国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检测中应用

李栩文，于兆新，罗 俊

国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检测中应用

李栩文，于兆新，罗 俊

目的探讨国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检测中的效果。方法 利用202份强奸案件中的精斑检材测试其效果。结果国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检验中的效果明显优于美国AB公司IdentifilerTM试剂盒。结论在强奸案件精斑DNA的检验中，国产Goldeneye 20A试剂盒可以取代美国AB公司IdentifilerTM试剂盒。

混合斑；精斑；性侵犯；STR扩增

1 材料与方法

1.1 样本202份强奸案件现场提取的精斑及混合斑检材，其中男性精斑类63份（载体如床单、卫生纸、避孕套等），混合斑类139份（载体如阴道擦拭物、受害女性内裤、受害女性护垫等）。以上检材全部经过精斑确证实验。

1.2 仪器与试剂GeneAmp®9700型遗传分析仪（美国AB公司），3130型遗传分析仪（美国AB公司），M48磁珠试剂盒（德国QIAGEN），IdentifilerTM试剂盒（美国AB公司），Goldeneye 20A试剂盒（中国基点认知公司）。

1.3 方法 每份检材取1份，放入1.5 m L的离心管中，用常规Chelex-100法提取模板DNA，用M48磁珠法纯化模板DNA。

1.3.1 常规Chelex-100法 ①将检材剪碎，放入1.5 m L离心管中，加1 000μL超纯水，然后加入1／10体积的10%SDS至终浓度为1%，加蛋白酶K至终浓度40μL／m L，于37℃保温2 h消化上皮细胞。②将消化后的混合物用套管法离心去载体，13 000 r／min，离心4 min，去掉上清，用超纯水清洗沉淀。重复清洗2～3次。③干净的精子沉淀物用200μL 5%Chelex-100溶液悬浮，加DTT（精子裂解液）和PK至终浓度分别为0.039 mol／L和100μL／m L，在旋涡振荡器上振荡7 s，56℃保温1 h，振荡7 s，96℃保温10 m in后，振荡7 s，13 000 r／m in下离心4 m in，以沉淀Chelex颗粒，上清液用于PCR反应。

1.3.2 M48磁珠纯化法 经常规Chelex-100法提取的模板DNA。采用M48磁珠试剂盒（德国QIAGEN）纯化。①模板DNA上清液200μL，加MTL液600μL、磁珠30μL，吸附10 m in，振荡混匀；②将混匀液置磁力架上吸附，吸弃上清液，加入500 μL MW 1洗液，振荡混匀；置磁力架吸附，吸弃上清液，用500μL 80%乙醇洗涤2次，吸弃上清液，56℃保温5 m in（开盖）；③50μL洗脱液从磁珠上振荡洗脱DNA，65℃保温10 m in，期间振荡2～3次，置磁力架上吸附磁珠，吸取上清液用于PCR反应。

1.3.3 扩增与分型 上述常规Chelex-100法提取的模板DNA，取1μL，分别用国产Goldeneye 20A系统和美国IdentifilerTM系统，10μL PCR反应体系进行扩增；M48磁珠纯化法提取的模板DNA，取0.5μL，分别用国产GoldeneyeTM20A系统和美国IdentifilerTM系统，10μL PCR反应体系进行扩增。用3130型遗传分析仪进行STR分型。

2 结果

2.1 结果用常规常规Chelex-100法提取的模板DNA经两种试剂盒扩增后进行STR分型的结果比较见表1；用M48纯化后的DNA经两种试剂盒扩增后进行STR分型的结果比较见表2。

表1 常规Chelex-100法提取两种试剂盒扩增比较

表2 常规Chelex-100法提取DNA经M 48磁珠纯化后两种试剂盒扩增比较

3 讨论

3.1 耐受性法医现场检材中往往包含各种各样的杂质，部分杂质通过常规的DNA提取方法很难去除，会残留到最终得到的DNA溶液中，其中有些杂质是PCR的抑制剂，会抑制Taq酶的活性或者阻碍Taq酶跟模板之间的结合，从而导致PCR扩增的失败，这些杂质通常被称为“PCR抑制剂”，以上202份精斑检材中混合斑常规Chelex-100法提取经IdentifilerTM扩增检测失败的比例相对较大说明该试剂盒对“PCR抑制剂”的抵抗能力弱，而常规Chelex-100法提取经国产GoldeneyeTM20A试剂盒扩增的混合斑检出率却非常高这是因为国产GoldeneyeTM20A试剂盒对大量的“PCR增强剂”进行了筛选和比较，确定了合适的增强剂组合和浓度，以达到最大的消除“PCR抑制剂”抑制的作用，使得国产GoldeneyeTM20A对各种现场检材中的“PCR抑制剂”都有相当高的抵抗能力，具有广泛的检材适用性。

3.2 个体识别能力国产GoldeneyeTM20A试剂盒扩增19个STR基因座和一个性别基因座，兼容了当前DNA身份鉴定主流试剂盒的全部STR基因座，提供了历史数据的最大兼容性和最高精确度，提供了更多的信息量，具有更高的非父排除率和个体识别率。在个体识别能力上得到了进一步增强帮助法医们更准确的判断图谱。

3.3 时间国产GoldeneyeTM20A试剂盒无需经过纯化就能取得完整的DNA分型图谱比美国IdentifilerTM试剂盒更节省时间和减少不必要的检验流程，在刑事案件侦破中时间就是破案的关键。而减少不必要的检验流程能减少DNA损失及潜在污染，更高效地从一些微量检材中提取到完整的DNA图谱。

3.4 资金国外试剂盒价格高昂，为了检出完整图谱还要使用纯化试剂盒提高了破案成本，而国产GoldeneyeTM20A试剂盒的价格只有国外试剂盒的1／3，并且一般不需要再使用M48磁珠试剂盒纯化，节省了办案经费，提高了办案质量。

综上所述在法医刑事案件精斑检材的检验中，国产GoldeneyeTM20A试剂盒个体识别能力强、节省试剂经费、人力成本和检验时间。无论在技术指标还是经济效益上完全可以替代国外试剂盒。

Dom estic Goldeneye 20A Kit in the Sperm DNA Detection

LIXu-wen，YU Zhao-xin，LUO Jun
（Kaifeng Public Security Bureau，Kaifeng 475000，China）

ObjectiveTo explore the domestic Goldeneye20A kit in semen stains in detection of DNA effect.Methods202 cases of rape by the semen samples to test its effect. Resu lts The domestic Goldeneye20A kit in the fine spot testing of DNA is obviously superior to the United States of America AB company IdentifilerTMkit.ConclusionIn cases of rape and sem inal stains DNA inspection，domestic Goldeneye20A kit can be replaced by the United States AB IdentifilerTMkit.

m ixed stains；semen stains；sexual assault；STR ampliferation精斑检验的主要目的与其他物证检验一样，是为案件的侦查提供线索，为分析、审理案件提供证据。目前，在法医领域已广泛开展精斑的检验鉴定。但大部分公安机关DNA实验室应用的是国外的试剂盒，价格昂贵。国产Goldeneye 20A试剂盒经我实验室实验验证，受扩增抑制物影响小，质量稳定可靠，可以替代同类国外产品，降低了DNA检验成本，缩短了精斑DNA检验时间，实验报告如下。

DF795.2

A

1672－688X（2012）04－0271－02

2012－07－18

开封市公安局，河南开封475000

李栩文（1982－），女，蒙古族，河南开封人，法医师，从事DNA检验工作。