草木樨中香豆素类化合物的研究进展

汤春妮，樊 君

(1.陕西国防工业职业技术学院化学工程学院，陕西 西安 710302；2.西北大学化工学院，陕西 西安 710069)

草木樨(Melilotus)为豆科(Leguminosae)一年生或二年生草本植物，主要分布在中亚、北非和欧洲等地，我国也有大面积种植，主要为黄花草木樨和白花草木樨。草木樨含有多种活性成分，如香豆素类、黄酮类、酚酸类、甾体类、三萜类、糖类等[1]。研究表明，草木樨香豆素作为主要的药效成分，具有很强的抗炎、镇痛、消肿、改善血管通透性、抗菌、抗病毒等药理作用[2～4]，国外已有产品上市，如消脱止-M(草木樨流浸片、草木樨流浸液)[5]等，而国内草木樨香豆素的开发利用业已开始。作者在此综述了草木樨中香豆素类化合物的化学成分、含量测定、提取纯化工艺、药理作用等方面的研究进展，并展望了其应用前景。

1 化学成分

草木樨中香豆素类化合物是以香豆素(苯并α-吡喃酮)为母核的天然产物，多以游离态或与糖结合成甙的形式存在，常在3,4,6,7位有取代基。国外有报道称黄花草木樨中香豆素(Coumarin)的比例占其总香豆素类化合物的89％以上[6]。而国内李静[1]研究表明黄花草木樨中香豆素的比例占总香豆素类化合物的80％以上。草木樨中香豆素类化合物的结构式见图1。

图1 草木樨中香豆素类化合物的结构式

R1=R2=R3=R4=H，拟雌内酯(Coumestrol) R1=R2=R3=H，R4=CH3，4′-邻甲基拟雌内酯(4′-o-Methycoumestrol) R1=R2=H，R3=OCH3，R4=CH3，7-羟基-4′,5′-二甲氧基拟雌内酯(7-Hydroxy-4′,5′-dimethoxy-coumestrol) R1=H，R2=OH，R3=R4=H，Melimessanol A

2 含量测定

由于草木樨原料成分复杂，故其粗提物中香豆素类化合物的含量测定通常先分离再测定。其测定的对照品均为香豆素，测定依据为香豆素的紫外特征吸收(香豆素类化合物中含有的吡喃酮和苯环结构)或显色后的可见光吸收。目前，测定草木樨香豆素含量的方法有薄层扫描法、分光光度法、液相色谱法等，其中高效液相色谱法应用最广。

2.1 薄层扫描法

孙居民等[7]先用硅胶GF254板、冰乙酸∶甲苯(1∶5)展层剂分离草木樨乙醚粗提物后，再用薄层层析扫描仪(配TR-85-1型紫外检测仪)双波长扫描(λS=270 nm、λR=325 nm)定量测定草木樨中香豆素含量(回收率98％～105％)。乌云等[8]用硅胶GF254板、石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶0.1)展层剂分离草木樨乙醚粗提物后，在薄层色谱扫描仪上用单波长扫描(273.5 nm)测定草木樨中香豆素含量(回收率98.37％)。

2.2 分光光度法

刘福林等[9]将草木樨提取物(用乙醚、NaOH碱液结合乙醇提取)用TLC分离提纯后，加2％ Na2CO3和重氮化试剂(对硝基苯胺溶液和亚硝酸钠溶液，临用前混合)显色，用721-2型分光光度计在490 nm下通过标准曲线法测定香豆素含量。李瑜等[10]利用香豆素在碱性(10％氢氧化钾)条件下与胺(7％盐酸羟胺)作用后再与Fe3+(10％三氯化铁)作用生成紫红色物质，在570 nm下用721型分光光度计测定草木樨香豆素含量。研究表明，当草木樨香豆素提取物纯化至80％以上时，可采用紫外分光光度法(检测波长310 nm，外标法)直接测定香豆素含量，与HPLC法[11]测定结果基本一致。

2.3 液相色谱法

张兴福等[12]用DIONEX液相系统、天河-C18柱(250 mm×4.6 mm，10 μm)，检测波长273 nm，以1.0 mL·min-1的乙腈-水-冰醋酸(20∶80∶1)为流动相，按外标法测定了70％乙醇热回流提取的草木樨中香豆素的含量。欧洲药典(第五版)[13]中用R-C18柱，检测波长275 nm，以1.7 mL·min-1的乙腈- 5 g·L-1磷酸水溶液(22∶78)为流动相，测定了草木樨的甲醇回流提取物中香豆素含量。Martino等[14]采用LiChrosorb RP-18柱(250 mm×4.6 mm，7 μm)，用0.7 mL·min-1的0.01％ Ortophosphoric 酸的水溶液、甲醇和乙腈进行梯度洗脱，检测波长275 nm，测定了微波、超声、索氏3种方法提取的草木樨中香豆素含量。郑国华等[15]用DIONEX色谱仪，Agilent Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长273 nm，以1.0 mL·min-1的乙腈-0.3％磷酸(35∶65)为流动相，测定了超声、索氏、回流3种方法提取的草木樨中香豆素含量。高成富等[16]用Agilent 1100 分析型HPLC，YWG-C18柱，检测波长276 nm，以1.0 mL·min-1的乙腈-水-甲酸(23∶77∶0.2)为流动相，柱温25 ℃，测定了乙酸乙酯热回流提取的草木樨提取物中香豆素含量。朱宏[11]用Agilent XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长310 nm，以1.0 mL·min-1的甲醇-水(65∶35)为流动相，柱温35 ℃，测定了80％乙醇超声法提取的草木樨中香豆素含量。

3 提取纯化工艺

3.1 提取工艺

高成富[17]以甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、正丁醇为溶剂，采用加热回流提取、索氏提取、超声提取、超临界萃取等方法提取草木樨，制成草木樨浸膏。例如，称取粉碎成粗粉的药材，用10倍量乙酸乙酯热回流提取3次，每次1 h，合并提取液后减压浓缩，浓缩液置于80 ℃烘箱烘干得提取物。

3.2 提取纯化工艺

3.2.1 热回流提取-大孔树脂纯化工艺

陶君彦等[18]的提取纯化工艺为：用50％乙醇溶液热回流提取黄花草木樨原料，提取液经9倍浓缩，浓缩液用YWD07D1大孔树脂吸附，80％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，烘干得产品。该方法制得的产品中香豆素含量为50％，但此工艺粗提液未经处理就直接用大孔吸附树脂吸附，容易堵塞、污染树脂，树脂的处理量较小(仅为58 mg·g-1)。

3.2.2 热回流提取-脱色-萃取-大孔树脂纯化工艺

朱宏[11]的提取纯化工艺为：用80％乙醇溶液热回流提取黄花草木樨原料，提取液经3倍浓缩，浓缩液用石油醚脱色后，用氯仿萃取，萃取液用LSA-40大孔树脂吸附，70％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，烘干得产品。该方法制得的产品中香豆素含量为30％～50％，纯化过程中香豆素保留率较低、树脂处理量较小。

3.2.3 热回流提取-萃取-大孔树脂纯化工艺

汤春妮[19]的提取纯化工艺为：用50％乙醇溶液热回流提取黄花草木樨原料，将提取液浓缩至香豆素浓度为0.2 mg·mL-1，浓缩液用乙酸乙酯萃取，再用HPD 300大孔树脂吸附，50％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，结晶，烘干得产品。该方法制得的产品纯度可达97％以上，其树脂吸附量约475.02 mg·g-1干树脂。

3.3 消脱止-M的部分生产工艺

日本生晃荣养药品株式会社公布的消脱止-M(草木樨流浸片、草木樨流浸液)的部分工艺[20]为：用50％乙醇溶液浸提黄花草木樨原料，提取液经5倍浓缩，浓缩液经纯化后(此部分工艺未见公布)，添加麦芽糊精和二氧化硅微粒，喷雾干燥得产品。该工艺制得的产品中主要药效成分香豆素的含量为20％。

4 药理作用及应用现状

4.1 抗炎、镇痛作用

Plesca-Manea等[21]研究表明，含有0.25％香豆素的草木樨提取物与氢化可的松钠具有类似的抗炎作用，其抗炎机理可能是草木樨提取物减少了循环吞噬细胞的激活和瓜氨酸的产生。Földi-Börcsök等[22]研究表明，小鼠静脉注射12.5～100 mg·kg-1的香豆素，结果表现出与剂量直接相关的抗炎、消肿的功效；皮下注射草木樨香豆素提取物可减轻甲醛引起的老鼠后爪水肿症状。高成富[17]研究发现草木樨香豆素提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抗炎镇痛效果非常好。近年来，日本生晃荣养药品株式会社生产的消脱止-M(草木樨流浸片、草木樨流浸液)的主要成分为香豆素(香豆素含量不低于20％)，用于痔和皮肤擦伤的治疗，效果良好。

4.2 改善血管通透性、改善血液循环

Zoltán等[23]采用含有1 mg·mL-1香豆素的黄花草木樨提取物制成的制剂Esberiven给小鼠肌肉注射，结果发现其能通过阻止淋巴脑病引起的神经条件反射迟缓而保护中枢神经系统。Földi等[24]研究发现草木樨中分离的香豆素(主要成分是香豆素和芸香甙)对患有淋巴血管静脉炎的狗的血流量具有较好的稳定作用。Kovach等[25]从黄花草木樨中分离到香豆素，给狗灌胃后发现，其能降低脉搏频率，增加动脉心脏压力、心率、心脏血容量以及大脑皮层、心肌层、肾脏外皮、肝和条纹肌的毛细血管循环。瑞士LINNEA公司开发了黄花草木樨提取物[26](香豆素含量不低于17％)，大量临床试验表明该产品可用于治疗慢性静脉功能不全、下肢淋巴水肿，改善静脉和淋巴循环、上皮细胞缺氧，增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，促进胃肠运动，加快伤口愈合，抑制热水肿，减轻产科和妇科的毛细血管脆弱症状，治疗痔疮等。

4.3 改善血管平滑肌功能

Mislin[27]通过动物实验证实香豆素对于豚鼠体外淋巴血管平滑肌有明显的调节作用，能够加快脉搏速度，增加血管容量和血循环，并激活血管收缩，从而具有调节血管收缩无力的作用。Zoltán等[28]研究表明，草木樨中分离得到的香豆素能够减轻小鼠和豚鼠由异烟肼或者戊四唑引起的痉挛。

4.4 抗菌、抗病毒作用

高成富等[16]研究发现，草木樨香豆素提取物具有抗埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、变性球菌、白色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等常见致病菌的作用。杜晓峰等[29]测定了不同溶剂的黄花草木樨提取物对植物病原真菌的抑菌活性，结果发现，黄花草木樨的乙酸乙酯提取物对玉米大斑病菌、油菜菌核病菌、白菜黑斑病菌、稻瘟病菌以及番茄灰霉病菌的抑菌活性高，对小麦条锈病和白粉病也有较好的防治效果。

4.5 抗凝血作用

草木樨香豆素通过抑制多种血管活性物质释放，抑制ADP和胶原诱导的血小板凝集，并抑制5-HT、血小板第Ⅳ因子、TXA、PDGF血小板的释放，可有效地改善患者术后的高凝状态。同时能增强血管强度和弹性，降低血管阻力，促进血液流动和循环，从而有效地预防下肢静脉血栓。钱爱民等[30]采用手术联合草木樨流浸液片治疗慢性下肢静脉功能不全，临床结果表明，患肢的疼痛、肿胀、溃疡及色素沉着等症状明显改善。张强等[31]用草木樨流浸液片治疗下肢深静脉血栓形成后遗症(PTS)，疗效显著、安全、依从性好。

此外，草木樨香豆素还具有雌激素样作用等药理作用。

5 展望

草木樨中有效成分(香豆素、黄酮等)的开发是中药现代化的任务之一。目前，草木樨香豆素类化合物的化学成分、含量测定、提取纯化工艺研究较多，药理研究集中于上个世纪，而质量标准鲜有报道。随着相关研究的进一步深入，其有望开发成一类具有较高经济效益和社会效益的产品，广泛应用于医药、保健品及功能食品。

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