黄杨醇提物的抑菌活性研究

张宏萌

山东中医药大学实验中心，山东 济南 250355

黄杨 Buxus sinica(Rehd.et.Wils)Cheng为黄杨科黄杨属植物。在我国主要分布在南方各省。黄杨自古以来就是一种重要的药用植物，最早记载于《本草纲目》:“叶苦平无毒”，主要有祛湿通络、解毒消肿等功效［1］，民间用以治疗疟疾、梅毒、风湿、皮炎和狂犬病［2］。黄杨主要的化学成分为三萜类、如无羁萜 (friedelin)，表无羁萜醇 (epifriedelanol)和无羁萜醇 (friedelanol);黄酮类，如槲皮素－3－β－D－葡萄糖－7－α－L－鼠李糖甙、山柰酚－3－β－D－葡萄糖 －7－β －L－鼠李糖甙等;生物碱类等［3－5］。为充分了解黄杨提取物的抑菌活性，在水提物的基础上，我们进一步对黄杨的醇提物进行了抑菌活性的分析。

1 材料和方法

1.1 醇提取物的制备

取干燥的黄杨叶片粉末加入70﹪的乙醇回流、加热蒸发浓缩至含生药1g/ml，高压灭菌后于冰箱内备用。

实验所采用的金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 (分离)、绿脓杆菌、变形杆菌等由山东中医药大学基础医学院微生物学实验室提供。

表1 黄杨醇提物的抑菌活性

1.2 黄杨醇提取物的抗菌活性测定

用纸片扩散法进行试验，培养基和药敏纸片的制备按照参考文献［6］的方法进行。将黄杨醇提取物配成100 mg.ml－1的供试液，取制备好的纸片 (直径为6mm)放入供试液中浸泡2h，然后取出纸片置于40℃烘箱中烘干;将菌液浓度为106 ml－1的金黄色葡萄球菌 (分离)、痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、变形杆菌分别均匀涂抹在普通琼脂培养基上。最后，再将制备好的药敏片均匀贴于培养基的3个位点，然后置于37℃恒温箱中培养18h，分别测定各自的抑菌圈直径。取3个重复的平均值为最终结果。依同样方法测定水提取物的抑菌活性。

1.3 最低抑菌 (MIC)浓度测定

采用试管比浊法［7］配制系列肉汤培养基，分别加入50μL细菌悬液，最后一管补加50μL肉汤。对各管进行比浊。将未见细菌生长的管内肉汤转接到普通琼脂培养皿上，再于37℃条件下培养18～24h。将琼脂平皿上未见细菌生长的最低药物浓度最为最低杀菌浓度 (MIC)。

2 结果

黄杨醇提物对除绿脓杆菌外的四种细菌均具有抗菌活性，抑菌圈直径:金黄色葡萄球菌﹥大肠杆菌﹥变形杆菌﹥痢疾杆菌﹥金黄色葡萄球菌 (分离)。

最低抑菌浓度时抑菌圈直径:痢疾杆菌﹥大肠杆菌=金黄色葡萄球菌 (分离)﹥变形杆菌=金黄色葡萄球菌。半抑菌浓度时只对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 (分离)有抑菌作用。

3 讨论

作为药用植物黄杨在民间经常作为消炎药物来使用，因此黄杨抑菌活性的研究显得非常必要。实验显示，黄杨醇提物的抑菌活性明显强于水提物，尤其是对金黄色葡萄球菌。MIC也比水提物 (50μg.ml－1)偏低。这显示黄杨醇提物较水提物更好的抑菌效果。尽管黄杨中含有多种化学成分，如黄酮类、β－谷甾醇类、生物碱等，但推测黄杨醇提物的抑菌活性主要成分是黄酮类化合物。但实验也显示黄杨醇提物对绿脓杆菌等抑制活性较小，这说明黄杨醇提取抑菌活性成分对细菌高度的选择性，因此非常有必要进一步探讨其抑菌的作用机制。

［1］吴征镒.新华本草纲要 (第一卷)［M］.上海:上海人民出版社，1988:316.

［2］李进喜，等.黄杨宁双盲法治疗冠心病的疗效观察［J］.中成药研究，1984，(5):15.

［3］林云良，邱明华，李忠荣，等.黄杨中的非生物碱化学成分［J］.云南植物研究，2006，28(4):429－432.

［4］梁军，苏小建，徐庆，等.小叶黄杨石油醚部位化学成分［J］.中药材，2009，32(7):1062－1064.

［5］邱明华，聂瑞麟.黄杨生物碱及其植物资源［J］.天然产物研究与开发，1992，4(4):41－57.

［5］吴国娟，张中文，李焕荣，等.中草药对奶牛乳房炎6种致病菌的抑茵效果观察［J］.北京农学院学报，2003，18(3):195－198.

［6］李健强，李六金.兽医微生物学实验实习指导［M］.西安:陕西科学技术出版社，1998.

［7］邱明华.黄杨科植物生理活性生物碱成分［D］.北京大学博士研究生论文，北京:北京大学，1996:1－120.