清开灵口服液生产工艺优化研究*

王 磊，高 辉，谌爱富，刘二伟，王家龙

清开灵口服液源于安宫牛黄丸，是国家基本药物、国家基本医疗保险目录药品[1]，是由栀子、金银花、板蓝根等8味中药提取制成的口服液制剂，主要作用于脑、肝、心、肺等器官[2]，具有清热解毒、镇静安神之功效，现代药理研究表明其具有抗菌、抗病毒、退热消炎、护肝和提高机体免疫力等作用[3]。《中国药典》中其生产工艺没有规定具体参数，药厂各自安排生产，生产过程中存在有生产效率不高，资源浪费等问题。本实验通过指标性成分栀子苷转移率考察清开灵口服液的生产步骤，围绕提取和醇沉过程中影响它的多个因素，优化工艺条件，为具体生产提供指导。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters2695液相色谱系统（四元泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、Waters2487 VWD检测器、Empower色谱工作站），超纯水制造机（Mill-QⅡ型，Millipore公司），低温高速离心机（德国Sigma公司），AX205十万分之一天平（瑞士梅特勒-托利多公司），电子天平(上海永杰衡器有限公司)；8205型笔式pH计（上海康仪仪器有限公司），真空干燥箱（天津市天宇实验仪器有限公司）。

1.2 试药 乙腈（色谱纯，天津康科德公司），超纯水（Milipore制备），栀子苷对照品（购自中新药业标准品物质中心），氢氧化钙（天津市光复精细化工研究所），药材栀子、金银花、板蓝根（均由唐山容大药业有限公司提供，经天津中医药大学中医药研究院郭俊华副研究员鉴定）。

2 方法与结果

2.1 HPLC条件与结果

2.1.1 色谱条件色谱柱：AgilentC18（46mm×150mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（30 ∶70）；流速：1.0 mL/min；检测波长：238 nm；柱温：25℃；进样量：10 μL。

2.1.2 色谱结果 见图1。

图1 栀子苷对照品色谱图

2.2 提取工艺的考察

2.2.1 提取因素水平表设计 采用正交实验对溶剂用量、提取时间和提取次数的结合、提取前的浸泡时间三因素进行考察，每个因素均匀设计3个水平，按L9（34）正交表安排实验，以栀子苷转移率结合固形物收率为指标对结果进行评价。正交设计因素与水平见表1。

表1 清开灵提取正交实验因素水平表

2.2.2 提取实验方法与结果 分别称取处方量栀子粗粉、板蓝根、金银花，按正交实验表2进行实验，分别合并提取液后确定体积，HPLC法测定提取液中栀子苷含量，同时测定固形物收率[4]。结果见表2，统计结果见表3。

表2 栀子、板蓝根和金银花提取正交实验结果

表3 栀子、板蓝根和金银花提取栀子苷转移率和固形物收率方差分析

直观分析和方差分析表明，影响清开灵口服液中栀子苷提取率的因素：提取次数和时间>浸泡时间>料液比。A因素料液比影响较小，考虑到实验过程中加入溶剂量对样品的浸润程度，A因素选用9倍量溶剂。C因素中浸泡1 h即可达到浸泡效果。B因素影响较大并且B3>B2>B1，3次提取率较高，但是提取3次溶剂消耗量大、成本高，本研究对提取2次和3次间进行验证，进一步优化提取工艺。

2.2.3 提取工艺的验证 根据正交实验结果比较提取2次和3次的工艺对栀子苷转移率的影响。按照药典处方量分别称取药材6份，其中3份按照提取两次的工艺，另3份按3次的工艺提取，HPLC测定提取液中栀子苷含量并计算转移率。结果见表4。

表4 栀子、板蓝根和金银花提取3次工艺验证结果%

验证结果显示，在其他条件已定的条件下，提取2次和3次转移率差别不大，为降低生产中成本，选用提取2次工艺。因此确定的提取工艺条件为：按处方量称栀子粗粉、板蓝根和金银花，9倍量水浸泡1 h后，加热回流提取2次，每次2 h。

2.3 醇沉精制工艺的考察

2.3.1 醇沉因素水平表设计 以提取液浓缩相对密度、醇沉乙醇浓度和醇沉时间为3个因素进行考察，每个因素设计3个水平，仍以栀子苷转移率为指标，兼顾固形物收率对结果进行分析，按L9（34）正交表安排实验，正交设计因素与水平见表5。

表5 醇沉正交实验因素与水平设计

2.3.2 醇沉纯化实验方法与结果 合并2.2.3步骤所得2次提取工艺条件的样品，平均分成9份，按正交实验表6设计安排实验，HPLC检测栀子苷的含量，测定固形物，计算栀子苷转移率和固形物收率，结果见表6、表7。

表6 醇沉正交实验结果数据%

表7 醇沉栀子苷转移率和固形物收率方差分析

结果：由分析可以看出，固形物收率受三因素影响不大。影响栀子苷转移率的影响因素：醇沉浓度>醇沉pH>浓缩相对密度，醇沉的乙醇浓度影响最为显著，其次为pH。醇沉前浓缩相对密度对醇沉栀子苷转移率影响较小，但需要消耗更多的乙醇，且乙醇浓度70%时，即可达到65%以上，因此选择提取液浓缩至相对密度1.25即可，综合考虑以上因素选择A2B2C1，即最佳工艺为提取液浓缩至相对密度1.25，醇沉浓度70%，醇沉的pH为6。

2.3.3醇沉工艺验证 将提取验证中提取3次的提取液合并后均分为3份，按照正交实验确定的最佳工艺醇沉，HPLC测定醇沉前后溶液中栀子苷含量，计算栀子苷转移率，同时测定固形物收率，结果见表8。

由表8验证结果可见，所筛选的醇沉工艺中栀子苷转移率较高，工艺稳定，达到了优选的效果。

表8 醇沉工艺验证结果

3 结论

通过正交试验，对清开灵口服液中栀子、板蓝根和金银花的提取纯化具体参数进行优化，确定了最佳提取和醇沉工艺条件，栀子苷的转移率达60%以上，固形物收率20%左右。经验证所优选工艺稳定，操作简单，生产提供了相关参考。

4 讨论

实验优选确定醇沉时乙醇比例70%，实验中发现降低乙醇比例则沉淀物分层不明显且极黏稠，严重影响后续工艺，这可能是由于果实和花类药材中较高含量的鞣质和树胶类化合物导致，此现象在中成药的生产过程中普遍存在，因此对富含鞣质和树胶类的浓缩液进行纯化时要适当提高乙醇比例。

[1]颜海燕，谢 丹，罗 晶，等.清开灵口服液体外抑菌效果的实验研究[J].数理医药学杂志，2011，24（5）：580.

[2]李 爽.清开灵的药理作用与临床应用[J].现代中西医结合杂志，2009，18（1）：108.

[3]韦迎春，张海燕，杨 明.清开灵口服液临床应用的进展[J].江西中医学院学报，2011，23（2）：93.

[4]胡 震，杨广德，罗国安，等.栀子中栀子苷提取工艺及HPLC 分析[J].中成药，2006，28（3）：336－337.