华枝睾吸虫免疫学诊断研究进展

姜宇,常超,孙德君,杨朋欣

(哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）

华枝睾吸虫免疫学诊断研究进展

姜宇,常超,孙德君,杨朋欣

(哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）

华枝睾吸虫病是我国主要的人兽共患寄生虫病之一，因寄生虫数和排卵数较少，而且虫卵小，粪检极易漏诊。不断改进的免疫诊断方法则显著提高了诊断的敏感性、特异性，在临床辅助诊断和流行病学调查中发挥了越来越重要的作用。本文就华支睾吸虫病免疫学诊断方面的研究进展作一综述。

一、皮内试验

皮内试验(ID）是指采用华支睾吸虫的成虫干粉制作冷浸粗制抗原(蛋白含量为150g/ml），以硫柳汞(1/10 000）为防腐剂。用结核菌素注射器吸取抗原，以无菌技术在左前臂掌侧面皮内注入0.03 ml(皮丘直径为0.5 cm），并在与之相距5 cm处注入等量硫柳汞作为对照，通常在10～15 min后观察结果。若前者皮丘直径≥0.8 cm或其周围出现红晕、水肿，则为阳性，检出率约为90%。

二、间接血凝试验

间接血凝试验(IHA）一般采用成虫可溶性抗原作为诊断抗原，但纯化抗原可提高准确性。IHA本身具有操作简便、快速，肉眼直接观察判断结果等优点，其结果可部分反映感染程度。用IHA方法检测华支睾吸虫病患者血清，阳性率为95.9%，对未知人群检测时，与粪检的符合率是78.9%。与血吸虫病患者血清的交差反应率为10.25%。

三、间接荧光抗体试验

间接荧光抗体试验(IFAT）具有简便、快速的优点，但其敏感性低于ELISA。引入限定抗原底物珠系统(DASS），以溴化氰活化的琼脂糖-4B为载体，偶联华支睾吸虫成虫排泄-分泌抗原，应用免疫荧光技术检测83例华支睾吸虫感染者血清全部呈阳性反应，与健康人血清比较，囊虫病及肠道寄生虫感染者血清无明显交叉阳性反应(χ2=0.021，p>0.1）。该方法简便、快速、稳定性好，可用于华支睾吸虫病的感染诊断、疗效评价、流行病学调查及基础免疫研究。

四、酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验(ELISA）是20世纪70年代后期出现的一种标记免疫测定技术，经过不断的改进和完善，该法已成为十分成熟的免疫学诊断方法。Chen等曾通过OD值判定抗体效价来评估ELISA法在华支睾吸虫诊断中的应用。结果表明在OD=1.1和OD=1.2两个临界值之间，敏感性为90.2%～95.5%，特异性为84%～99%。但当抗体效价大于200时，5例并殖吸虫病和1例血吸虫病患者血清各有1例呈阳性反应。这种方法具有高度的敏感性和特异性，操作简便，不需特殊仪器设备，血样用量少，判断结果容易，现场应用方便，是目前符合现场需要的较好的免疫诊断方法。但由于ELISA有一定的假阳性，为提高ELISA的特异性和敏感性，在经典ELISA的基础上，目前又发展出凝胶扩散-酶联免疫吸附试验(DIG-ELISA）、斑点 -ELISA(Dot-ELISA）、生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA）和单克隆抗体ELISA等方法。

五、胶体金标记技术

胶体金是一种带负电荷的疏水胶体溶液，能对蛋白质等高分子物质进行吸附结合，得到胶体金蛋白。由于金颗粒具高电子密度的特性，且这些标记物在固相载体上抗原抗体反应处聚集达到一定密度时，出现肉眼可见的粉红色斑点。此技术简便、快速、敏感，已开始大量应用于检测试剂盒的开发，包括免疫金银染色试验 (IGSS）、斑点免疫金银染色法(dot-IGSS）和斑点金免疫渗滤(DIGFA）。

六、血清循环抗原的检测

宿主的血液中存在着微量的循环抗原(CA），若用敏感的方法检测，对于明确诊断和考核疗效均可接近病原学的诊断水平。Chen等用双抗夹心法检测华支睾吸虫病患者血清中的循环抗原，其最小量为0.03 μg/ml，且血清中的抗原浓度与虫卵检出数成正相关，因此可用于估计感染程度和再治疗中选择适当的药物剂量。骆建民等以竞争抑制型ELISA和双夹心ELISA法检测华支睾吸虫病血清中的CA，前者的灵敏度为0.1～10 μg/ml，后者为0.19～25 μg/ml。实验表明竞争抑制型ELISA检测CA较为敏感、特异、简便，可用于早期诊断。用dot-ELISA检测血清中CA较双抗夹心法不仅简便，而且在现场调查中与粪检阳性和阴性总符合率高达95.5%。

七、小结

我国的多个省份都有人和动物华支睾吸虫病的流行，因此建立实用、敏感、特异、高效的诊断方法是十分必要的。目前，华支睾吸虫病的免疫诊断还面临着许多问题，假阳性、假阴性和交叉反应仍是影响诊断结果的主要因素，因此寻找敏感、特异、易于制备且稳定的抗原和不断改进诊断方法是解决问题的关键。虽然粪便检查仍是目前确诊华支睾吸虫病的主要方法，但工作量大、漏检率高。因此，在现场防制工作中广泛地应用免疫学诊断方法是十分必要的。

（略）