康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠靶向微球的药代动力学及体内分布研究

王耀华，李力佳，刁源媛

（1.河北大学附属医院，河北 保定 071000；2.保定市第一中心医院，河北 保定 071000；3.保定市第三医院药剂科，河北保定 071000）

康普瑞丁磷酸二钠（Combretastatin A4p，CA-4P）为新型抗肿瘤前体药物，体内代谢成康普瑞丁活性形式与血管内皮细胞的微管系统结合、阻止新生血管的生成而发挥抗肿瘤的作用，是治疗非小细胞肺癌的药物之一[1]，CA-4P在体内经非特定磷酸酯酶作用可迅速去磷酸化而生成具有生物活性的CA4[2]。由于康普瑞丁给予大鼠静脉注射给药后，消除半衰期仅几分钟，在体内消除很快，稳定性差[3]，将其制成微球后，可缓慢、持续释放，能延长药物有效水平的周期、增加持续作用的时间、减少给药的频率；还可选择性的到达病变部位，从而降低药物的毒性、提高药物的疗效和增加被包封药物的稳定性。为验证自制的康普瑞丁磷酸二钠肺靶向微球的肺靶向特性，文中采用HPLC研究了小鼠尾静脉注射CA-4P后，CA4在小鼠体内的药动学特征，可为临床用药提供参考依据。

1 材料

LC-10Avp高效液相色谱系统（日本岛津）；GL-88B漩涡振荡器（麒麟医用仪器厂）。康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠靶向微球（自制，批号：110826）、CA-4P冻干注射剂（含量99.8%）、CA4对照品（含量99.4%）、内标（E）-3-（4'-甲氧苯基）-2-（3"、4"、5"-三甲氧苯基）-2-丙烯酸（含量99.6%）(西南合成制药股份有限公司)；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯。昆明种小鼠，体质量约18～22 g，沈阳药科大学实验动物中心提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4]

色谱柱为Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm、5 μm），流动相为甲醇-乙腈-0.05 moL/L磷酸二氢钾缓冲液（55:1:40），检测波长为305 nm，流速为0.05 mL/min，柱温为40℃，进样量为20 μL。

2.2 溶液的制备

取30.30 mg CA4对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成303.0 ug/mL的CA4对照品贮备液；另取37.53 mg内标对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释成375.30 ug/mL的内标对照品贮备液。两种溶液均置4℃冰箱中存放，临用时稀释至所需浓度。

2.3 样品的处理

精密量取100 uL血清样品置尖底离心管中，精密加入100 uL 1.5 ug/mL的内标溶液、100 uL甲醇，漩涡振荡3 min，静置，1.2×104r/min离心10 min，取上清液进样。

2.4 标准曲线的制备

精密量取100 μL空白血清，共7份，分别置尖底离心管中，加入100 μL不同浓度的CA4对照品溶液、100 μL内标溶液，配制成含CA4的系列标准血清样品。按2.1、2.2、2.3项的方法处理后，取20 μL上清液进样测定，记录CA4及内标的峰面积。以CA4与内标峰面积的比对浓度进行线性回归，得回归方程为：Y=1.684x-0.018 (r=0.9999)。结果CA4 0.051～20.200 μg/mL与峰面积比的线性关系良好。

2.5 药物动力学及体内分布试验

取66只小鼠，随机分为两组（对照组和制剂组），每组再分成11个时间点，每个时间点3只，分别于给药后5 、15 min、0.5、1、2、4、8、12、24、48及72 h摘除眼球取血，随即断颈处死的采样点。注射剂按20 mg/kg剂量和纳米制剂36 mg/kg剂量分散于生理盐水中制备成，进行单剂静脉注射后，定时摘眼球取血0.5 mL，置肝素化塑料离心管，离心得血浆。随即处死小鼠，取心、肝、脾、肺、肾等组织，各组织样本经生理盐水洗净后用滤纸吸干、精密称定，按组织重量加入10倍量的生理盐水进行匀浆，取0.5 mL，分别加入0.5 μg/mL内标液100 μL，混匀后，加入乙醚5 mL，涡旋混匀后（涡旋混合3 min），离心10 min。吸取有机相小心移至10 mL刻度离心管内，在N2流下，40℃水浴吹干，残渣中准确加入甲醇100 μL复溶，取20 μL进样做色谱分析。检测后，将药-时数据统计距法处理，求算有关药物动力学的参数。药-时曲线以静脉注射的二室模型拟合较佳，权重系数为1。康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球在各组织中有分布明显不同，康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球肺肝中的AUC显著增加，分别提高了提高49.34和20.65倍。

3 讨论

壳聚糖-海藻酸钠是药剂研究领域中的新型药物载体，康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球具有非常优越的载药性能，较康普瑞丁磷酸二钠注射剂在小鼠体内分布明显不同，康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球在肺部和肝部的AUC显著增加，表明制备的微球靶向于肺部和肝部，极大地提高了药物在肺部和肝部的分布，并形成贮库，通过其基质的缓慢溶蚀达到了药物缓释，康普瑞丁磷酸二钠壳聚糖-海藻酸钠微球对肺部和肝部疾病的临床治疗有着重要意义。

[1]张 璇,张健存.抗肿瘤新药-Combretastatin A4磷酸酯[J].中国药房,2007,18(10):779-781.

[2]Lippert JW.Vascular disrupting agent[J].Bioorg Med Chem,2007,15(2):605-615.

[3]陆 榕,樊慧蓉,刘昌孝.风车子素A4磷酸盐的大鼠药动学研究[J].中草药,2006,37(9):147-149.

[4]何应金,张 洁,刘 静,等.Combretastatin A4磷酸酯二钠在大鼠体内的药物动力学[J].华西药学杂志,2008,23(6):663-665.