ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石剂对动物的局部和全身毒性研究

张建群，乔自勇

（河北省巨鹿县医院外一科，河北巨鹿055250）

ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石剂对动物的局部和全身毒性研究

张建群，乔自勇*

（河北省巨鹿县医院外一科，河北巨鹿055250）

目的为了评价乙基叔丁基醚（ethy1 tertbuty1 ether，ETBE）-乙二醇二乙醚二胺四乙酸［ethy1ene bis （oxgethy1eneitrio1）acid，EGTA］-聚乙二醇-200（PEG-200）的毒性作用，探讨其在灌注溶解治疗胆固醇结石的可能性。方法对比单独使用ETBE对动物的局部组织和全身毒性的作用。局部毒性实验是对大白兔胆囊进行药物灌注后，病理观察组织变化。全身毒性实验是通过对小白鼠腹腔注射药物的半数致死量（1etha1 dose 50，LD50）作对比。结果混合溶石剂的LD50比ETBE的LD50增加21.3%（混合溶石剂LD50=2.28mL/kg，95%可信区间=1.98～2.06mL/kg；ETBE LD50=1.88%mL/kg，95%可信区间=1.73～2.02mL/kg）。结论混合溶石剂对动物局部组织和全身毒性作用比ETBE小，且对各类结石的溶石率均在90%～100%，是一种安全高效的溶石剂。

结石；毒性实验；动物

甲基叔丁基醚（methy1 tertiary buty1 ether，MTBE）和乙基叔丁基醚（ethy1 tertbuty1 ether，ETBE）原本是新型的汽油添加剂，可代替四乙基铅用作绿色环保防爆剂［1-2］。刘君等［3］进行了ETBE和MTBE对动物局部和全身毒性的对比实验研究，为进一步了解MTBE、ETBE和机体的毒性，探讨它们在临床应用的可能性。有作者曾对ETBE-乙二醇二乙醚二胺四乙酸［ethy1ene bis（oxgethy1eneitrio1）acid，EGTA］与5%氢氧化钠溶合行体外溶石研究，对各类结石的溶石效率在90%～100%［4］。由于其中5%氢氧化钠对动物胆囊有一定的腐蚀性，所以在此基础上，开发了ETBE-EGTA-聚乙二醇-200 （po1yethy1eneg1yco1-200，PEG-200）混合剂，其保持了原有融合剂的的体外溶石率90%～100%，但对动物局部和全身毒性却明显降低，有望作为安全有效的溶石剂进行临床应用。

1 材料与方法

1.1 材料：实验用结石，取自本院外科患者。根据结石成分分析，选择胆固醇型（固醇含量＞60%）、色素型（胆红素钙含量＞60%）、混合型（固醇及胆红素含量各占50%左右）。ETEB-EGTA-PEG-200为自制混合溶石剂，分别将3种分析纯试剂按一定比例配伍；实验用大白兔和大白鼠为购买饲养。微量注射器为上海医用激光仪器厂产品。

1.2 混合溶石的体外溶合实验：按文献［4］方法，将混合剂中ETBE、EGTA分别单独对3种胆结石进行体外溶石实验，观察ETBE、EGTA的主要作用和溶石率。

1.3 溶石剂灌注胆囊的局部毒性实验：实验按文献［3］方法进行。大白兔20只，雌性，体质量2.2～2.6kg，平均2.4kg。用戊巴比妥钠静脉麻醉，开腹后用细针头在胆囊底部穿刺，将胆囊抽空，注射混合溶剂0.8mL。关腹前检查有无溶石剂外渗和胆囊壁出血。术后8、24、72h，7d分别在2组中各取2只动物，采用放血法处死动物。尸检观察动物腹部和胆囊的情况，并取胆囊、胆总管、十二指肠、肝肾脏和双肺送病理检查。最后将混合溶剂与文献［3］报道的ETBE结果比对。

1.4 腹腔内注射半数致死量（1etha1 dose 50，LD50）实验：小白鼠50只，雄性，体质量19～24g，平均21g。分5组，每组10只，分别注射混合溶石剂。以2周内死亡数计算病死率。为了进一步了解溶石剂的毒性作用，解剖死亡小鼠，并送肝、肾脏和双肺病理检查。

2 结 果

2.1 混合溶石剂中各组分的溶石效果及毒性分析：①使用ETBE分别对胆固醇型、色素型、混合型结石进行溶石实验，4h内溶石率分别为固醇型90%～100%，混合型60%～70%，色素型20%～30%。表明ETBE是固醇型结石的良好溶剂；因为固醇型胆结石中固醇含量＞60%，而ETBE是一种极性很弱的脂溶性溶剂，根据相似相容原则，适合溶解极性类似的胆固醇。②EGTA对各类结石进行溶石实验，4h内溶合率分别为固醇型5%～10%，混合型20%～30%，色素型80%～90%。表明EDTA是色素型结石的良好溶剂；因其色素型结石中胆红素钙含量＞60%，而EGTA能有效地溶解其中的钙质，它可以在Mg2+存在下与Ca2+络合，比乙二胺四乙酸或其二钠盐对钙的络合效果更好。③PEG-200为非离子型或脂型表面活性剂，产品无毒、无刺激性，水溶性，且与许多组分有良好的相容性。将PEG-200与其他2种组分组成ETBE-EGTAPEG-200混合溶石剂，分别对3种胆结石进行溶石实验。结果表明，各类结石体外溶石率均高达90%～100%。这说明PEG-200充分发挥了表面活性剂的作用，可将极性弱的ETBE溶解固醇型和极性较强的EGTA溶解色素型的组分间具有相互增溶的作用，能充分发挥各组分的协同作用。

2.2 溶石剂灌注胆囊的局部毒性实验：大白兔胆囊及机体其他重要脏器毒性同等剂量混合溶石剂较ETBE明显减少，在所剂量下，几乎不会引起大白兔局部或全身毒性。说明混合溶石剂中的EGTA和PEG-200与ETBE的协同作用可大大降低ETBE的毒性。见表1。

表1 不同溶石剂的实验结果

2.3 腹腔内溶石剂LD50实验：腹腔内注射ETBE后，小鼠均即刻表现奔跑、乱跳和不断抓腹部，约5min后转平静，继而呈神经系统抑制状态，全身肌张力下降，呼吸急促，约1h恢复正常。如果1h内不能恢复，动物存活的可能性小。所致死的动物绝大多数在注射后2h内死亡。ETBE的腹腔注射LD50= 1.88mL/kg，其95%的可信区间=1.73～2.02 mL/kg。对死亡小鼠尸解和有关脏器病理检查发现，动物腹腔内都无出血和腹水，也无血肿；肝脏有瘀血斑和不同程度的坏死；双肺明显出血损害；肾脏和心脏正常。ETBE致死情况，见表2。

表2 小白鼠腹腔注射ETBE后结果

腹腔内注射混合溶石剂后，小鼠均奔跑加快，略有不适感，2min后转平静，对神经系几乎无抑制，全身肌张力下降不明显，呼吸略有加快，20min恢复正常。混合溶石剂的腹腔注射LD50=2.28mL/kg，其95%的可信区间=1.98～2.06mL/kg。对死亡小鼠尸解和有关脏器病理检查发现，动物腹腔内都无出血和腹腔，也无血肿；肝脏略有淡色出血点，几乎无坏死斑点；双肺略显出血损害；肾脏和心脏正常。混合溶石剂致死情况，见表3。

表3 小白鼠腹腔注射混合溶石剂后结果

对比混合溶石剂和ETBE的腹腔注射LD50，混合溶石剂要比ETBE增加21.3%。表明混合溶石剂的全身毒性要比ETBE小得多。

3 讨 论

灌注溶石是直接把ETBE-EGTA-PEG-200混合溶石剂注入胆囊或胆总管内，直接溶石。本研究为混合溶石剂，由于添加了其他2种无毒组分，与ETBE具有协调作用，所以这种混合溶石剂较单独使用ETBE的毒性小得多。EGTA在实验中对色系型结石溶石率可达80%～90%，它的毒性反应是EGTA与Ca2+络合后，尤其是与中枢神经中的Ca2+络合后，降低下丘脑神经细胞中的Ca2+，导致下丘脑环磷酸腺苷的增高引起EGTA性发热。同样ETBE-EGTA-PEG-200混合后，这种发热也降低，但仍有引起发热的例数。PEG-200可作为多种制剂的载体。

本研究混合溶石剂对大白兔胆囊灌注实验的毒性影响极小；对小白鼠的全身实验结果显示，混合溶石剂的LD50=2.28mL/kg，其95%可信区间= 1.98～2.06mL/kg，ETBE的LD50=1.88mL/kg，其95%可信区间=1.75～2.02mL/kg，混合溶石剂的LD50比ETBE增加21.3%。进一步说明其毒性小，有望成为一种溶解各类胆结石的安全有效的溶石剂，从而解除患者的痛苦。

［1］ BELPOGGI F，SOFFRITTI M，MALTONI C.Methy1-tertiatybuty1 ether（MTBE）-a gaso1ine additive-causes testicu1ar and 1ympho-haematopoietic cancer in cats［J］.Toxico1 Ind Heath，1995，11（2）：119-149.

［2］ PEINE CJ.Ga11stone disso1ving agents［J］.Gastroentero1 C1in North Am，1992，21（3）：715-741.

［3］ 刘君，蔡端，张俊华，等.乙基叔丁基醚对动物局部和全身毒性研究［J］.上海医学，1997，20（5）：270-272

［4］ 张炜平，梁彩云，张慧灵，等.合用苦参碱对3，15-二乙酰苯甲酰乌头宁镇痛作用及毒性的影响［J］.包头医学院学报，1995，11（2）：12-14.

（本文编辑：刘斯静）

R994.13

B

1007-3205（2012）10-1191-03

2011-11-29；

2012-05-21

张建群（1954-），男，河北巨鹿人，河北省巨鹿县医院主治医师，从事肝胆外科疾病诊治研究。

*通讯作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.10.031