脑脊液结核杆菌抗原及核酸联合检测对结核性脑膜炎早期诊断的评价

巩建华， 薛秀荣， 马爱玲

(1.山东省郓城县人民医院， 山东 郓城 274700 2.山东省郓城县中医院， 山东 郓城 274700)

传统认为脑脊液涂片检出抗酸杆菌或者采用培养的方法分离出结核分枝杆菌［1］仍然是结脑诊断的金标准。但由于两者检出的阳性率很低(分别为10－14%、20%)，而且结核分枝杆菌的培养周期较长(4－6周)，给疾病的诊断带来不便［1，2］。在免疫方法上，脑脊液结核杆菌特异性抗原的检测无疑将有助于结脑的确诊。但在诸多报道中，结果的敏感性和特异性差异较大，临床上对应用存在怀疑，Katti［3］分析认为主要有以下因素:①抗原处理方法不同。②采用不同的分析方法。③个体差异对指标的检测产生影响。PCR自用于结脑的快速诊断已有较多报道，其诊断的敏感性及特异性分别在50%－90%、60%－100%。相对于涂片及培养敏感性低.费时的缺点，PCR技术受到更多推崇，尤其是在高度怀疑结脑而涂片及培养都是阴性的情况下［4，5］。CT及磁共振成像(MRI)虽然不能对结脑进行确诊，但大大提高了结脑诊断的准确性，并对预后的评估有一定的帮助［6］。结脑在CT扫描上可显示直接征象和间接征象，直接征象有结核瘤.基底池渗出物及脑实质粟粒状结核灶;间接征象有脑水肿，脑积水，及脑梗死等［7］。MRI在诊断结脑的敏感性和特异性上均优于 CT［8］。

1 资料与方法

1.1 被检者选择:在检验脑脊液常规时保留脑脊液标本于－20℃冰箱中，根据检验申请单的信息从临床病历中查阅病人信息及最出院诊断，共收集脑膜炎的脑脊液标本150份，根据出院诊断，结核性脑膜炎40例，化脓性脑膜炎43例，病毒性脑膜炎67例。

1.2 分组记录各种资料:逐例记录150例标本的姓名、年龄、性别、送检科室、住院号、结核杆菌核酸结果(PCR法)、结核杆菌抗原结果。

1.3 检测试剂:结核杆菌核酸检测试剂盒，生产单位:中山大学达发基因股份有限公司;批准文号:国食药械(准)字2009第3400580号;产品标准编号:YZB/L国0370－2009;效期:均在效期内;结核分支杆菌胶体金法快速诊断试剂盒生产单位:杭州创新生物检控技术有限公司;新药证书编号:国药证字S2005073;批准文号:国药准字S20063130;效期:均在效期内。

表1 150例脑膜炎病人临床诊断分布

表2 40例结核性膜炎及对照组检测结果统计表(非结核性脑膜炎标本为对照组)

表3 40例结核性膜炎脑脊液标本两种试验阳性结果分布

1.4 仪器及操作:基因扩增仪:美国生产 ABI定量扩增仪。将脑脊液收集于5mL离心管中，保存于－20℃冰箱中;检测时将标本平衡至室温，高速离心10min，用带无菌吸嘴的移液器吸弃上清液，留沉渣约500μL;先做核酸测定，剩余标本做结核抗原测定。

1.5 统计数据:登记检测结果;从临床病历中查询出院诊断。

1.6 结果分析:统计检测结果结合临床诊断进行。

2 结果

结果见表1、表2、表3。

3 讨论

3.1 150例脑脊液标本，是通过脑脊液常规筛选出的符合脑膜炎的标本，脑脊液常规异常的标本没有收集。3.2 通过表1可以看出，150份脑脊液标本，通临床诊断的统计，有40份临床诊断为结核性脑膜炎，43份为化脓性脑膜炎，67份为病毒性脑膜炎，我们把化脓性脑膜炎和病毒性脑膜炎共110份做为阴性对照组;3.3 由表2可以看出，40例的结核性脑膜炎组，结核杆菌核酸阳性33份，阳性率为82.5%，与有关报道接近，从理论上讲，标本中只要有一个细菌，就可以检出阳性结果，但在实际检测中发现目前的试剂盒还不能达到理想的效果;结核抗原阳怀31份，占75%，与有关报道基本相符，由于结核抗原检测方法还没有广泛开展，现用的金标技术，也不能达到理想的效果，所以单独使用只能给临床提供参考性结果;对照组中有1份呈阳性结果，考虑某个环节污染所致。

3.4 由表3可以看出，两项试验同时阳性者26份，占65%，核酸阳性而抗原阴者8份，占20%，核酸阴性抗原阳性者3份占7.5%，①说明两试验有相同的诊断份值，②说明，但阳性率还只能满足临床要求;③三种阳性模式总阳性率为92.5%，与阴对照组相比有显著差异，(P＜0.01)。

3.5 本试验用收集的标本，为病程在一周内的标本，上述两种试验的总阳性率达92.5%，对于该病的早期诊断有很大的意义。

综上所述，结核性脑膜炎属于常见病，由于本病直接损伤神经系统，病程较长，对患者的危害非常大，能否及时采取抗痨治疗，是提治高治愈率有关键。就目前对结核性脑膜炎的检测水平，对结核性脑膜炎的早期诊断，在应用常规综合性诊断法的基础上，检测结核杆菌核酸和抗原，一般在一周内即可明确诊断结核性脑膜炎，特异性更强，敏感度更高。在分析结果时，两种试验均阳性，可结合综合临床资料确诊;两种试验有一项阳性，也可作为重要依据。

［1］ Type sand causes:TB meningitis［EB/OL］/(2007－08－10)［2007－12－16］.http:meningitis.org/disease－info/typescause.

［2］ Thwaites GE Chau TT ，Farrar JJ，et al.Improving the bacteriological diagnosis of cerebral meningitis［J］.Clin Microbiol，2004，42:378－379.

［3］ 颜世斌，宋守忠，李庆宁，等.结核性脑膜炎脑脊液结核菌培养方法探讨［J］.中国防痨通信，1990，12:162－163.

［4］ Deshpande PS ，Kashyap RS，et al.Evaluation of the IS6110 PCR assay for the rapid diagnosis of tuberculous meningitis［J］.Cerebrospinal Fluid Res，2007，4:10.

［5］ Bhattacharya B，Karak K，Ghosal AG，et al.Development of a new sensitive and efficient multiplex polymerase chain reaction(PCR)for identification and differentiation of different mycobacterial species［J］.Trop Med Int Health，2003，8:150－157.

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