热休克蛋白27/60在胃癌中的表达及意义

李桂青，赵景润

1．聊城市东昌府人民医院消化内科，山东聊城252000;2．聊城市人民医院消化内科

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生是一个多因素、多步骤、多阶段和多基因共同作用的结果，涉及到多种基因的异常改变。热休克蛋白(heat shock protein，HSP)是细胞受到各种刺激后产生的一类高度保守的蛋白质，主要是通过在应激状态下生成保护细胞生命活动所必需的蛋白质以维持细胞生存，参与调节细胞的增殖、分化和细胞凋亡信号转导等重要的生物学功能［1］。近年来已有越来越多的研究发现，在许多肿瘤细胞中存在HSP高表达现象。有关HSP27和HSP60在胃癌中的表达文献中罕见报道，本研究采用免疫组化方法检测HSP27/60在胃癌中的表达，分析它们与胃癌生物学行为的关系，以探讨将HSP27/60在临床治疗和判断预后中的应用前景。

1 资料与方法

1．1 标本来源 组织标本均来自聊城市人民医院2009年1月1日～2010年2月1日手术切除的胃癌病理存档蜡块48例，男37例，女11例，年龄30～75岁，中位年龄59岁。术前未经任何抗肿瘤治疗，按胃癌组织学分类法分类。正常胃黏膜组织14例作为对照组，取自胃癌手术切除标本的边缘正常组织。

1．2 主要试剂 鼠抗人HSP27/60、Ki-67、SP免疫组化试剂盒和DAB显色剂均购自武汉博士德生物技术公司。

1．3 免疫组织化学检测 常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度4 μm。免疫组化染色程序严格按照试剂盒规程操作。阴性对照以PBS代替一抗;阳性对照为公司提供已知阳性切片。结果判定方法:HSP27细胞质着色为阳性，HSP60细胞浆出现棕黄色为阳性细胞。HSP60阳性结果判断，细胞浆出现棕黄色为阳性细胞，计数20个高倍视野的阳性细胞，根据阳性细胞百分率分为阴性(－):阳性细胞＜5%;弱阳性(+):阳性细胞数6%～30%;中等强度阳性(++):阳性细胞数31%～60%;强阳性(+++):阳性细胞数＞60%。以中等强度阳性和强阳性为过表达病例［2］。增殖指数(porlierrationindex，PI)以Ki-67标记的肿瘤细胞胞核呈棕黄色为阳性。高倍镜下(400×)每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，共1 000个。计算阳性肿瘤细胞所占的百分比即为增殖指数。以均数为界值分为低表达组及高表达组。

1．4 统计学处理 应用SPSS 17．0统计软件进行统计学分析。各临床病理参数与HSP27/60表达关系运用卡方检验，HSP27/60之间相关性运用Spear秩相关，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

HSP27/60表达与胃癌临床病理特征的关系:胃癌组织中 HSP27和 HSP60蛋白阳性表达率分别为64．6%和81．3%。HSP27在胃癌中表达明显高于正常胃黏膜组织，在胃癌中表达与肿瘤淋巴结转移个数及浸润深度有关，淋巴结转移个数多者高于淋巴结转移较少者，与浸润深度呈正相关。HSP60表达与肿瘤分化程度及增殖指数有关，低分化者HSP60表达高于高中分化者，HSP60与Ki-67增殖指数呈正相关(见表1)。HSP27和HSP60在胃癌中表达存在相关性，经检验，spearman相关系数r=0．314，P=0．032。经卡方检验，HSP27的表达与胃癌的浸润深度T、淋巴结转移N和临床分期相关，HSP60的表达与胃癌的分化程度和Ki-67的表达相关。

表1 HSP27/60在胃癌中的表达与临床病理参数的关系Tab 1 Expression of HSP27/60 and relationship w ith clinical pathological features in gastric cancer

3 讨论

研究表明胃癌的预后受到癌组织浸润和转移的程度等多因素影响，是多基因及其蛋白表达产物协调作用的结果。热休克蛋白已被报道在多种肿瘤中过表达，与肿瘤细胞生长和分化、抵抗肿瘤细胞凋亡和不良预后有关。

本研究进一步证实热休克蛋白在进展期胃癌中表达的临床意义，研究发现HSP27和HSP60在胃癌中表达明显高于正常胃黏膜组织，提示HSP27和HSP60可能参与胃癌的发生和发展，与文献报道一致［3-4］。有关HSP27和HSP60在胃癌中过表达，可能是由于肿瘤进展中的应激反应和细胞的自我保护，但具体机制目前仍不清楚［5］。

有关HSP27在肿瘤中的表达及作用因组织而异，而且在同一组织报道尚不一致，在胃癌中报道各家不一。本研究显示HSP27表达与肿瘤有无器官转移、淋巴结转移个数及TNM分期有关，在有器官转移者高于无器官转移者，淋巴结转移个数多者高于淋巴结转移较少者，与肿瘤分期相关，提示HSP27高表达者预后差，与文献报道［2］一致，但HSP27阳性表达率较文献报道偏低。Kapranos等［4］发现HSP27在胃癌组织及其周围正常胃黏膜肠化和不典型增生组织中均有表达，在胃癌组织中表达阳性率最高。有淋巴结转移、TNM分期和女性中表达高，单变量分析在胃癌中过表达与肿瘤临床不良预后参数有关，多变量分析这种关系不存在。

HSP60表达与胃癌分化程度有关，分化差者高于高分化者，具体机制不清楚，临床意义有待进一步研究。另外，Cappello等［6］研究发现HSP60在进展期大肠癌中表达与淋巴结转移有关。Giaginis等研究发现HSP60在胃癌中表达与病人性别有关。Ki-67增殖指数(PI)是一种反映癌细胞增殖状态的良好指标，与恶性肿瘤的发生、发展、转移和预后密切相关［7］。HSP60与Ki-67增殖指数呈正相关，提示HSP60促进肿瘤细胞增殖，可能在促进肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用。HSP60作为分子伴侣能促进细胞生存，尤其在肿瘤细胞中，但这种机制仍不清楚，可能与半胱天冬酶依赖的凋亡途径有关［8］。HSP60抑制剂通过对肿瘤细胞的促凋亡作用，可能会成为一种新的抗癌剂。

HSP27和HSP60在胃癌中表达有相关性，可能在胃癌进展中起协同作用，不同类型的热休克蛋白在肿瘤中的作用机制及在同一肿瘤中表达的相互作用机制有待进一步研究。

下一步需要进一步在基因水平上研究HSP27/60在肿瘤中表达的具体机制，为揭示胃癌发生、发展的病理机制，指导治疗提供有力的证据，有望通过测定肿瘤组织中的某些HSP或血清中的特异性抗体对肿瘤进行诊断、病情评估、治疗方案的选择和判断预后。

［1］Didelot C，Lanneau D，Brunet M，et al．Interaction of heat-shock protein 90 beta isoform(HSP90 beta)with cellular inhibitor of apoptosis 1 (c-IAP1)is required for cell differentiation［J］．Cell Death Differ，2008，15(5):859-866．

［2］Chen W，Syldath U，Bellmann K．Human 60-kDa protein:a danger singal to the innate immune system［J］．J Immunol，1999，162(6): 3212-3219．

［3］Giaginis C，Daskalopulou SS，Vgenopoulou S，et al．Heat Shock Protein-27，-60 and-90 expressinon in gastric cancer:association with clinicopathological variables and patient survival［J］．BMC Gastroenterol，2009，9:14．

［4］Kapranos N，Kominea A，Konstantinopoulos PA，et al．Expression of the 27-kDa heat shock protein(HSP27)in gastric carcinomas and adjacent normal，metaplastic，and dysplastic gastric mucosa，and its prognostic significance［J］．J Cancer Res Clin Oncol，2002，128(8): 426-432．

［5］Hwang YJ，Lee SP，Kim SY，et al．Expression of heat shock protein 60 kDa is upregulated in cervical cancer［J］．Yonsei Med J，2009，50 (3):399-406．

［6］Cappello F，David S，Rappa F，et al．The expression of HSP60 and HSP10 in large bowel carcinomas with lymph node metastase［J］．BMC Cancer，2005，5:139-148．

［7］Gentile V，Vicini P，Giacomelli L，et al．Detection of human papillomavirus DNA，p53 and ki67 expression in penile carcinomas［J］．Int J Immunopathol Pharmacol，2006，19(1):209-215．

［8］Ghosh JC，Dohi T，Kang BH，et al．Hsp60 regulation of tumor cell apoptosis［J］．J Biol Chem，2008，283(8): 5188-5194．