HPLC测定小儿七星茶冲剂中槲皮素含量

李 冬 刘志刚

HPLC测定小儿七星茶冲剂中槲皮素含量

李 冬 刘志刚

目的建立小儿七星茶冲剂中槲皮素的测定方法。方法采用HPLC法测定小儿七星茶冲剂中槲皮素的含量。迪马C-18柱（4.6×250mm，5μm），以甲醇-0.4%磷酸（50:50，PH3.0）为流动相，柱温为室温，流速为1mL•min-1，检测波长为360nm。结果槲皮素在0.009024µg～0.054144µg范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r2=0.9998，n=6），平均回收率为93.91%(RSD=0.91%)。结论该测定方法精密度高，重现性好，可用于小儿七星茶冲剂的质量控制。

小儿七星茶冲剂；槲皮素；HPLC

小儿七星茶冲剂收载于部颁标准（WS3-B-1689-94）中，由山楂、稻芽、薏苡仁、淡竹叶、钩藤、蝉蜕、甘草等七味药材制成，各药材之间搭配合理，相辅相成，山楂和稻芽为君药治疗主症，薏苡仁和淡竹叶为臣药直接加强君药治疗主症的作用，甘草为使药调和诸药，更安全更全面对抗幼儿体内的各种“火源”。小儿七星茶冲剂质量标准的不足之处为未收载含量测定项，因此存在一定欠缺。本研究的主要目的是建立小儿七星茶冲剂稳定的含量测定方法。本研究曾对处方中甘草的成分甘草苷[1]、山楂的成分熊果酸等物质进行了的含量测定研究，测定甘草中的甘草苷时，由于阴性供试品溶液始终存在杂质干扰，分离度不易达到要求；制剂中熊果酸含量很低，不易测得，与肖树雄[2]等的研究结果一致。因此本文重点讨论测定山楂中得槲皮素含量测定。

山楂为方中君药之一，具有消食健胃、活血化瘀、收敛止痢之功效。山楂主要含有黄酮类物质、有机酸如绿原酸、咖啡酸及鞣质、鞣酐、表儿茶酚、齐墩果酸、熊果酸等成分。槲皮素是山楂黄酮类物质的代表性成分，具有较强的生理活性，有文献报道该成分具有较好的祛痰止咳、抗血栓及抗氧化作用[3]。很多研究者以槲皮素作为山楂药材及含有山楂中药复方制剂质量控制的含测指标[4-5]，因此本研究采用HPLC法测定小儿七星茶冲剂中槲皮素的含量，经方法学验证，该方法具有重现性好、准确、分析快速、灵敏度高，且制得的样品溶液稳定性高，可用于小儿七星茶冲剂的质量控制。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪（2487型DAD检测器），迪马C-18柱（250×4.6mm，5μm）；BP211D电子天平（德国赛托利斯）。小儿七星茶冲剂（市售）；槲皮素对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：10081-200406）；乙腈（色谱纯）；水为重蒸水，其它实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件和系统适用性试验以甲醇-0.4%磷酸（50:50，PH3.0）为流动相，流速为1.0ml•min-1；色谱柱：迪马C-18（250×4.6mm，5μm）；检测波长为360nm。取供试品溶液10μl注入液相色谱仪测试，供试品溶液中槲皮素可与其他物质基线分离，槲皮素的保留时间约为 15.2min，且阴性对照供试液在相同时间无色谱峰。理论塔板数以槲皮素计不低于4000。

图3 阴性对照溶液HPLC色谱图

2.2溶液的制备①对照品溶液：精密称取槲皮素对照品适量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml中含2.5µg的溶液，摇匀，滤过，即得。②供试品溶液：取本品适量，研细，取细粉约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加 30ml盐酸甲醇溶液（取甲醇与25%盐酸，按体积比4:1混合，摇匀），置水浴中回流 30min，取出，立即冷至室温，转移至 50ml量瓶，用甲醇洗涤烧瓶，洗涤液与样品溶液混合，以甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。③空白对照溶液：按处方称取缺山楂的各味药材，照小儿七星茶冲剂生产工艺制备缺山楂空白对照颗粒，取缺山楂空白对照颗粒适量，照供试品溶液项下自“研细，取细粉约 2g”，同法操作，制备缺山楂空白对照溶液。

2.3线性关系考察称取槲皮素对照品适量，精密称定为11.28mg，置50ml量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，取1.0ml置25ml量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml中含9.024µg的溶液，摇匀，0.2µm微孔滤膜滤过，即得（浓度为9.024µg•ml-1）。分别精密吸取槲皮素对照品溶液 1、2、3、4、5、6ml，置10ml量瓶，以甲醇稀释至刻度，摇匀，0.2µm微孔滤膜滤过，得系列对照品溶液。分别精密吸取系列对照品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，以槲皮素峰面积（A）为纵坐标，槲皮素进样量（µg）为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归得回归方程为：Y=3958035.7X－1783.9，r2=0.9998（n=6），结果表明槲皮素进样量在0.009024µg～0.054144µg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.4专属性试验分别吸取空白对照溶液、供试品溶液、对照品溶液（080421）各10μl，注入液相仪，记录色谱图，见图1～3，结果表明空白对照溶液对小儿七星茶冲剂中槲皮素测定无干扰。

2.5精密度试验精密吸取 2.2项下供试品溶液（080421）10μl，在上述色谱条件下，重复进样 6次，以峰面积A计算RSD=2.15%，表明本实验精密度良好。

2.6重复性试验取本品同一批号样品（080421）6份，按供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定，外标法计算，槲皮素平均含量为0.05397mg/g，RSD＝3.34%，结果表明本方法具有较好的重现性。

2.7稳定性试验精密吸取 2.2项下供试品溶液（080421）10μl，分别在 0、1、2、3、4、5、6h进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积A计算RSD=2.15%，说明样品溶液中的槲皮素在6h内稳定，可满足测定的需要。

2.8加样回收率试验取已知槲皮素含量的小儿七星茶冲剂（槲皮素平均含量为 0.05397mg/g）0.75g，精密称定，共计6份，分别精密加入槲皮素对照品储备液（每1ml中含槲皮素0.0344mg）1.0ml，加盐酸甲醇溶液25ml，按正文含量测定项下方法测定，槲皮素平均加样回收率为93.91%，RSD=0.91%，结果显示本测定方法具有较好的加样回收率，结果见表1。

2.9样品含量测定取小儿七星茶冲剂（080421、080513、080517），按2.2①项下对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按2.2②项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别进样10μl，记录峰面积，外标法计算槲皮素的含量，结果见表2。

表1 槲皮素加样回收率试验结果（n=6）

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

有学者对小儿七星茶冲剂或糖浆的质量标准做了有益的探索，如肖树雄[2]等测定了制剂中甘草酸铵的含量，曾常青[6]、李亚萍[7]等测定了制剂中钩藤碱的含量。笔者认为，测定制剂中钩藤碱时，不仅存在环境污染问题，且样品前处理需采用有机试剂进行5次以上液液萃取，操作步骤复杂。另外钩藤碱稳定性较差，在极性条件下易异构化和酯键受热易分解，故需要控制整个前处理过程的温度、pH等条件，不利于方法的推广。而测定小儿七星茶冲剂中的槲皮素含量，操作步骤简单，供试品溶液稳定性好，对指标成分的损失非常少，适宜推广应用。本研究色谱条件参考《中国药典》2010年版一部银杏叶项下含量测定方法[8]，槲皮素的 tR 约为15.2min，阴性对照溶液对槲皮素的测定无干扰。

[1]颜仁梁,刘志刚,罗佳波.HPLC测定小儿七星茶冲剂中甘草苷含量[J].中华中医药学刊,2009,29(10):2226-2228.

[2]肖树雄,贾宜军.小儿七星茶糖浆质量标准提高研究[J].中成药,2008,30(7):3-6.

[3]于夏,唐滋贵.槲皮素的研究进展[J].河南职工医学院学报,2011,23(3):391-392.

[4]黄怡,彭缨,高品一,等.HPLC法同时测定山楂叶提取物中4种成分的含量[J].沈阳药科大学学报,2011,28(2):135-138.

[5]李玉洁.正交试验法优选山楂精降脂片中山楂提取物的提取方法[J].福建中医药,2011,42(4):54-55.

[6]曾常青,许李文,罗泉珍.小儿七星茶冲剂质量标准研究[J].中成药,2006,28(3):363-366.

[7]李亚萍,雷晓林,庄义修,等.高效液相色谱法测定小儿七星茶冲剂中钩藤碱含量[J].中国医院药学杂志,2007,27(12):1783-1784.

[8]国家药典委员会.中国人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:296-297.

Content Mensuration of Quercetin in Xiao’er Qixingcha Chongji by HPLC

Li Dong Liu Zhigang

ObjectiveTo establish the determination of Quercetin in Xiao’ er Qixingcha Chongji.MethodsThe determination was carried out by HPLC with a KromasilC-18 column (250mm×4.6mm,5μm),Methanol -0.4% Orthophosphoric acid (50∶50) severed as the mobile phase,the speed was 1mL/min and the detection wavelength was at 360nm.ResultsQuercetin showed a good linear relationship at the range of 0.009024µg～0.054144μg (r2=0.9998,n=6); The average recovery of Liquiritin was 93.91% (RSD=0.91%).ConclusionThe method is sensitive,accurate,reproducible,specific and can be used for quality control of Xiao’er Qixingcha Chongji efficiently.

Xiao’ er Qixingcha Chongji;Quercetin;HPLC

广州军区广州总医院药学部，广东广州 510010

李冬(1989-)，女，广东揭阳人，学士，广州军区广州总医院药学部药师，主要从事中药化学、分析学研究。