参麦注射液对肺心病急性加重期患者PAC-1和CD62p表达的影响

叶远玲 章渭方

[摘要] 目的 通过检测肺心病急性加重期患者在应用参麦注射液治疗前、后血小板PAC-1（血小板激活复合物-1）和CD62p（p-选择素）表达水平的变化，观察参麦注射液的临床疗效，并探讨其在肺心病急性加重期治疗过程中可能的新的作用机制。 方法 将入选的60例肺心病患者随机分为治疗组和对照组，两组均作常规治疗，治疗组在此基础上加用参麦注射液。并分别于治疗前、后采静脉血，应用流式细胞仪检测比较两组全血活化血小板标记物PAC-1和CD62p水平的变化。同时观察两组患者的临床疗效及治疗前后血液流变学的变化。 结果 治疗组加用参麦注射液治疗后患者血小板PAC-1和CD62p的阳性百分率分别从（72.63±5.62）%和（52.81±7.42）%下降为（58.42±5.49）%和（42.19±5.46）%，差异具有高度的统计学意义；而对照组未见上述变化。同时对临床疗效观察发现治疗组和对照组的总有效率分别为80.0%和63.3%，差异有统计学意义（P＜0.05）；且治疗组对血液流变学的影响明显优于对照组（P＜0.05）。 结论 参麦注射液可显著提高肺心病急性加重期患者的临床疗效，其作用机制可能与抑制肺心病患者外周血小板表面PAC-1和CD62p表达，降低血小板活性有关。

[关键词] 参麦注射液；肺心病；PAC-1；CD62p

[中图分类号] R541.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）01-056-03

Influence of Shenmai injections on expression of PAC-1 and CD62p in patients with acute serious chronic pulmonary heart disease

YE Yuanling1 ZHANG Weifang2

1.Department of Emergency, Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine (TCM), Hangzhou 310006, China; 2.Surgical Intensive Care Vnit, the First Affiliated Hospital of Zhejiang University，Hangzhou 310006, China

[Abstract] Objective By detecting the difference of expression level on PAC-1 and CD62p before and after the treatment of Shenmai injections in the patients with acute serious chronic pulmonary heart disease，the clinical therapeutic effect and possible role of the Shenmai injections in the treatment of the chronic pulmonary heart disease are studied and analyzed. Methods All of 60 patients with acute serious chronic pulmonary heart disease were randomly divided into treatment group and control group. Conventional treatment was taken for both of them，while the treatment group had additional application of Shenmai injections. By collecting venous blood samples before and after the treatment，positive rates of PAC-1 and CD62p were measured using the flow cytometry， and the difference of them were compared between two groups. Meanwhile, the clinical therapeutic effect of two groups and the difference of the blood rheology before and after the treatment were also observed. Results The positive expression rate of PAC-1 and CD62p of the patients in treatment group declined from (72.63±5.62)% and(52.81±7.42)% to(58.42±5.49)% and(42.19±5.46)%， with significant statistical differences; while the control group had no above changes. The total effective rate of the treatment group and control group were found as 80.0% and 63.3% separately，with significant differences (P＜0.05), and the influence of the blood rheology in treatment group was significantly higher in the control group (P＜0.05). Conclusion The Shenmai injections can significantly improve the clinical therapeutic effect of the patients with acute serious chronic pulmonary heart disease，the mechanism of action can be in relation with reducing the expression of PAC-1 and CD62p，and inhibiting the platelet activity.

[Key words] Shenmai Injections; Chronic pulmonary heart disease; PAC-1; CD62p

随着医学科技的飞速发展，近些年来人们对血小板活化在炎症、血栓性疾病的发生发展过程中的重大作用已有共识，COPD是我国的常见病、多发病，肺心病作为其主要并发症，严重影响患者的生活质量，是其死亡率升高的主要原因，故血小板活化功能亢进与肺心病的关系日益受到医疗工作者的重视。近年来，对肺心病死亡患者进行的尸检报告中表明，约有89.8％的病例发现了肺细小动脉原位血栓[1]。有研究报道[2]，在感染、缺氧、氧自由基、组胺等因素刺激下，肺心病患者的血小板明显活化后，PAC-1和CD62p表达水平显著增加，患者微小血栓形成，加重了肺动脉高压，从而使病情恶化。而本研究则主要针对参麦注射液在肺心病急性加重期患者治疗中的较好疗效，比较了患者用药前、后血小板PAC-1和CD62p表达水平的变化，以期探讨参麦注射液在肺心病急性加重期治疗中过程中可能的新的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

根据1977年全国第二次肺心病专业会议制定的诊断标准，选取2009年3月～2011年3月我院收治的肺心病急性发作期患者60例。将其随机分为治疗组和对照组各30例，治疗组中男18例，女12例，年龄41～82岁，平均（56.2±5.3）岁，病程5～10年；对照组男19例，女11例，年龄40～83岁，平均（56.5±6.2）岁，病程4～12年。两组观察者在性别、年龄、病程分布方面差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有参与研究的患者均无糖尿病、血液系统疾病，排除肝肾功能不全及短期内脑梗死情况，近期均无包括阿司匹林、波立维、潘生丁、华法林、肝素等影响血小板功能及凝血功能的药物使用史。

1.2 治疗方法

两组患者均常规给予吸氧，化痰、解痉、平喘、通畅气道，有效抗生素控制感染，适当强心、利尿，并维持水、电解质及酸碱平衡，营养支持等综合治疗。治疗组在上述基础上加用参麦注射液（由正大青春宝药业有限公司生产， 批准文号：国药准字Z33020021，每1 mL相当于生药人参、麦冬各0.1 g）30 mL溶于5%葡萄糖250 mL中静脉滴注，每日1次，连续应用14 d为一疗程。

1.3 流式细胞仪检测方法

1.3.1 试剂和仪器异硫氰酸荧光素（FITC）标记的单克隆抗体PAC-1 FITC，藻红蛋白（PE）标记的单克隆抗体CD62p-PE，对照剂鼠抗人IgG1-FITC、IgM-PE均购于Beckman-Coulter公司。流式细胞仪采用美国BD公司的FAGS Calibur型流式细胞仪，并采用CellQuest获取和分析信息。

1.3.2 样本采集和制备①分别在治疗前及治疗一个疗程后，取EDTA抗凝血5 μL分别加入对照管和检测管管底，再加入100 μL PBS；②取IgG1-FITC和IgM-PE各10 μL加入对照管，取PAC-1 FITC和CD62P-PE各10 μL加入到检测管，混匀后室温避光保存15 min；③加入2～3 mL PBS（1.0%PFA）终止反应；④24 h内上机分析。

1.4 疗效判定标准

依据《现代内科治疗学》中肺心病急性发作期疗效综合判定标准[3]：显效：临床症状显著减轻，肺部啰音消失或显著减少（肺底偶尔闻及少量细水泡音），紫绀明显减轻，水肿消失或明显减轻，心率降至100次/min以下，心功能改善2级以上，尿量每天较前增加600 mL以上，体重减轻4%，未梢循环好转；有效：上述指标部分减轻或有好转；无效：上述各项指标均无好转。

1.5 统计学处理

采用SPSS15.0统计程序，计数资料采用χ2检验；计量资料以（χ±s）表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对血小板PAC-1和CD62p表达水平的影响

各组血小板PAC-1和CD62P表达的阳性率见表1。从表1中可见，加用参麦注射液治疗后，肺心病患者血小板PAC-1和CD62p的阳性率较治疗前显著下降（P＜0.05），而常规治疗组治疗前后各项指标虽有下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 治疗效果

2.2.1 临床疗效观察临床疗效观察发现治疗组和对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.2.2 对血液流变学的影响如表3所示，治疗组对血液流变学的影响明显优于对照组。治疗组治疗前后比较，各项指标差异均有统计学意义（P＜0.05）；而对照组治疗前后比较，各项指标虽有下降，但差异没有统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

目前普遍认为，血小板只有活化了才能实现黏附、释放、变形、聚集等功能，并粘附于内皮细胞形成聚集物，导致高凝状态，从而引起血栓形成。血小板活化通过多条途径导致COPD患者肺循环高凝状态和肺小动脉原位血栓形成，参与肺心病的发生、发展及转归过程中。血小板活化释放大量炎症介质，多种分子标志物的表达显著增加，其中PAC-1和CD62p是最具特异性血小板活化标志物。PAC-1（血小板激活复合物-1）是现阶段最新的特异性激活GPⅡb/GPⅢa的单克隆抗体，只能与活化血小板上的GPⅡb/GPⅢa结合，其能促进血小板与内皮细胞间的黏附以及血小板的相互聚集，是GPⅡb/Ⅲa激活的特异性标志，是反映血小板活化的早期标志物。CD62p是血管黏附分子家族中的一员，是反映血小板晚期的活化状态分子标志物[4]。当血小板和血管内皮细胞受到各种因素刺激后，血小板α颗粒和中等以上大血管内皮细胞中的Weiber-Palade小体质膜迅速与其他组织细胞膜相融合，主要储存于α颗粒及Weiber-Palade小体内的CD62p被释放后在细胞表面迅速而持久的表达[5]，因为其只能在脱颗粒的活化血小板表面表达的特性，其表达水平在未活化和活化的血小板之间差别显著，故特异性好，是活化血小板最常用的分子标志物之一。同时CD62p还具有介导活化血小板与中性粒细胞和单核细胞的黏附功能，进一步增强血小板功能。研究表明，肺心病患者在微生物感染、缺氧状态下，血管内皮细胞损伤、细菌内毒素、氧自由基、5-羟色胺、组胺、肿瘤坏死因子等炎症介质等刺激下，血小板明显活化，促使PAC-1、CD62p表达显著增加，促进肺心病患者微小血栓形成，加重高凝状态及肺动脉高压，使病情进一步恶化。

参麦注射液是我国的传统中药制剂，由人参、麦冬二味中药制成。两药合用具有协同效应，药理实验证实参麦注射液可增强心肌收缩力，扩张血管，减轻外周血管阻力，降低心脏前后负荷，增加组织器官的血供，提高动脉血氧分压，改善组织器官的缺血缺氧状态。此外，参麦注射液还具有调节机体细胞免疫及体液免疫功能，能提高肺心病患者抗感染的能力[6]，减轻气道炎症，有利于肺部感染的控制。因此在前期大量的研究中已证实了参麦注射液在肺心病治疗中的临床疗效[7-8]。而本实验则重点关注了参麦注射液对于肺心病患者血小板活化及血液流变学的影响，实验分析了肺心病患者应用参麦注射液治疗前、后血小板表面PAC-1和CD62p表达变化，结果显示用参麦注射液治疗后肺心病患者外周血小板表面PAC-1和CD62p的表达，较对照组有显著的下降，血小板活性明显下降，且治疗组对血液流变学的影响也明显优于对照组。提示在肺心病患者治疗过程中，在常规治疗的基础上，加用参麦注射液能够有效改善肺心病的临床症状，其作用机制除了参麦注射液可明显增强心肌收缩力，减轻心脏前后负荷，提高心输出量相关外，还可能与其能够抑制血小板表面PAC-1和CD62p蛋白的表达，进而抑制血小板的活化和聚集、抑制凝血系统，从而改善微循环，降低血液黏稠度，阻碍肺心病患者微小血栓形成有关。

[参考文献]

[1]王辰，杜敏捷，曹大德，等. 慢性肺原性心脏病急性发作期肺细小动脉血栓形成的病理观察[J]． 中华医学杂志，1997，77（2）：123-125.

[2]卞京文，黄茂，马莉，等． PAC-1、CD62p检测在慢性阻塞性肺疾病患者防治中的应用价值[J]. 实用临床医药杂志，2010，14（17X）：29-32.

[3]宋善俊. 现代内科治疗学[M]. 北京：科学技术文献出版社，1999：537.

[4]Metzelaar MJ，Heijnen HF，Sixma JJ，et al. Identification of a 33-Kd protein associated with the alpha-granule membrane（GMP-33） that is expressed on the surface of activated platelets[J]. Blood，1992，79（2）：372-379．

[5]Barkalow FJ，Barkalow KL，Mayadas TN．Dimerization of P-selectin in platelets and endothelial cells[J]. Blood，2000，96（9）：3070-3077.

[6]袁兴华. 参脉注射液和黄芪注射液联用治疗肺心病急性加重期疗效观察[J]. 中国医药导报，2008，5（19）：87-88．

[7]肖春. 参麦注射液治疗肺心病30例疗效观察[J]． 检验医学与临床，2011，8（5）：611-612.

[8]廖积岳. 参麦注射液佐治慢性肺心病急性发作的疗效观察[J]. 中国高等医学教育，2011，2：146.

（收稿日期：2011-10-17）