联系，随着生殖医学的飞速发展，将为其发病机理的研究开辟新的途径。如何早期预防POF的发生及恢复卵巢功能，提高生活质量，是国内外生殖内分泌学者亟待解决的问题。因POF患者可能存在自身免疫功能紊乱，应用免疫抑制剂是治疗方法之一，但激素类药物长期应用副作用较大，且不易为所有POF患者所接受。而中医药通过多环节发挥整体调节作用，进而改善患者症状，且副作用较小。因此，中医药与POF的病理生理研究将是极有发展前景的领域之一。

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2 Dong L，Jiang L，Men W，et al.Preventive and therapeutic effects of Bushen Huoxue Recipe on autoimmune premature ovarian failure in mice［J］.Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao，2008，6(3):294－297.

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5 Karagouni EE，Chryssikopoulos A，Mantzavinos T，et al.Interleukin－1beta and interleukin－lalpha may affect the implantation rate of patients undergoing in vitro fertilization－embryo transfer［J］.Fertil Steril，1998，70(3):553－559.

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7 Gervera R，Balasch J.Bidirectional effects on autoimmunity and reproduction［J］.Hum Reprod Update，2008，14(4):359－366.

8 谢梅青.卵巢早衰的病因［J］.实用妇产科杂志，2003，19(4):193－195.