蓝莓茎段初代培养技术

2012-04-29汤伟华

湖北农业科学 2012年6期

汤伟华

摘要：以４个蓝莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．）品种生长旺盛期的带芽茎段为供试材料，研究了不同品种、不同基本培养基、不同激素组合对蓝莓茎段初代培养的影响。结果表明，改良的ＷＰＭ为适合蓝莓茎段初代培养的基本培养基；添加生长素萘乙酸（NAA）对蓝莓茎段的发芽率并无促进作用，添加玉米素（Zt）能提高蓝莓茎段的发芽率，改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ０．５ｍｇ／Ｌ为蓝莓最佳诱导培养基；相同初代培养基上蓝莓不同品种侧芽萌发有先后，园蓝最早，芭尔德温次之，夏普兰最后。

关键词：蓝莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．）；茎段；初代培养

中图分类号：Ｓ６６３．９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）06－1263-02

Study on the Initial Culture Technology of Stem Segment of Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．

ＴＡＮＧＷｅｉ－ｈｕａ

（ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＢｒａｎｃｈ，ＬｉｓｈｕｉＶｏｃａｔｉｏｎａｌ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｉｓｈｕｉ３２３０００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｓｉｃｍｅｄｉｕｍ，ｈｏｒｍｏｎｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｎｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｉｎｉｔｉａｌｃｕｌｔｕｒｅｏｆ４Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．ｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ，ｔｈｅｍｏｄｉｆｉｅｄｓｏｌｉｄＷＰＭｍｅｄｉｕｍｗａｓｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｂａｓｉｃｍｅｄｉｕｍｆｏｒｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔ of Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．ｉｎｉｔｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ；ａｄｄｉｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｈａｄｎｏｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＶａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．；ｔｈｅｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈｚｅａｔｉｎｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＶａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ；ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｉｎｄｕｃｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｗａｓＷＰＭ＋６－ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ０．５ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｇｒｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｖａｒｉｅｔｉｅｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｍｅｄｉｕｍ，Ｇａｒｄｅｎｂｌｕｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｈｅｂｅｓｔ，ｗｈｉｃｈｗａｓｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＢａｌｄｗｉｎ；Ｓｈａｒｐｂｌｕｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｈｅｗｏｒｓｔ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．；ｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔ；ｉｎｉｔｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ

藍莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｓｐ．）又名越橘或蓝浆果（Ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ），属杜鹃花科越橘属落叶或半落叶灌木小果树。成熟的蓝莓口味酸甜适中，果肉细腻，清爽宜人，营养价值高，日本和美国都将蓝莓列为首要抗癌食品，国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一［１］。美国自２０世纪３０年代末开始对其进行商业性栽培，中国的蓝莓生产起步较晚，目前尚处于引种试验阶段，且引种工作正在日益扩大［２］，由于当前蓝莓种苗量少价高，因此迫切需要对蓝莓品种进行繁殖研究。目前国内有蓝莓组织培养技术研究的相关报道，但对不同蓝莓品种组织培养特性缺乏系统报道。为此，２００８年开始，从新昌县西山果业有限公司引进了兔眼蓝莓优良品种试种，并开展了不同品种组培无性繁育技术研究，现针结果报告如下。

１材料与方法

１．１材料

供试蓝莓品种为芭尔德温（Ｂａｌｄｗｉｎ）、粉蓝（Ｐｏｗｄｅｒｂｌｕｅ）、园蓝（Ｇａｒｄｅｎｂｌｕｅ）、夏普兰（Ｓｈａｒｐｂｌｕｅ），选取材料类型为生长旺盛期带芽茎段。

１．２方法

１．２．１材料处理从健康生长的植株上剪取当年生的枝条，去除叶片，先用肥皂水洗净，再用流水冲洗２ｈ。在超净工作台上先用体积分数为７０％的乙醇溶液表面消毒３０ｓ，然后用１ｇ／Ｌ的ＨｇＣｌ２浸泡８ｍｉｎ，用无菌水冲洗５次，用无菌滤纸吸去多余水分，最后将外植体剪成单芽茎段，分别接种到不同的初代培养基中。

１．２．２不同基本培养基、不同品种对蓝莓茎段初代培养的影响采用改良的ＷＰＭ［３］、Ｂ５、ＭＳ３种基本培养基，均添加Ｚｔ（玉米素）１．５ｍｇ／Ｌ、蔗糖２０ｇ／Ｌ、琼脂６ｇ／Ｌ，ｐＨ５．５。４个品种单芽茎段分别接种到不同的３种初代培养基中，共计１２个处理，每个处理４０瓶，培养４０ｄ后，通过统计茎段侧芽的成活率间接了解侧芽的发芽率，观察其生长状况。

１．２．３不同激素组合对蓝莓茎段初代培养的影响基于１．２．２的试验结果，挑选适宜的基本培养基及品种，采用６种激素处理：①改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ；②改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ；③改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ；④改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ０．５ｍｇ／Ｌ；⑤改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ１．０ｍｇ／Ｌ；⑥改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ２．０ｍｇ／Ｌ。３个品种，１８个处理，培养４０ｄ后，通过统计茎段侧芽的成活率间接了解发芽率，观察其生长状况。

１．２．４培养条件把培养瓶置于培养室里培养，培养温度为２５ ℃，光照度为２０００ｌｘ，光照时间为１２ｈ／ｄ。

２结果与分析

２．１不同基本培养基对４个蓝莓品种茎段初代培养的影响

蓝莓品种在３种基本培养基上的表现不同（表１）。在改良的ＷＰＭ培养基上，蓝莓茎段的平均成活率最高，且丛生芽分化和增殖生长最好，数量也最多，其次分别为在Ｂ５培养基和ＭＳ培养基上，而且蓝莓品种在后两种基本培养基上生长的外植体表现为丛生芽淡黄色，丛生芽分化和增殖生长差，因此Ｂ５培养基和ＭＳ培养基不太适合蓝莓茎段芽的诱导。不同蓝莓品种在改良的WPM培养基上的平均成活率以及丛生芽分化和增殖表现各异，其中表现最好的为园蓝，最差的为粉蓝，芭尔德温和夏普兰处于两者之间。

２．２不同激素组合对蓝莓茎段初代培养的影响

由表２可以看出，蓝莓在不同的激素组合下的平均成活率以及茎段丛生芽分化和增殖生长表现不同。

试验结果表明，蓝莓茎段的离体发芽率受到培养基中细胞分裂素的调控，添加生长素对其萌芽并无促进作用；在供试的细胞分裂素中，单独使用６－ＢＡ的组合的外植体也增殖，但其成活率和发芽率均低于或等于添加Ｚｔ的组合，对于处理①至处理③，随着培养基中添加的ＮＡＡ浓度的增加，蓝莓的平均成活率逐渐下降。处理④至处理⑥的蓝莓的平均成活率较高，植株长势良好，丛生芽的诱导和增殖最多，其中处理⑥的平均成活率最高，达８7．5％。综合考虑添加Ｚｔ的成本以及处理④与处理⑥的平均成活率差异不大，故选择处理④即改良的ＷＰＭ＋６－ＢＡ５.0 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋Ｚｔ０．５ｍｇ／Ｌ为蓝莓的最佳诱导培养基。

２．３不同品种对蓝莓茎段初代培养的影响

不同蓝莓品种在同一浓度激素处理下侧芽的萌发也有差别，其中园蓝侧芽萌发最早，长势最好，1周以后侧芽开始萌发，４周后约１／４的植株侧芽长成６～８ｃｍ的新梢，新梢同时也萌发出４～６个丛生芽。芭尔德温侧芽萌发时间次之，夏普兰最后。

３讨论

刘树英等［４］，黄文江等［５，６］，马艳丽［７］对兔眼蓝莓的研究认为品种间没有差异，而本研究认为同一品种在不同激素组合的初代培养基上成活率和发芽率表现各不同，说明蓝莓初代培养基与品种有对应性，这与之前的研究结果一致［８，９］。因此针对不同品种的培养基的筛选工作有待进一步扩展和细化。国外蓝莓组织培养基本培养基均以改良的ＷＰＭ最好，所用的细胞分裂素多为Ｚｉｐ、玉米素核苷和ＴＤＺ［１０］，本试验结果证实了改良的ＷＰＭ为适合蓝莓初代培养的基本培养基，在不含萘乙酸（NAA）的培养基上生长更好，这与前人的研究结果一致［１１］；在添加了６－ＢＡ和玉米素（Ｚｔ）的培养基上其发芽率均在７5％以上，高于刘树英等［１２］报道的兔眼蓝莓茎段发芽率（２５％～７０％），说明Ｚｔ对于蓝莓的组培具有一定的促进作用，这为中国蓝莓的工厂化育苗和商品基地的建设奠定了基础。对蓝莓的初代培养进行了研究，而对蓝莓的后续培养还需进一步研究。

参考文献：

［１］李亚东．越橘（蓝莓）栽培与加工利用［Ｍ］．长春：吉林科学技术出版社，２００２．

［２］孙山，李鹏民，刘庆忠，等．高灌蓝莓光合作用对若干环境因子的响应［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（１）：６７－７０．

［３］ＲＯＷＬＡＮＤＬＪ，ＯＧＤＥＮＥＬ．Ｕｓｅｏｆａｃｙｔｏｋｉｎｉｎｃｏｎｊｕｇａｔｅｆｏｒｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｌｅａｆｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｈｉｇｈｂｕｓｈｂｌｕｅｂｅｒｒｙ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２７（１０）：１１２７－１１２９．

［４］劉树英，安伟，孔令学，等．兔眼越橘芽的诱导及再生［Ｊ］．吉林农业大学学报，２００４，２６（６）：６３２－６３５．

［5］黄文江，刘庆忠，阚显照．高灌蓝莓离体繁殖的研究［Ｊ］．安徽师范大学学报（自然科学版），２００４，２７（３）：３１４－３１７．

［6］黄文江，周守标，阚显照，等．越橘属植物克隆的体外繁殖［Ｊ］．中国野生植物资源，２００５，２４（２）：６２－６４．

［7］马艳丽．越橘组培快繁技术研究［Ｊ］．吉林林业科技，２００５，３４（１）：３－５．

［８］聂飞，廖优江，何健，等．美国兔眼蓝莓繁殖技术研究［Ｊ］．亚热带植物科学，２００４，３３（４）：３９－４１．

［９］马怀宇，李亚东，刘庆忠，等．高丛越橘离体叶片再生植株研究初报［Ｊ］．东北农业大学学报（自然科学版），２００４，３５（２）：１２９－１３４．

［１０］陈慧都，郝瑞，关爱军，等．越桔工厂化育苗研究［Ｊ］．中国农业科学，１９９０，２３（３）：４４－５０．

［１１］张长青，李广平，朱士农，等．兔眼越橘茎段快繁高效技术研究［Ｊ］．果树学报，２００７，２４（６）：８３７－８４０．