芍药苷对强迫游泳小鼠脑内单胺递质的影响*

崔广智，金树梅

芍药的醇提物具有一定的抗抑郁作用，其中芍药苷是其主要成分。本研究旨在初步探讨芍药苷的抗抑郁作用及其可能作用机制。采用小鼠强迫游泳实验，观察芍药苷7 d连续给药对小鼠不动时间的影响及对中枢单胺类神经递质的作用[1]。

1 材料

1.1 药品 芍药苷（天津中新药业中药现代化技术工程中心提供，纯度>80%）；盐酸氯米帕明（诺华制药公司产品，批号X0026）；去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）（购自 Sigma公司）；其余试剂为国产色谱纯或分析纯。

1.2 动物 雄性SPF级ICR小鼠，体质量18～21 g[北京维通利华实验动物中心提供，许可证编号SCXK（京）2007-0001]。饲养温度为（23±1）℃，12 h人工循环光照（光照时间 7∶30-19∶30），自由摄食饮水。实验前，于饲养环境中适应1周。

1.3 仪器 1100高效液相色谱系统（美国Agilent公司）；DECADEⅡ电化学检测器（荷兰Antecleyden公司）；Allegra-64R高速离心机（美国贝克曼公司）；Waters C18色谱柱[（150 mm×4.6 mm，5 μm），美国Waters公司]；电子体温计（美国强生公司）。

2 方法

2.1 小鼠强迫游泳实验 按随机数字表法将小鼠随机分5组，每组12只。即对照组、盐酸氯米帕明40 mg/kg组、芍药苷 50、100和 200 mg/kg组，均按0.1 mL/10 g体质量给药。灌胃给药，每日1次，连续1周。末次给药1 h后将小鼠放入高20 cm、直径10 cm的圆柱型玻璃缸中，每缸1只，水深10 cm，水温25℃，观察6 min，累计后4 min内的不动时间[2]。

2.2 小鼠脑内NE、DA、5-HT含量的测定 在末次给药后8 h断头处死动物，在冰盘上剥离大脑，去掉小脑和嗅球，保留剩余的全脑组织。每小鼠脑组织精密称质量后加入1 mL的0.1 mol/L高氯酸（HClO4）溶液。冰浴条件下电动匀浆（10秒/次，数次）后，4℃12 000 r/min 离心 15 min，取上清液 20 μL，采用高效液相色谱-电化学法[3]测定大鼠脑内NE、DA、5-HT的含量。

2.3 统计方法 应用SPSS 18.0统计软件分析，计量数据均以均数±标准差（s）表示，组间比较用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 芍药苷对强迫小鼠游泳不动时间的影响 见表1。

结果可见，给予动物氯米帕明40 mg/kg，芍药苷100和200 mg/kg，可显著缩短强迫游泳小鼠的不动时间（P<0.05和P<0.01),结果表明上述剂量芍药苷具有抗抑郁作用。

表1 芍药苷对小鼠游泳不动时间的影响(s)

表1 芍药苷对小鼠游泳不动时间的影响(s)

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 n 剂量（mg/kg）不动时间（秒）对照组 12 - 148.3±34.6芍药苷组 12 050 131.0±35.6 12 100 99.0±22.3*12 200 88.6±31.0**氯米帕明组 12 040 86.9±43.3*

3.2 芍药苷对强迫游泳小鼠脑内单胺递质的影响 见表2。

表2 芍药苷对强迫游泳小鼠脑内单胺递质含量的影响（s，n=12）ng/g

表2 芍药苷对强迫游泳小鼠脑内单胺递质含量的影响（s，n=12）ng/g

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 剂量（mg/kg）NE DA 5-HT对照组 - 151.36±30.92 65.75±14.21 110.53±23.90芍药苷组 50 157.08±28.02 70.39±21.08 108.31±19.71 100 168.89±35.28 78.50±30.43 126.53±26.32 200 175.73±25.81*85.79±18.12**135.07±19.28*氯米帕明组 40 180.88±30.73*90.65±25.37**141.82±23.22**

结果表明，与对照组相比，芍药苷200 mg/kg剂量组小鼠脑内的NE、DA和5-HT的含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。氯米帕明组小鼠脑内单胺递质的含量均明显升高（P<0.05或P<0.01）。

4 讨论

强迫游泳实验（forced swimming test）是Porsolt等建立的一种评价抗抑郁剂的动物实验[4]。该实验利用动物不能逃逸出恶劣环境，导致动物行为绝望而设计出的一种模型。许多抗抑郁药如三环类、四环类和单胺氧化酶抑制药等均可明显缩短动物的不动时间。此实验简便、可靠，广泛用于抗抑郁药的筛选和评价。本研究采用强迫游泳实验考察芍药苷的抗抑郁活性。在该实验上，芍药苷100、200 mg/kg组能不同程度缩短小鼠强迫性游泳的不动时间，与模型组相比,差异有统计学意义。其中,以高剂量组最为明显,体现出较好的抗抑郁活性。

在抑郁症的发病机制研究中，脑内单胺类递质，如NA、5-HT和DA等功能不足，早已得到普遍公认[4]。抑郁症患者普遍存在5-HT、NE等功能低下，且在临床上抗抑郁治疗有效的药物几乎都能够增加细胞突触间隙5-HT和NE的水平，这些现象在一定程度上证明了抑郁症“单胺类神经递质”假说的合理性。在探讨芍药苷行为药效学作用的基础上,采用高效液相色谱法（HPLC）测定了芍药苷对小鼠脑内单胺递质含量的影响。研究显示，对照组小鼠脑内NE、DA和5-HT等单胺递质含量明显下降，芍药苷连续给药7 d可使小鼠脑内的NE、DA和5-HT的含量明显升高。提示芍药苷具有一定增强单胺递质的作用。

[1]Mao Q,Huang Z,IP S,et al.Antidepressant-like effect of ethanol extract from Paeonia lactiflora in mice[J].Phytother Res,2008,22(11):1496-1499.

[2]Porsolt RD,Anton G,Blavet N,et al.Behavioural despair in rats:a new model sensitive to antidepressant treatments[J].Eur J Pharmacol,1978,47(4):379-391.

[3]张 潇，张德芹.高效液相色谱-电化学法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质及其代谢产物的方法学研究[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（6）：255－257.

[4]Prins J,Olivier B,Korte S M.Triple reuptake inhibitors for treatingsubtypesofmajordepressivedisorder:themonoamine hypothesis revisited[J].Expert opinion on investigational drugs,2011,20(8):1107-1130.