黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷含量测定

刘利萍，高 健，李宝园，解 谦

（1.山西大同大学化学与化工学院，山西大同037009；2.山西大同大学农学与生命科学学院，山西大同037009）

黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷含量测定

刘利萍1，高 健2，李宝园2，解 谦2

（1.山西大同大学化学与化工学院，山西大同037009；2.山西大同大学农学与生命科学学院，山西大同037009）

目的测定黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷的含量，以确定黄芪养生饮的药用价值。方法总黄酮的含量测定采用紫外分光光度法，以芦丁为对照样品，在波长510 nm处进行测定；黄芪甲苷的含量测定采用薄层色谱-分光光度法，测定波长为422 nm。结果总黄酮的含量，回归方程为A＝0.013 60 C-0.018 37，r＝0.9995，芦丁在8.2～47.5mg/L有良好的线性关系，平均加样回收率为98.04％，RSD＝0.41％。测得总黄酮的平均含量为5.17mg/g。黄芪甲苷的含量，回归方程A＝1.427 C+0.158，r＝0.999 5，在60～230μg点样范围内，平均加样回收率为98.57％，RSD＝0.32％，测得黄芪甲苷的平均含量为4.36mg/g。结论本实验所用的测定总黄酮与黄芪甲苷含量的方法简单、准确、可靠、实用性好、适用于黄芪养生饮工业化生产中产品质量控制检验。

黄芪养生饮；总黄酮；黄芪甲苷

恒山黄芪是一种药用价值非常高的中药材，而红枣，核桃等都具有极高的营养价值与药用价值，并且在山西随处可见，产量丰富。我们研制的黄芪养生饮是通过以黄芪[1]、红枣[2]、核桃为主[3]，白砂糖作为辅料，然后以一定的比例精制加工得到的一种养生保健品。现代药理研究证明了黄芪有增加机体的免疫力、抗衰老等多种功效。黄芪的化学成分很多，主要含有黄酮类，皂苷类等。研究表明，黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物，是药用植物中主要活性成分之一，它具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、消除体内自由基及增加机体免疫力等的作用。黄芪甲苷是黄芪养生饮中主要的皂苷类成分，药理研究证明了其具有降血压、镇痛、镇惊的作用[4]。本论文研究了黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷的含量，可以作为黄芪养生饮工厂化生产中产品的质量控制指标。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

黄芪养生饮（山西大同大学农学与生命科学学院研制），芦丁（中国药品生物制品检定所）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），紫外分光光度计（上海波旬实业有限公司），超声波清洗器（天津

奥特赛恩斯有限公司），台式大容量离心机（常州国

华电器有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 总黄酮含量的测定方法

称取芦丁对照品20mg，放置于的50mL烧杯中，加入甲醇溶液30mL，转移到50mL的容量瓶中，然后超声使之溶解，冷却，稀释至50 mL，摇匀，得到芦丁的0.4mg/mL对照品溶液。量取所制得的对照品溶液1，2，3，4，5mL，分别放置于试管中，加水至6mL，再加入5％的亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置10 min后，再加入10％的硝酸铝溶液1mL，摇匀，再放置10min，然后加入氢氧化钠溶液10 mL，加水至刻度摇匀，放置15 min，将紫外可见分光光度波长设于510 nm处，测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，芦丁对照品溶液的浓度C为横坐标，绘制出标准曲线，得到回归方程A＝0.013 60 C-0.018 37，r＝0.999 5。取黄芪养生饮粉剂2.0 g，置于圆底烧瓶中，加80％甲醇溶液30mL，再浸泡2.5 h，然后用超声波提取50min，过滤，残渣再重复提取2次，将3次所得滤液浓缩蒸干，把残渣置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至10mL，定容，摇匀，得到供试品溶液。吸取供试品0.2mL，分别放置于10mL的容量瓶中，加甲醇至10mL，分别在510 nm波长处测定吸光度值A[4]，重复测定3次取平均值。

1.2.2 黄芪甲苷含量的测定方法

称取经过减压干燥至恒重的黄芪甲苷100mg，放置于50mL烧杯中，加甲醇溶液30mL，转移至50mL的容量瓶中，超声溶解，冷却，然后用甲醇稀释至50mL，摇匀，得到2mg/mL的芦丁对照品溶液，取已知黄芪甲苷含量的供试品50 m L，共6份，加注射用水4mL溶解，再分别加入0.70mg的黄芪甲苷对照品，制得了混合液，在422 nm波长处测定吸光度A，用甲醇溶液作为空白对照，根据线性回归方程进行计算，计算回收率，结果测定的平均回收率为98.57％，RSD＝2.41％。称取黄芪甲苷对照品溶液20，40，60，80，100，120μL，分别点在同一块高效薄层板上展开，在薄层色谱黄芪甲苷溶液的对照斑点上，分别加入15％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热10 min，显色，取紫色的黄芪甲苷斑点，加甲醇溶液10mL，在漩涡混合器上混悬10 min，过滤，再用甲醇溶液4mL洗2次，将甲醇洗脱液混合在一起，蒸除洗脱液中的甲醇至完全蒸干，再加浓硫酸5mL在85℃水浴中加热30min，冷却，再以浓硫酸溶液为空白对照，分别在422 nm的波长处测定吸光度A。以吸光度A为纵坐标，对照品溶液的浓度C为横坐标，绘制出标准曲线，得到了回归线性方程A＝1.427 C+0.158，r＝0.999 5。称取黄芪养生饮粉剂4.0 g，加注射用水4mL溶解，置于圆底烧瓶中，然后加入80％的甲醇溶液30mL，浸泡2.5 h，再用超声波提取50min，过滤，残渣再重复提取两次，多次所得的滤液蒸干，残渣放置于10mL容量瓶中，然后用甲醇稀释至10 mL，定容，摇匀，即得到了供试品溶液。从供试品溶液中各吸取0.2mL，分别置于10mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，再吸取50μL点在薄层色谱上展开，再按上述对照组方法处理斑点，分别在422 nm的波长处测定吸光度A[5]，重复测定3次取平均值。

1.3 实验结果

1.3.1 总黄酮含量的测定结果

根据黄酮回归方程计算总黄酮的含量，称取2.00 g样品，测得总黄酮含量5.17％，加样回收率97.83％，RSD为0.34％。

1.3.2 黄芪甲苷含量的测定结果

按照黄芪甲苷线性回归方程计算黄芪甲苷的含量，称取4.00 g样品，测得黄芪甲苷含量4.36mg，加样回收率98.14％，RSD为0.27％。

2 讨论

实验按照黄酮类成分的紫外吸收特征，以510 nm的波长作为检测波长，使用甲醇回流法提取我们实验中所要测定的黄芪养生饮中的总黄酮，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH体系作为显色剂，然后利用分光光度法测定总黄酮的含量，本实验方法操作简单，灵敏度高，重现性良好，结果可靠，为黄芪养生饮的定量分析及其含量测定提供了快速、准确、有效、可行的分析方法。

实验证明了采用薄层色谱-分光光度法测定黄芪养生饮中黄芪甲苷的含量，可以有效地除去其他成分对测定结果的干扰，以确保黄芪养生饮中黄芪甲苷含量测定结果的准确性。

通过本实验研究证实了黄芪养生饮中的总黄酮与黄芪甲苷所占比例分别为5.17％和4.36％，而这些黄酮类成分以及甲苷类成分是人体所需要的物质。黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷的含量测定可以作为黄芪养生饮质量的参考依据，对黄芪养生饮产品在大规模生产过程中的质量控制具有重要的意义和应用价值[6]。

[1]云秦川.中药黄芪的药理研究进展[J].内蒙古中医药，2004，12（6）：33-34.

[2]王爱蓉.红枣的营养与药用价值[J].科技情报开发与经济，2005，12（23）：143-144.

[3]张建华，黎其万，杨晓洪，等.大姚核桃的主要营养成分分析[J].西南农业学报，2008，21（4）：1048-1049.

[4]华辉，郭勇.黄酮类化合物药理研究进展[J].广东药学，1999，9（4）：9-12.

[5]Pietta PG.Flavonoids as antioxidants[J].JNat Prod，2000，63（7）：1035-1042.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：283-284.

〔责任编辑 杨德兵〕

Determ ination of Contents of Total Flavonoids and Astragaloside in Astragalus Instant Powder

L IU Li-ping1，G AO Jian2，L I Bao-yuan2，X IE Qian2
（1.School of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009；2.School of Agriculture and L ife science，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009）

Objective To determine contents of total flavonoids and astragaloside in Astragalus instant powder，and guideline for the quality control of the product.Method s Determination of total flavonoids by UV spectrophotometry with rutin as a control sample，the sample at awavelength of 510nm in place to determine the content of total flavonoids；determination of astragaloside by thin layer chloroform-spectrophotometry Method，detection wavelength was 422nm.Results The total flavonoids，the regression equation A＝0.013 60C-0.01837（r＝0.9995），rutin in 8.2-47.5mg/L had a good linear relationship，the average recovery was 98.04％，RSD＝1.11％.The average measured content of total flavonoids 5.17mg/g.Astragaloside content，the regression equation A＝1.427C+ 0.158，r＝0.9995，the 60-230μg spotting scope，the average recovery was 98.57％，RSD＝2.41％.astragalosidemeasured average concentration of 4.36 mg/g.Conclusion s The use of the determination of total flavonoids and the content of astragalosidemethod is simple，accurate，reliable，practical，suitable for quality control of Astragalus drink instant powder.

astragalus instant powder；total flavonoid；astragaloside content

O175

A

1674-0874（2012）04-0034-03

2012-02-25

刘利萍（1967-），女，山西大同人，高级实验师，研究方向：有机化学。