P105和PTEN在皮肤鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

方木平 易海英 刘汉忠

[摘要]目的：观察皮肤鳞状细胞癌（SCC）中P105和PTEN蛋白的表达情况，探讨其表达与临床病理特征的关系。方法：用免疫组化SP法检测52例皮肤鳞状细胞癌组织和10例正常皮肤组织石蜡标本中P105和PTEN蛋白的表达。结果：在SCC标本中，P105蛋白阳性表达率明显高于正常皮肤组织（P<0.05）；PTEN蛋白阳性表达率明显低于正常皮肤组织（P<0.001）。在低分化SCC标本中， P105蛋白的阳性表达率高于高中分化组，PTEN蛋白的阳性表达率低于高中分化组（P均<0.001）；P105蛋白的阳性表达与病理分级呈明显正相关，PTEN蛋白阳性表达与病理分级呈明显负相关（P均<0.05）。结论：在SCC 组织标本中，P105强表达，PTEN蛋白低表达或不表达，这可能是细胞恶性转化和增殖的信号，也是肿瘤具有侵袭性的标志。

[关键词]癌，鳞状细胞；P105蛋白；PTEN蛋白；免疫组化

[中图分类号]R739.5[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2012）01-0061-03

The expression and investigate of P105 and PTEN protein in cutaneous squamous cell

FANG Mu-ping1,YI Hai-ying2,LU Han-zhong3

(1.Department of Dermatology,2.Department of newborn,3.Departmentof pathology,Center Hospital ofXiaogan 432000,Hubei,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression and its relation to clinicopathological characteristis of P105 and PTEN protein in cutaneous squamous cell carcinoma.MethodsExpression of P105 and PTEN protein was detected in 52 SCC and 10 normal skin specimens by SP immunohistochemical technique.ResultsThe positive rate of P105 protein significantly higher in SCC specimen than that in normal skin（P<0.05）.The positive rate of PTEN was significantly lower in SCC than that in normal skin (P<0.001) in SCC specimen.The positive rate of P105 protein was higher than them in the high-middle differentiation group,The positive rate of PTEN protein was lower than them in the high-middle differentiation group(P<0.001) in Low differentiation of SCC pecimen.A significant positive relationship was observed between the expression of P105 and significant negative relationship of PTEN protein is relation to pathologicalgrading in SCC(P<0.05).ConclusionsThe enhance ofP105and the decrease or negative prefix deletion of PTEN protein expression will result in the m alignant transformation and proliferation, and tumour has an aggressive marks in SCC specimen.

Key words:cutaneous squamous cell carcinoma;P105 protein;CD105 protein;PTENI protein;immunohistochemistry

皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma，SCC）是起源于上皮组织中角质形成细胞的常见恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势，特别是老年人群[1]。P105与Ki-67类似，是一种增殖相关核抗原，在细胞周期调节过程中起重要作用，在增殖细胞和高度恶性肿瘤中表达增强；PTEN是迄今发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，主要通过脱磷酸化作用调控细胞内信号传导通路，从而调节细胞的生长、发育及抑制肿瘤增殖、粘附、转移。本研究采用免疫组化SP法检测皮肤鳞状细胞癌组织和正常皮肤组织石蜡标本中P105和PTEN蛋白的表达情况，试图探讨其表达与临床病理特征的关系。

1资料和方法

1.1一般资料：收集本院皮肤科和病理科于2005年1月～2011年12月手术切除的52例皮肤鳞状细胞癌组织标本，均病历资料完整和病理诊断明确。男23例，女29例；年龄41～80岁，平均（65.2±2.1）岁，病程3个月～11年（平均1.3±0.4年）。按Broders病理分级法将其分为：Ⅰ级12例，Ⅱ级15例，Ⅲ级14例，Ⅳ级11例。Ⅰ级为高分化鳞癌，Ⅱ级为中分化鳞癌，Ⅲ级～Ⅳ级为低分化鳞癌。另选取10例皮肤外科手术室切除的正常皮肤组织标本作为对照组，男4例，女6例。

1.2 方法

1.2.1主要试剂：鼠抗人P105单克隆抗体（克隆号2B3）购自北京英硕力柏科技有限公司，PTEN单克隆抗体（克隆号28H6）和SP免疫组化试剂盒（浓缩型）均购自北京中山生物技术开发有限公司。

1.2.2实验方法采用免疫组化SP法，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行，用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。

1.2.3结果判定：由2位病理科医师和1位皮肤科病理医师共同评判。标准如下：①P105与PTEN根据着色强弱，染色强弱以多数细胞的呈色反应为准：不着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分；②低倍镜下选取细胞分布均匀的视野，高倍镜视野下用HMIAS高清晰病理彩色图像分析系统进行图像分析，每张切片在×40高倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计数阳性细胞数所占的百分比均值：<25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分。根据上述两项的记分之和将P105和PTEN蛋白阳性结果分为4级：阴性（-）为＜2分，弱阳性（+）为＜3分，阳性（2+）为3～4分，强阳性（3+）为＞4分。

1.3统计学处理：用SPSS13.0软件，均数均以x±s表示，计数资料采用卡方检验，组间比较采用单因素方差分析，用直线相关分析计算相关系数，并判定其相关程度。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 P105蛋白在SCC中的表达：见表1～2。P105蛋白主要表达于癌细胞核和细胞浆，在高分化鳞癌中，其分布以癌巢中心细胞为主，浆表达多于核表达（图1）；在低分化鳞癌中，其分布于整个浸润癌巢细胞中，核表达增多（图2）；P105蛋白表达与病理分级呈正相关关系（r=0.444,P<0.05），即病理分级越高，癌分化越差，P105蛋白表达越强（χ2=12.921,P均<0.05）；在增生活跃的正常表皮基底层中，仅有少数弱表达P105蛋白（1例）(10%)，在SCC中，P105蛋白的阳性表达率（61.54%）显著高于正常皮肤组织（10.00%），差异均有统计学意义(χ2=8.948， P均<0.05)。

2.2 PTEN蛋白在SCC中的表达：见表1～2。PTEN蛋白主要表达于正常细胞（图3），在SCC中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织(χ2=14.478, P<0.001)，PTEN的表达与病理分级呈负相关关系，即其病理分级越高，癌分化越差，PTEN的表达越弱(χ2=17.990,P<0.001) 。1例Ⅲ级鳞状细胞癌的PTEN蛋白强表达（图4）。另外，PTEN蛋白在高和中分化SCC中的表达也显著高于低分化SCC的表达(χ2=15.070, P<0.001)，差异均有统计学意义（P<0.001）。

2.3 皮肤鳞状细胞癌中P105和PTEN表达的相关性：在低分化（Ⅲ级+Ⅳ级）SCC中，P105蛋白的阳性表达率高于高中分化组（Ⅰ级+Ⅱ级），而PTEN蛋白的阳性表达率低于高中分化组（Ⅰ级+Ⅱ级），差异均有统计学意义χ2=10.263；χ2=15.070,P均<0.001）。在SCC中，P105蛋白的阳性表达与病理分级呈正相关（r=0.444,P<0.05）,但PTEN蛋白的阳性表达与病理分级呈明显负相关（r=-0.538，P<0.05）。

3讨论

肿瘤的发生、发展和浸润与多种癌基因强表达和抑癌基因低表达或失表达密切相关,是一种多基因、多因素相关性疾病。P105与Ki-67的分子量为105KD和41KD,在RNA代谢、RNA运输或细胞周期调节过程中起重要作用，在增殖细胞和高度恶性肿瘤中表达增强，可以识别恶性肿瘤。本研究也显示，其在SCC中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织，P105的表达与病理分级间存在正相关关系，即病理分级越高，癌分化越差，P105的表达越强。在食管鳞癌中， P105蛋白在细胞核与细胞质强表达，与肿瘤的发展关系密切[2]，本研究结果与之相似。

PTEN是继p53基因后被发现的一种能识别肿瘤的抑制基因，在细胞的生长、凋亡、黏附、迁移和浸润等方面有重要作用。PTEN蛋白失表达与一些恶性肿瘤的生物学行为和预后密切相关，阳性表达者多分化好、浸润较浅、不伴淋巴结转移和预后良好[3]。而本研究中，有1例低分化SCC强表达PTEN蛋白，其原因不明。Murao 等[4]研究发现，抑癌基因甲基化失活，是SCC发病原因之一。本研究发现，正常皮肤和SCC组织中PTEN蛋白表达于细胞核，这与周树伟等[5]的研究结果一致，但董晓群等[6]发现PTEN特异性地在皮肤、结肠、乳腺、前列腺中分布于细胞质。正常皮肤组织中PTEN蛋白阳性率高于SCC（χ2=14.478，P<0.001），其病理分级越高，阳性表达率越低，差异均有统计学意义（P均<0.001）。

肿瘤的发生和发展与肿瘤组织细胞异常增生、抑癌基因的失活密切相关。在SCC中，PTEN蛋白阳性表达率越高， P105蛋白的阳性表达率就越低。提示P105蛋白高表达，PTEN蛋白低表达或失表达可能与SCC的发生、发展及病理特征密切相关。故笔者认为，联合检测P105和PTEN蛋白可能为SCC的诊断及预后提供依据，可为手术或放射治疗SCC提供依据，减轻患者痛苦，有可能也为局部注射抑癌因子治疗SCC提供了理论依据。

[参考文献]

[1]赵天恩,郑家润. 皮肤鳞状细胞癌研究进展[J].国际皮肤性病学杂志，2006,32(4):247-250.

[2]Kang MR, Kim MS, Kim SS,et al. NF-kappaB signalling proteins p50/p105, p52/p100, RelA, and IKKepsilon are over-expressed in oesophageal squamous cell arcinomas[J].cPathology.2009,41(7):622-625.

[3]Depowski PL,Rosenthal SI,Ross JS.Loss of expression of the PTENgene protein product is associated with poor outcome in breast cancer[J].Mod Pathol,2001,14(7):672-676.

[4]Murao K, Kubo Y, Ohtani N,et al. Epigenetic abnormalities in cutaneous squamous cell carcinomas: frequent inactivation of the RB1/p16 and p53 pathways[J]. Br J Dermatol,2006,155(5):999-1005.

[5]周树伟,陈旻静. PTEN和P-ERK蛋白在皮肤鳞状细胞癌中的表达和意义[J].中国美容医学，2008,17(10):1483-1485.

[6]董晓群,周钢桥,褚嘉祐,等.PTEN基因与恶性肿瘤[J].国际肿瘤学杂志,2007,34（1）：2.

[收稿日期]2011-06-09 [修回日期]2011-09-26

编辑/张惠娟