正交设计优选活血贴的最佳提取工艺

张晓旭，张英华，王 沛*

(1.中山大学药学院，广东 广州 510006;2.长春中医药大学，吉林 长春 130117)

活血贴是以当归、透骨草、伸筋草、刘寄奴、川芎、草乌、花椒、防风、姜黄、红花、威灵仙、艾叶等为主要原料制成的复方纯中药组成的医院制剂,具有活血化瘀的功效[1]。本研究采用正交设计方法，以方中主药当归中的阿魏酸含量为参考指标对该临床组方的提取工艺进行了研究。

1 仪器与试剂

电光分析天平，HC-TP11-2型，上海精科天平厂；数显恒温水浴锅，HH-2型，国华电器有限公司；循环水多用真空泵，型号:SHB-3，郑州杜甫仪器厂；紫外-可见分光光度计TU-1810，北京普析通用仪器有限公司；红外干燥箱WS70-2，国华电器有限公司。处方中饮片均购自吉林北药药材采购站，所用中药饮片特请长春中医药大学中药鉴定教研室老师鉴定，所用药品均符合《中国药典》2010年版所载之药用科属种。阿魏酸对照品(批号：001100-99060)，购于中国药品生物制品检定所。乙醇(无水乙醇)，500 mL，分析纯，20100820，北京化工厂。乙醇(95%)，500 mL，分析纯，20110816，北京化工厂。

2 方法与结果

2.1 标准曲线的绘制 对照品溶液制备：取阿魏酸对照品在105 ℃下干燥至恒重，取适量，精密称量，放于25 mL容量瓶中，加少许无水乙醇溶解，添加无水乙醇至所需剂量,摇匀。得0.100 mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取阿魏酸对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别加无水乙醇定容至10 mL，摇匀。分别以无水乙醇为空白溶液，在305同nm波长下，分别测定相应的吸光度值，并以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行回归处理。得线性关系曲线为Y=1.529 0X+0.031 5，r=0.998 8，式中Y为吸光度值,X为浓度。结果表明,待测物质即在0.01～0.05 mg/mL范围内线性良好。

2.2 精密度实验 按绘制标准曲线的方法，分别精密量取阿魏酸对照品溶液0.3 mL共6分，按上述操作进行,测定吸收度值，结果RSD为0.165%(n=6)，表明实验结果重现性较好,所得数据精确。

2.3 组方中阿魏酸的含量测定 称取组方量药材适量，经提取，取趁热过滤，合并之滤液，回收乙醇至无醇味，敞口挥发乙醇，待乙醇挥干后，取残渣,向其中加入无水乙醇20 mL，充分溶残渣，过滤，滤液定容至25 mL。按2.2项下，以无水乙醇为空白溶液，在λ=305 nm波长下，测定相应的吸光度值。

2.4 提取工艺条件筛选 按处方量称取当归、透骨草、伸筋草、刘寄奴、川芎、红花等150 g，共9分，设定乙醇浓度(A)、乙醇加入量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)为考察指标因素，按L9(34)正交表(见表1)设计实验，实验结束后,按2.3项下测定组方中阿魏酸的含量。

筛选结果：A2B3C3D370%乙醇8倍量，每次2 h，提取3次。

2.5 重现性实验 取同一批样品,按2.3项下阿魏酸的含量测定方法平行测定5分。平均吸收度值为0.412，RSD=0.103%(n=5)，表明方法重现性良好。

3 结论

直观分析表明，本实验研究设计合理[4-5]，数据真实，结果可信。综合考虑生产实际情况，因试验指标(阿魏酸和出膏率)产量越大越好,因素A水平2的值最大，所以A因素取水平2好；类似分析，因素B取水平3好,但兼顾低碳、节能、时间等因素，取水平1；同理，因素C、因素D均为次要因素，出于同样考虑,因素C取水平1,因素D取水平2。从而得到最佳试验方案为A2B1C1D2，即加70%乙醇4倍量，每次提取1 h提取2次。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社,2010.426.

[2]顾晓路,梁茂新.安眠颗粒结构优化的步骤与方法[J].中国实验方剂学杂志,2008,14(6):22-24.

[3]刘齐林,李雪婷,王沛,等.正交设计优选痛风宁的最佳提取工艺[J].辽宁中医杂志,2011.38(5):959-960.

[4]王沛.制药工艺学[M].北京:中国中医药出版社,2009:72.

[5]陆守曾.高等数学(下册)[M].上海:上海科技出版社,2006:223-236.