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水通道蛋白-2的研究进展

2012-04-02王长志景文莉

承德医学院学报 2012年3期
关键词:充血性管腔肾脏

王长志,景文莉

(1.河北联合大学中医学院,河北唐山 063000;2.承德医学院)

水通道蛋白-2的研究进展

王长志1,景文莉2Δ

(1.河北联合大学中医学院,河北唐山 063000;2.承德医学院)

水通道蛋白-2;结构;功能;表达;疾病

水是生命所必需成分,细胞内外水平衡的稳定是维持生命的关键因素。水的跨膜转运对维持细胞正常代谢具有重要的作用及意义。水通道蛋白(AQP)是一组与水通道有关的细胞膜转运蛋白,属古老的跨膜通道蛋白家族成员。1991年和1992年,Ager及其同事先后完成了对AQP-1的分子克隆和功能鉴定,首次揭示了水通道蛋白的存在。迄今为止,已发现水通道蛋白共13种。水通道蛋白-2(AQP-2)是由Fushimi在1993年克隆确认的水通道蛋白家族中的一种[1],位于肾脏集合管主细胞管腔侧和靠近管腔侧的囊泡内,是血管加压素依赖性水通道,是调节肾脏集合管对水通透性的关键蛋白,在调节肾脏水平衡中起重要作用,并被认为是维持体内水平衡的必须物质[2]。

1 AQP-2分子结构

AQP-2和其它AQP一样,均属于膜整合蛋白(MIP)家族,和AQP-l具有同源性,具有类似的结构。AQP-1作为第一个确定的水通道蛋白,人们多以它的结构作为水通道蛋白家族的经典代表。AQP-1以四聚体的形式存在于质膜上,呈沙漏状,每个单体都是一个独立的功能单位,其基本结构是一个单肽链,每个单体肽由271个氨基酸组成,以螺旋结构跨膜6次,在质膜两侧形成5个线形的环(Loop A、B、C、D、E),肽链N端和C端位于质膜内侧,在B、E环上均含有3个氨基酸(天冬氨酸一脯氨酸一丙氨酸,NPA)的重复串联序列,其周围氨基酸序列高度保守。

AQP对物质的转运具有一定的选择性,最近几项对水通道蛋白家族结构的高分辨研究可以解释其选择性。通过冷冻电子显微镜技术重建的人类AQP-1膜晶体结构被确定为3.80A,和大肠埃希氏杆菌非常相似(2.20A),因此,它们被形象的称为“异卵双生”。为融合这些特点,人们提出了AQP-1精细结构。而且,这种结构最近通过x射线分析牛的AQP-l结构得到证实。

2 AQP-2调控

研究表明,AQP-2是血管升压素(AVP)依赖性水通道蛋白[3-4],在调节机体的水平衡中起着至关重要的作用。对AQP-2的调控主要有两种方式,一是短时调控机制,二是长时调控机制[5-7]。

参与短时调控的机制有:(l)囊泡穿梭假说。当AVP水平升高后,细胞质的囊泡与管腔面的细胞膜融合。AQP-2通过出胞运动移至管腔游离面细胞膜上,使管腔侧细胞膜上AQP-2的数量增加,对水的通透性升高。而当血管加压素水平降低时,又重新形成囊泡回到细胞内,管腔侧细胞膜上AQP-2数量也相应减少。(2)蛋白磷酸化作用。肾脏集合管主细胞上存在血管加压素受体V2,与AVP特异性结合后,激活腺苷酸环化酶而产生cAMP,后者作为第二信使激活蛋白激酶A,再激活AQP-2,因而导致水通透性升高。(3)两者的协同作用。

在长时调控机制中,如慢性AVP的作用、长期限水等,均可使管腔侧膜上和囊泡上AQP-2mRNA和蛋白的含量增加,导致水通透性增加[8-10]。其调控机制为:肾脏集合管主细胞上存在着血管加压素受体V2,这是一种G蛋白结合受体[11]。血中的AVP浓度升高后,与其在集合管主细胞上的V2受体结合,使V2受体活化,与G蛋白结合并使之发生构象改变,与G蛋白的a亚基结合的GDP为GTP取代,随之a亚基与Br亚基分离,成为活化状态的a亚基,结合并活化腺甘酸环化酶(AC),后者使ATP水解生成cAMP,使胞浆中的cAMP含量升高,cAMP使蛋白激酶A(PKA)活化。AQP-2基因系列的5’端启动子有cAMP的反应元件。PKA使cAMP反应元件结合蛋白磷酸化,后者识别、结合cAMP的反应元件,促进AQP-2基因的转录[12-13]。血浆中的AVP含量升高后,和其受体V2特异结合,使胞浆中的第二信使cAMP含量增高,可促进肾脏集合管上皮AQP-2的表达。

3 AQP-2与疾病

3.1 充血性心力衰竭 充血性心力衰竭(CHF)是各种心脏疾病导致心功能不全的一种综合征,是大多数心血管疾病的最终归宿,也是最主要死因。水潴留是充血性心力衰竭最重要的病理生理改变之一,也是心源性水肿的最重要的发病机制,同时还是充血性心力衰竭出现症状的重要原因,并可导致心脏功能的进一步损伤。

在充血性心衰水潴留机制的研究中,人们发现肾脏是水潴留的中心环节[14-16],而受血管加压素(AVP)调节的AQP-2更是其关键蛋白。许顶立和Nielsen的研究相继发现,充血性心力衰竭大鼠模型肾脏的AQP-2基因表达和蛋白质表达均上调,而此状态下大鼠血浆中的AVP水平正常或稍有升高,但相对于较低的血清钠水平,这个“正常”AVP水平已经是较高的,从而提示AQP-2的基因表达增加在充血性心衰中的发病机制中起到重要作用,且受血中的AVP调节。而Martin的研究中,给予充血性心力衰竭患者AVP的V2受体拮抗剂(AVP-985),可检测到尿液中的AQP-2排出明显减少,从而进一步证明了AQP-2基因的表达是由AVP介导的。许顶立还发现,充血性心力衰竭时,肾脏中无论是肾髓质还是肾皮质AQP-2水平同样升高,提示肾间质渗透压对充血性心力衰竭时AQP-2的增加并不起主要调节作用。 Niesen等还报道了充血性心力衰竭伴低钠血症时,除了AQP-2蛋白增加外,肾脏中分布在近曲小管和髓拌降支的AQP-1和分布于肾脏集合管主细胞基底侧细胞膜的AQP-3不增加,证明了AQP-2的增加是有选择性的。临床试验中,伴低血钠的充血性心力衰竭患者水潴留及低钠血症越重,尿液中AQP-2排出越多。从而共同证实了AQP-2是充血性心衰患者调节水储留的关键性蛋白,进一步阐明了充血性心力衰竭时水潴留机制的主要途径:心输出量下降—血中AVP增加—肾集合管主细胞V2受体激活—AQP-2激活/或基因表达上调—水重吸收增加—水潴留。3.2 AQP-2与高血压 高血压病是我国常见的心血管疾病之一,并且是冠心病和脑血管病发生的最危险因素。由于机体血压受到神经、体液、血管本身等诸多因素影响,故其发病机制复杂,现在认为该病是多种因素共同作用的结果。近年来的研究表明,AQP-2调节异常与高血压的发病机制及相关病理生理学密切相关。

Lee通过对DOCA(去氧皮质酮醋酸盐)盐性高血压大鼠(DHR)的研究发现,无论是仅以DOCA处理或合并应用DOCA和高盐处理所致的高血压大鼠,4周后,其肾脏皮质及内髓、外髓中的AQP-2的表达和穿梭显著增加[17]。在DOCA盐性高血压大鼠模型中,盐和血管加压素是形成高血压的的重要因素,盐在DHR形成中起重要作用,单用DOCA血压不升高,在加盐后首先出现细胞外液和血容量的增加,肾功能和结构的改变,肾小动脉的硬化,肾和心脏和动脉壁的肥厚,然后才出现血压的升高。在DOCA和盐的共同作用下,由下丘脑分泌入血的AVP显著增加,恶性高血压尤为明显,AVP抗血清或其拮抗剂可减低血压,而有一种大鼠(Bratetboro大鼠)给DOCA盐后血压不上升,当注射AVP后血压稳定上升,可见其在形成DHR中也起到了重要作用。由于血中AVP浓度的升高,其进一步作用于肾脏集合管主细胞管周侧的V2受体,从而激活主细胞内的腺甘酸环化酶,cAMP合成增加,激活PKA,通过短期调节致AQP-2的表达和其在集合管主细胞管腔侧穿梭增加,水通道开放,水重吸收增加,加重钠水储留,进一步加速高血压的形成。Roxas的研究中,标准的Sprague-Dawley大鼠和对盐敏感的Dahl SS/Jr大鼠予高盐饮食后,Dhal SS/Jr大鼠的肾脏中的AQP-2的转录显著增加,可见AQP-2的调节在Dhal SS/Jr大鼠模型中发生了改变,影响了盐和水的重吸收,在高血压的发病中起到了一定作用[18]。

在双肾夹闭一侧(2K1C)的高血压大鼠模型中,大鼠的尿量显著增加,其机制可能与钠和水的调节紊乱有关。Lee的研究证实,该模型形成6周后,其被夹闭侧的肾脏皮质内、外髓中的AQP-2表达显著减少,肾脏中的cAMP水平亦下降,但其AQP-2本身转运机制及生理功能并未改变,在该侧肾脏去除夹闭24小时后,其AQP-2表达可恢复至正常水平,而对侧未夹闭肾脏AQP-2表达水平一直正常。原因可能由于夹闭肾动脉至肾血流中的AVP下降,减少了cAMP的合成,通过短期调节,减少了AQP-2在集合管主细胞管腔策的穿梭,进而水通道关闭,尿量增加[19]。

4 展望

水通道蛋白的发现,具有重要的理论意义和实用价值。它表明水分子的转运形式不仅可通过脂质双分子层的弥散作用,而且还可以通过细胞膜蛋白质的选择性转运,使人们对膜转运有了新的认识,这对水代谢紊乱疾病的认识及治疗提供了新的途径。

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