介入干预前后胃癌患者hTERT蛋白及mRNA的变化

王昕升 宋爱华 张健

胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，位居消化系统肿瘤之首［1］。端粒酶是现代生物医学领域研究的热点之一，在胃癌组织中端粒酶阳性表达率高达80% ～90%［2］，其活性高低与细胞永生化及胃癌发生密切相关。研究表明，端粒酶的激活及其活性上调主要取决于其催化亚基端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)的表达水平［1］。本研究通过对胃癌患者行静脉化疗和动脉介入术，测定干预前后胃癌组织hTERT蛋白及mRNA表达水平，为判定临床治疗效果及预后提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2008年1月至2010年10月经我院病理确诊并接受介入干预治疗的胃癌患者30例(介入干预组)，其中男21例，女9例;平均年龄(61±11)岁;中分化腺癌10例，低分化腺癌20例;贲门部位14例，胃角部位2例，胃体部位3例，胃窦部位11例;伴有转移者16例，无转移者15例。另选取20例胃癌患者为对照行全身化疗(静脉化疗组)，其中男12例，女8例;年龄(58±11)岁。20例胃癌中，中分化腺癌7例，低分化腺癌13例;贲门部位10例，胃角部位1例，胃体部位5例，胃窦部位4例;伴有转移者12例、无转移者8例。另取10例正常胃黏膜作为对照组。

1.2 方法

1.2.1 干预方法:采用seldinger法对胃癌患者行股动脉穿刺插管，经腹腔动脉造影确认肿瘤供血动脉。之后将导管置入靶血管内，血流变慢后缓慢注入化疗药物栓塞。药物选用5-氟脲嘧啶、亚叶酸钙、草酸铂、表阿酶素、明胶海棉。根据胃癌发生部位不同选择不同的靶血管:贲门部位选择胃左动脉，胃窦和胃角部位选用胃右动脉，胃体部位选择肝总动脉。腹腔动脉造影发现有肝转移者行选择性肝动脉灌注化疗栓塞。2次干预间隔3～4周。对照组行全身化疗，药物选用5-氟脲嘧啶、亚叶酸钙、草酸铂。干预时间为2周期。

1.2.2 端粒酶hTERT蛋白及mRNA表达水平的检测:采用免疫组织化学法检测hTERT蛋白表达，以PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。hTERT蛋白阳性染色的判定标准为细胞质或细胞核内检出棕黄色颗粒。随机选取5个有代表性的视野计数200个细胞，若阳性细胞占同类细胞的百分比＜10%即为阴性，＞10%则为阳性。采用原位杂交法检测hTERT mRNA表达水平。hTERT mRNA阳性染色的判定标准及半定量分析方法同免疫组化法。

1.3 统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组hTERT蛋白的表达 正常胃黏膜hTERT蛋白表达阳性率为10%(1/10)，胃癌组织hTERT蛋白表达阳性率为78%(39/50)，显著高于正常胃黏膜(χ2=16.34，P＜0.05)。见表1。

表1 正常胃黏膜与胃癌hTERT蛋白表达水平 例

2.2 2组hTERT mRNA的表达 正常胃黏膜hTERT mRNA表达阳性率为0(0/10)，胃癌组织中hTERT mRNA表达阳性率为64%(32/50)，显著高于正常胃黏膜(χ2=12.24，P＜0.05)。见表 2。

表2 正常胃黏膜与胃癌hTERT mRNA表达水平 例

2.3 介入干预和静脉化疗组一般资料的比较 2组在年龄、性别构成比例、癌细胞病理分型、癌变部位方面比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表3。

表3 介入干预组和静脉化疗组一般资料的比较

2.4 介入干预和静脉化疗组治疗前后hTERT蛋白及mRNA表达的比较 与干预前比较，2组干预后hTERT蛋白及mRNA水平明显降低(P＜0.05)，且干预后4周与干预后2周比较差异亦有统计学意义(P＜0.05)。与静脉化疗组比较，介入干预组hTERT蛋白及mRNA水平变化更为明显(F值分别为4.299和4.065，P＜0.05)。见表 4。

表4 3组治疗前后hTERT蛋白及mRNA表达的比较 例(%)

3 讨论

胃癌是常见的消化道肿瘤，其病变过程涉及多种因子参与，包括癌基因激活，抑癌基因失活，端粒及端粒酶活性增高，细胞黏附分子及DNA错配修复基因的异常和积累等。恶性肿瘤发病的重要原因是肿瘤细胞获得永生性，而这一特性的结构基础在于细胞端粒酶活性的上调［3，4］。端粒酶是广泛存在于永生化细胞和肿瘤细胞的一种核糖核蛋白酶，全酶包括三个主要部分:即端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白(TP1)和端粒酶逆转录酶(hTERT)，其功能不仅可维持端粒的长度，保持染色体的稳定，而且在细胞的恶性转化和肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用［5］。在端粒酶的三个组成部分中，hTERT的活性是端粒酶激活的限速步骤。多项研究报道，hTERT基因与端粒酶活性具有密切的相关性，hTERT活性变化可直接反映端粒酶的活性变化。最近研究发现端粒酶和hTERT蛋白在胃癌中表达率显著提高，参与了正常胃黏膜恶性转化的全过程。

本文以正常胃黏膜hTERT基因表达水平为对照，检测了静脉化疗和介入干预治疗前后胃癌患者hTERT基因表达水平的变化，结果表明:hTERT基因在正常人胃黏膜不表达或很少表达(其中蛋白表达阳性率为10%，mRNA表达阳性率为0)。与正常胃黏膜比较，胃癌患者组织hTERT基因呈现高表达(其中蛋白表达阳性率为78%，mRNA表达阳性率为64%)，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示在正常胃黏膜组织中hTERT基因几乎不表达，当受到外界或内部相关信号分子的刺激后，hTERT基因表达上调，端粒酶被激活，端粒长度不再缩短，从而促进细胞增殖和生长进而发生恶变。但我们注意到，正常人和胃癌组织hTERT基因表达在mRNA水平低于蛋白水平的表达。考虑到RNA酶在大自然界中的广泛存在，造成mRNA极其容易被降解，因此我们推测这可能与标本中mRNA的降解有关。

我们还观察到与干预前相比，动脉介入干预组hTERT基因表达水平明显低于静脉化疗组，提示动脉介入治疗对胃癌的治疗效果显著优于静脉化疗组。并且随着干预治疗时间的延长hTERT基因表达水平降低更为显著，说明hTERT表达水平与胃癌的病情发展密切相关。因此，监测hTERT基因表达水平有利于对胃癌治疗效果做出较为准确的判断，同时可用于评价预后。

1 Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistics，2009.CA Cancer J Clin，2009，59:225-249.

2 祝荫，吕农华，陈江，等.H pylori在胃癌前病变中对端粒酶相关基因及细胞增殖与凋亡的影响.世界华人消化杂志，2009，17:1448-1453.

3 Shan YS，Hsieh YH，Lin PW.Telomerase activity in tumor and remnant liver as predictor of recurrence and surival in hepatocellular carcinoma after resection.World J Surg，2007，31:1121-1128.

4 Sampedro CF，Cano SG，Sampedro SF，et al.Telomerase and telomere dynamics in ageing and cancer:current status and future directions.Clin Transl Oncol，2007，9:145-154.

5 Hahn WC，Meyerson M.Telomerase activation，cellular immortalization and cancer.Ann Med 2001，33:123-129.