复方醋酸甲地孕酮片的溶出度研究

2012-03-26闻宏亮简龙海宋冬梅杨永健上海市食品药品检验所上海201203

中国药房 2012年9期

闻宏亮，简龙海，宋冬梅，杨永健（上海市食品药品检验所，上海 201203）

复方醋酸甲地孕酮片（CMAT）为复方口服避孕药，含醋酸甲地孕酮和炔雌醇2种组分。该2种组分均为难溶性药物，其溶出速度直接影响到CMAT的吸收，因而对CMAT的溶出度控制尤为重要。但CMAT现行质量标准[1]检验项目中无溶出度检查项。目前国内关于醋酸甲地孕酮和炔雌醇的单方制剂溶出度测定方法已有文献报道[2，3]，但关于CMAT的溶出度测定方法尚未见文献报道。故笔者对CMAT的溶出度测定方法进行研究，建立了高效液相色谱（HPLC）法同时测定醋酸甲地孕酮和炔雌醇含量、桨法测定二者溶出度的方法，为CMAT的标准提高提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

RC806溶出仪（天大天发科技公司）；1100 HPLC仪，包括自动进样器、二元泵、柱温箱、紫外检测器、荧光检测器、Chemstation色谱工作站（美国Agilent公司）。

1.2 试药

CMAT（批号:100303、100701，规格:每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg）、辅料淀粉、预胶化淀粉、糖粉、糊精、硬脂酸镁、黄色包衣预混剂均由某公司提供；醋酸甲地孕酮标准品（批号:100171-200503，纯度:100.0%）、炔雌醇标准品（批号:100052-200308，纯度:100.0%）均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:XtimateTMC18（15 cm×0.46 cm，5 μm）；流动相:乙腈-水（60∶40），流速:1.0 mL·min－1；柱温:30 ℃；醋酸甲地孕酮选择紫外检测器，以最大吸收波长288 nm进行测定；炔雌醇参照复方左炔诺孕酮片溶出度测定方法[1]选择荧光检测器，激发波长:285 nm，发射波长:310 nm；进样量:100µL。

2.2 标准品溶液的制备

分别取醋酸甲地孕酮、炔雌醇标准品适量，精密称定，加甲醇定量稀释制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮100 μg、炔雌醇3.5 μg的溶液，分别作为标准品贮备液a、标准品贮备液b。分别精密量取上述贮备液各2 mL，置于同一100 mL量瓶中，用0.5%十二烷基硫酸钠溶液（SDS）稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。

2.3 溶出介质的选择

由于2种组分均为难溶性药物，故参考文献[1]，分别以0.000 5%聚山梨酯-80溶液、0.25%SDS和0.5%SDS为溶出介质，体积均为500 mL，采用桨法，转速为75 r·min－1，加入样品（批号:100303），分别在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min时取样测定，计算各时间点的累积溶出率。结果，2种组分在0.000 5%聚山梨酯-80溶液中达到平台期时的累积溶出率较低；在0.25%SDS中2种组分均溶出缓慢；在0.5%SDS中溶出迅速，45 min时的累积溶出率达到90%左右。故选择0.5%SDS作为溶出介质。

2.4 溶出方法和转速的选择

本品为片剂，优先考虑选择溶出度第二法[2]进行试验。取样品（批号:100303），以0.5%SDS为溶出介质，采用桨法，分别以50、75 r·min－1为转速，在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min时取样测定，计算各时间点的累积溶出率。结果，2种组分在75 r·min－1条件下，45 min时的累积溶出率均可达90%左右，而在50 r·min－1条件下达到平台期时间稍晚，且45 min时醋酸甲地孕酮的累积溶出率仅为80%左右。故选择桨法，以转速75 r·min－1进行试验。

2.5 含量测定方法学考察

2.5.1 专属性试验。按照处方称取相当于1片重量的辅料，加0.5%SDS适量，超声处理15 min，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。精密吸取标准品溶液、空白辅料溶液和“2.7”项下样品溶液各100µL，进样测定，结果空白辅料不干扰主药的测定，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.5.2 线性关系考察。分别精密称取醋酸甲地孕酮、炔雌醇标准品适量，用甲醇溶解并用溶出介质稀释制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮0.394 1、0.985 25、1.970 5、2.955 75、3.941 μg，含炔雌醇0.014 32、0.035 8、0.071 6、0.107 4、0.143 2 μg的溶液，进样测定，分别以醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面积（A）对相应浓度（c）进行线性回归，得醋酸甲地孕酮的线性方程为A＝360.76c+4.610 2（r＝1.000 0）；炔雌醇的线性方程为A＝469.18c+0.167 6（r＝0.999 9）。结果表明，醋酸甲地孕酮和炔雌醇的检测浓度线性范围分别为0.394 1～3.941、0.014 32～0.143 2 μg·mL－1。本品规格为每片含醋酸甲地孕酮1 mg、炔雌醇0.035 mg，样品溶液的浓度分别为2、0.07 μg·mL－1，均在线性范围内。

2.5.3 精密度试验。精密吸取“2.5.2”项下醋酸甲地孕酮、炔雌醇标准品溶液适量，分别用溶出介质稀释制成每1 mL中含醋酸甲地孕酮1.577、1.971、2.365 μg，含炔雌醇0.057 28、0.071 6、0.085 92 μg的溶液（相当于样品浓度的80%、100%和120%），分别进样测定5次，计算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇校正因子（校正因子为浓度与峰面积的比值）的RSD分别为0.1%和0.3%，表明方法精密度良好。

2.5.4 回收率试验。分别精密量取标准品贮备液适量，置于200 mL量瓶中，加入混合辅料27 mg，制备分别含醋酸甲地孕酮0.985 3、1.577、1.971 μg·mL－1，含炔雌醇0.035 8、0.057 28、0.071 6 μg·mL－1的回收率试验样品，加0.5%SDS适量，超声处理15 min，放冷，加0.5%SDS稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样测定，计算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇的回收率。结果平均回收率分别为98.8%、99.6%，RSD分别为0.4%、0.3%（n＝9），详见表1。

2.5.5 稳定性试验。取“2.7”项下的样品溶液（批号:100303），在室温放置0、1、2、4、8、12 h后进样测定，计算得醋酸甲地孕酮和炔雌醇峰面积的RSD分别为0.1%和0.3%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.6 溶出均一性试验

取2批样品分别在10、20、30、45、60、75、90、105、120 min取溶液5 mL测定，并即时补充相同体积、相同温度的溶出介质，计算累积溶出率，结果见表2。

表2 2批样品不同溶出时间累积溶出率结果（%，±s，n＝6）Tab 2 Accumulative dissolution rate of 2 batches of samples at different tim（e%，±s，n＝6）

取样时间/min 10 20 30 45 60 75 90 105 120醋酸甲地孕酮批号100303 56.5±9.8 82.7±3.5 88.4±2.9 92.3±3.2 94.2±3.0 94.9±2.8 95.4±2.8 95.7±2.6 96.1±2.4批号100701 55.6±9.5 80.2±2.3 85.3±2.188.9±2.7 90.2±2.8 90.9±2.9 91.6±3.0 92.1±2.8 92.3±2.9炔雌醇批号100303 69.3±9.6 87.6±2.7 91.5±2.6 93.7±2.8 94.9±3.2 95.2±3.195.6±3.0 96.1±2.8 96.8±2.6批号100701 59.9±6.184.2±3.0 88.4±2.9 92.1±3.4 93.4±3.7 94.2±3.4 95.5±3.4 95.9±3.3 96.0±3.3

由表2可见，2批样品2种组分在45 min时累积溶出率均大于80%，在60 min时累积溶出率的标准差s均小于5%，故选择溶出平台期60 min为取样时间，限度均拟订为标示量的75%。从表2还可见2批样品溶出均一性均良好。