毒害艾美耳球虫－田间分离株的致病性试验

刘 梅，李建梅，刘丹丹，王尚尚，程 旭，沈欣悦，戴亚斌，陶建平

（1．扬州大学兽医学院 禽类预防医学教育部重点实验室，江苏 扬州 225009；

2．中国农业科学院家禽研究所，江苏 扬州 225125）

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种或数种球虫寄生于鸡肠道黏膜内引起的一种寄生性原虫病，给养鸡业造成巨大的经济损失。鸡球虫病病原公认的有7种，其中柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）和毒害艾美耳球虫（E．necatrix）的致病性最强［1］。毒害艾美耳球虫主要危害8～18周龄的鸡，在7种鸡球虫中繁殖能力较低，其裂殖生殖和配子生殖分别发生在小肠和盲肠，在与其他小肠球虫和柔嫩艾美耳球虫的混合感染中，毒害艾美耳球虫往往受竞争性抑制而使其生殖潜能降低，因此不易分离。此外，在生产实际中饲养周期长的鸡一般为种鸡或蛋鸡，其后期的饲养方式常为笼养，因此在临床上由毒害艾美耳球虫引起的急性小肠球虫病较少见。故对毒害艾美耳球虫的研究相对较少。有鉴于此，本文对1株分离于临床病料样品的毒害艾美耳球虫的致病性进行了分析，旨在为开展对毒害艾美耳球虫的深入研究奠定基础。

1 材料与方法

1．1 试验动物 黄羽肉鸡，购自中国农业科学院家禽研究所，出壳后运回实验室，饲养在经10%氨水与火焰消毒的笼具中，饲喂不含抗球虫药的饲料。试验开始前，采取饱和盐水漂浮法检查鸡的粪便，确认无球虫感染后用于试验。

1．2 虫种 毒害艾美耳球虫田间分离株，由扬州大学兽医学院寄生虫教研组分离保存。在本试验前，卵囊经接种无球虫感染鸡进行扩增，按常规方法收集粪便中的卵囊，培养至孢子化后备用。

1．3 试验分组 挑选体况相近的28日龄黄羽肉鸡48羽，逐只称重编号后分成6组，每组8只。其中第1组为空白对照组，第2、3、4、5、6组分别经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊1×104个／羽、3×104个／羽、5×104个／羽、7×104个／羽、9×104个／羽。试验重复一次。

1．4 临床观察 接种后每天观察并记录鸡的采食、饮水、排粪便等情况。死亡鸡逐只剖检，确定其死因。接种后第8天结束试验，逐只称重，剖检，观察肠道病变。

1．5 致病性判定指标 以死亡率、平均增重、相对增重率、肠道病变记分等为指标评价其致病性。其中：肠道病变记分参照Johnson和Reid［2］的标准进行；相对增重率＝（感染组鸡的平均增重÷不感染组鸡的平均增重）×100%，不感染组鸡的相对增重率为100%。

1．6 数据分析 对各组的平均增重、平均病变记分分别用SPSS软件系统进行描述性统计分析，并用Duncan氏新复极差法对组间平均值进行多重比较（P＜0．05）。

2 结果

2．1 临床症状 在两次试验中，出现的临床症状基本相似，即：各感染组鸡在感染后至第4天，鸡的精神、食欲、饮水与排出粪便情况等均正常；感染后第4．5天，除感染10 000个／羽组外，其余各感染组鸡的精神稍差，食欲与饮水减少，粪便变稀，感染70 000个／羽和90 000个／羽组的粪便还带有血液；感染后第5天，各感染组均有出现血便，以感染70 000个／羽和90 000个／羽组最严重，并发生死亡，死亡鸡剖检见有典型的毒害艾美耳球虫引起的病变特征；感染后第5．5天至第7天，临床症状最严重，鸡食欲、饮欲废绝，精神倦怠，双翅下垂，肛门周围和尾羽粘有红褐色血性粪便，卧地拱背或尾羽上撅后很快死亡；感染后第7．5天，各感染组鸡精神好转，出现采食。在整个试验期间，不感染对照组鸡的精神、食欲、饮水和粪便状况均正常，结束试验前用饱和食盐水漂浮法粪检均未查见卵囊。

2．2 死亡率与剖检病理变化 除感染10 000个／羽组外，其余各剂量组均有鸡发生死亡。鸡死亡的时间在感染后第5天至第7．5天，死亡高峰为感染后第6天（图1）。死亡率随感染剂量的增加而升高（表1）。感染10 000个／羽组死亡率为零，感染30 000个／羽组的死亡率与50 000个／羽组的相同，为37．5%～50%，感染70 000个／羽组的死亡率为62．5%，感染90 000个／羽组的死亡率最高，达75%～87．5%，且出现死亡的时间最早，发病死亡延续的时间也最长，在第7．5天仍发生死亡。

各感染组病死鸡的剖检病变相近，即病变主要发生在小肠，尤其是小肠中部（空肠）。小肠外观高度肿胀或气胀，有的可达正常的两倍以上，肠管壁上密布有针尖状出血点和白色斑点。剪开肠管，可见黏膜增厚、出血、坏死，肠腔内充满液体、血液和组织碎片。十二指肠黏膜轻度充血，盲肠及直肠无明显变化，其他脏器也未见异常变化。刮取病变部位的肠道黏膜涂片镜检，可见大量成簇的大裂殖体，每个裂殖体内有数百个裂殖子。

图1 各试验组鸡发生死亡的曲线图

2．3 平均增重与相对增重率 见表1。试验前各组的体重相近，组间无显著差异（P＞0．05）。试验结束时各感染组的平均增重明显降低，除感染10 000个／羽组外，与不感染对照组相比均有显著差异（P＜0．05），但在30 000、50 000、70 000个／羽和90 000个／羽等4个剂量组间差异不显著（P＞0．05）。在相对增重率方面，感染10000个／羽组的最高（79．71%，82．26%），但与不感染对照组相比低近17～20个百分点；感染30 000、50 000、70 000个／羽和90 000个／羽组的相对增重率相近，相差近9～14个百分点。

2．4 肠道病变记分 见表1。在两次试验中，各感染组均出现肠道病变，其平均肠道病变记分与不感染对照组相比均有显著差异（P＜0．05）。肠道病变记分随感染量的增加而增高。感染10 000个／羽组的平均肠道病变记分与30 000、50 000、70 000个／羽和90 000个／羽组的相比均有显著差异（P＜0．05）。在第2次试验中，感染30 000个／羽组与90 000个／羽组间的平均肠道病变记分也有显著差异（P＜0．05）。

表1 各试验组鸡的死亡率（%）、平均增重、相对增重率（%）与肠道病变记分

3 讨论

3．1 毒害艾美耳球虫病的症状与病变 从本试验结果来看，毒害艾美耳球虫感染可严重影响鸡的增重，感染10 000个／羽的剂量就使增重率下降了近17～20个百分点，感染30 000个／羽的剂量就能引起鸡的急性发病死亡，死亡时间发生在感染后的第5～7．5天，死亡高峰在感染后的第6天。死亡率随感染量的增加而升高，但引起的临床症状基本一致。毒害艾美耳球虫引起的病变主要发生在小肠，不管感染的剂量如何，出现的病变也基本一致，刮取病变部位的肠道黏膜制作涂片镜检，可以查见大量的大型裂殖体与裂殖子。这些与文献报道相一致［3－4］。这种肠道病变特征可作为毒害艾美耳球虫病的诊断依据。

3．2 毒害艾美耳球虫的毒力 有关毒害艾美耳球虫的致病性各文献报道不尽一致，尤其是致死剂量。董辉［4］等以分离于美国Coccivac虫苗的毒害艾美耳球虫，按0．5万、1万、1．5万、2万、3万、5万、7万、10万个／羽的不同剂量接种10日龄京星黄羽肉仔鸡，所有组均未出现死亡，但均影响增重并引起不同程度的肠道病变。黄兵等［5］以分离于上海郊县鸡场的毒害艾美耳球虫，按每羽1万、5万、10万、20万个卵囊的剂量感染10日龄伊莎公鸡，感染组的相对增重率分别降低了36．10%、62．78%、66．74%和79．11%，感染1万个／羽组未出现死亡，5万个／羽组和10万个／羽组的死亡率均为41．67%，20万个／羽组为50%。林青［6］等用毒害艾美耳球虫杨凌株，以10万个／羽卵囊的剂量感染14日龄尼克红公雏，致死率达63．3%。显示这些虫株在致病性上有差异，分析原因：一是可能与各学者在试验中所用的鸡日龄、品种等宿主因素相关；二是在虫株间确实存在着致病性上的差异。Shirley［7］在比较毒害艾美耳球虫 H（Hougton）、W（Weybridge）、G（Guelph）、P（Pfizer）和 L（Lilly FS 105）株之间的生物学特性时，发现各株对鸡的致死率分别为87%、97%、93%、10%、0，致病性与虫株的繁殖潜力无关，但与乳酸脱氢酶（LDH）有关。本田间分离株按每羽1万、3万、5万、7万、9万个卵囊的剂量感染28日龄黄羽肉鸡，致死率分别为0、37．5%～50%、37．5%～50%、62．5%、75%～87．5%，显示其致病性极强，但本田间分离株的LDH酶谱是否与H株、W株、G株的相同还有待进一步分析。

［1］索勋，李国清．鸡球虫病学［M］．北京：中国农业大学出版社，1988：36-39．

［2］Johnson J，Reid W M．Anticoccidial drugs：lesion scoring techniques in battery and floorpen experiments with chickens［J］．Exp Parasital，1970，28：30-36．

［3］张龙现，蒋金书，刘群，等．毒害艾美耳球虫纯种卵囊收集鉴定及致病性测定［J］．中国兽医杂志，2001，37（9）：12-13

［4］董辉，索勋．毒害艾美耳球虫的致病性研究［J］．寄生虫与医学昆虫学报，2002，9（3）：129-135．

［5］黄兵，吴薛忠，史天卫，等．毒害艾美耳球虫纯种分离的初步鉴定和致病性研究［J］．中国兽医寄生虫病，1993，1（4）：24-28．

［6］林青，于三科，崔萍，等．毒害艾美耳球虫致病性与抗药性研究［J］．西北农林科技大学学报：自然科学版，2004，32（6）：27-31．

［7］Shirley MW．Some observations on the biology of five strains of Eimeria necatrix［J］．Z Parasitenkd，1985，71：287-295．