树莓组织培养中外植体污染防止的研究

王 禹

（黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨 150069）

树莓属于蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属（RubusL.），是近几年世界发展迅速的第三代新兴水果。其鲜果含有多种人体必需的营养成分，并有较高的药用价值；果实除鲜食外，还可制成果汁、果酒和清凉饮料，深受消费者的喜爱。树莓推广种植与产业化开发前景广阔，但传统的根蘖分株繁殖方法，难以满足生产对大量优质苗木的需求。应用组织培养繁育树莓苗木可提高繁殖系数和苗木质量。在植物组织培养过程中，控制外植体污染是组培发生的关键。本实验探索了抑制树莓外植体污染的有效途径，为快繁技术研究奠定了基础。

1 实验材料及方法

1.1 实验材料

试验树莓品种为“费尔杜德”和“哈瑞太兹”，采用的外植体为腋芽。将采集的树莓当年生枝条去除叶片及叶柄部分，将枝条剪成带1～2个腋芽的茎段，在流水状态下冲洗10min。消毒程序：70%的酒精中浸30s→无菌水冲洗2～3次→0.1%HgCl2中浸泡→无菌水冲洗2～3次，接种到初生培养基上。试验研究外植体在0.1%HgCl2溶液中的适宜消毒时间和培养基附加抗生素对外植体污染的影响。

1.2试验方法

初生培养基采用MS＋1mg／L 6－BA＋0.3mg／L IAA＋20g／L蔗糖，抗生素（头孢曲松钠）附加到培养基中，每一处理20瓶，每瓶2个外植体，实验重复3次，取平均值。所有培养基都经高压蒸汽灭菌20min（120～125℃，1.0～1.2大气压下），头孢曲松钠经过滤灭菌。

调查：

2 结果与分析

2.1 外植体在0.1%HgCl2溶液中的适宜消毒时间

表1 0.1%HgCl2溶液消毒时间对外植体污染的影响

试验为了观察外植体污染率初生培养基上未添加抗生素。从表1可以看出8、10、12min处理外植体污染率低；12min处理的萌芽率低，10min处理的萌芽率虽没有降低，但是萌芽速度开始减慢。综合比较，外植体在0.1%HgCl2溶液中消毒时间应选8min为宜。

2.2 培养基附加抗生素对外植体污染的影响

表2 抗生素对外植体污染的影响

从表2中看出初生培养基附加抗生素后有效地抑制了外植体污染。费尔杜德和哈瑞太兹分别加入60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率较低，芽生长良好。

结合表1和表2得出虽然高浓度的抗生素可有效地控制外植体污染，但是它会对芽萌发起到抑制作用，致使芽生长不健壮；相反低浓度的抗生素不能有效的抑制污染；适宜的抗生素浓度会对芽萌发起到促进作用，且不会对芽的生长造成不良影响。

3 讨论

和加卫等［1］认为未萌发的腋芽是树莓快速繁殖的最佳外植体。朴日子等［2］认为腋芽是无刺红树莓快繁的理想外植体，芽生长快，且遗传性稳定，茎尖易褐变死亡。本试验选择了带腋芽的嫩枝茎段为外植体。带腋芽的嫩枝茎段在田间易于取材，数量多，外层包裹的芽鳞片易于剥离，在生长培养基上启动率高。

目前对内生菌防治的最有效办法是使用抗生素［3］。研究表明：直接在培养基中加入抗生素能有效控制这类污染，然而这对培养材料也具有致毒作用并延缓其生长［4］。Leifert报道在培养基中加入抗生素结果使飞燕草的增殖和生根都受到阻缓［5］。本实验在培养基中附加了抗生素，有效地抑制了外植体污染，但是高浓度的抗生素会抑制芽的萌发，造成芽生长发育不良；抗生素对不同的品种影响不同，因此抗生素的选用也要因品种而异。

4 结论

外植体在0.1%HgCl2溶液中消毒时间为8min。初生培养中费尔杜德和哈瑞太兹分别附加60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率较低，芽体萌发效果好。

［1］ 和加卫，徐中志，毕海林，等.树莓组织培养与快速繁殖技术研究［J］.西南农业学报，2006，19（4）：754－756.

［2］ 朴日子，曹后男，陈艳秋，等.无刺红树莓组织培养快速繁殖技术研究［J］.吉林农业大学学报，2006，28（4）：411－414.

［3］ 李海航，潘瑞炽.青霉素在高等植物中的应用［J］.植物生理学通讯，1987（5）：1.

［4］ Dodds J R，Roberts L W.Some Inhibitory Effects of Gentamycin on Plant Tissue Culture［J］.In Vitro，1981，17：467－470.

［5］ Leifert C，Morris C，Waites WM.Ecology of Microbial Saprophytes and Pathogens in Tissue Culture and Field－grown Plant：Reasons Forcontamination Problems in Vitro［J］.CRC Crit Rev，Plant Science，1994，13：139－183.

［6］ 曹孜义，刘国民.实用植物组织培养技术教程［M］.兰州：甘肃科学技术出版社，1996：1－8.

［7］ 董玉芝，王晓炜，蒋萍.树莓组织培养及植株再生［J］.新疆农业大学学报，2003，26（1）：28－30.

［8］ 胡建刚，黄巧兴，沈秋云.1994.黑树莓的试管繁育［J］.植物生理学通讯，30（5）：356.

［9］ 王文芝.树莓果实营养成分初报［J］.西北园艺，2001（2）：15－16.

［10］ 徐桂娟，罗晓芳.黑树莓的组织培养与快速繁殖［J］.北京林业大学学报，2002，24（1）：99－100.