RP-HPLC法测定妇炎净胶囊中原儿茶酸的含量

杨仕林，舒海燕，王雨来（.湖北阳新县人民医院，湖北阳新 43500；.黄石市中心医院，湖北黄石435000）

RP-HPLC法测定妇炎净胶囊中原儿茶酸的含量

杨仕林1＊，舒海燕1，王雨来2（1.湖北阳新县人民医院，湖北阳新 435200；2.黄石市中心医院，湖北黄石435000）

目的：建立测定妇炎净胶囊中原儿茶酸含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil C18（250mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（20∶80），流速为1.0m L·min－1，检测波长为258 nm，柱温为40℃，进样量为20μL。结果：原儿茶酸的检测浓度在0.903～18.060μg·m L－1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.999 8）；平均加样回收率为98.7%，RSD＝1.8%（n＝9）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于妇炎净胶囊的质量控制。

妇炎净胶囊；原儿茶酸；含量测定；反相高效液相色谱法

妇炎净胶囊是2010年版《中国药典》（一部）收录的中药制剂，以苦玄参、地胆草、当归、鸡血藤、两面针等中药为原料，经加水煎煮、浓缩、干燥，粉碎，装入胶囊制成。它具有清热祛湿、调经止带的功能，用于湿热蕴结所致的月经不调、痛经、附件炎、盆腔炎及子宫内膜炎的治疗。在其药品标准中仅对苦玄参苷ⅠA进行了含量测定[1]，国内还有文献对该药中氯化两面针碱、绿原酸的含量测定进行了研究[2～5]，但对鸡血藤中原儿茶酸的含量测定方法未见报道。因此，笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定该药中原儿茶酸的含量，该法简便、快速、准确、重复性好，可用于妇炎净胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

LC-10A型高效液相色谱（HPLC）仪（日本岛津公司）；BS124S型天子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

原儿茶酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：0809-200102）；妇炎净胶囊（广西梧州制药（集团）股份有限公司，规格：0.4 g，批号：091004、100208、100432）；甲醇（色谱纯，天津市标准科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸水溶液（20∶80）；流速：1.0m L·min－1；检测波长：258 nm；柱温：40℃；进样量：20μL。在该色谱条件下，原儿茶酸峰与相邻峰的分离度均＞1.5，理论板数按原儿茶酸峰计算为5 700。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.原儿茶酸Fig 1 HPLC chromatogram sA.substance control；B.test samples；C.negative control；1.protocatechuic acid

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取原儿茶酸对照品适量，精密称定，置50 m L棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成原儿茶酸浓度为180.6μg·m L－1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取本品内容物，混匀，研细。取约0.8 g，精密称定，加乙醇-醋酸（10∶1）50m L，置水浴上加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至10m L，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 按本品处方配比及制备工艺制备除鸡血藤外的阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

分别精密量取原儿茶酸对照品溶液0.5、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0m L，置于100m L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液。精密吸取系列对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪。以对照品浓度（X，μg·m L－1）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为A＝4 823.1X－751.6（r＝0.999 8，n＝7）。结果表明，原儿茶酸检测浓度在0.903～18.060μg·m L－1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密量取原儿茶酸对照品溶液（9.03μg·m L－1）20μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积。结果，RSD＝0.5%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液适量，分别于1、2、4、6、8 h测定峰面积。结果，RSD＝1.2%（n＝5），表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.6 重复性试验

精密称取同一样品（批号：091004）适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，依法测定峰面积。结果，RSD＝1.8%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

取已测知含量的妇炎净胶囊（批号：091004）20粒，倾取内容物，混匀，研细，取0.4 g，精密称定，分别精密加入原儿茶酸对照品溶液（9.03μg·m L－1）4.0、5.0、6.0m L，再加适量乙醇-醋酸（10∶1）溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定样品含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.8 样品含量测定

取3批样品（091004、100208、100432）各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积；另取原儿茶酸对照品溶液（9.03μg·m L－1）适量，同法测定，按外标法以峰面积计算妇炎净胶囊中原儿茶酸的含量。结果，3批样品中原儿茶酸的平均含量分别为每粒0.046、0.053、0.059mg。

3 讨论

3.1 色谱条件的优化

将原儿茶酸的甲醇溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，发现其在258 nm波长处有最大吸收，故选择258 nm作为检测波长。

原儿茶酸属于酚酸类物质，易解离，因而会导致色谱峰出现拖尾、变宽和不对称现象，在流动相中加入酸性抑制剂可以抑制此类化合物的电离，改善峰形。试验对比了甲醇-0.05%磷酸水溶液和甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，发现前者的分离效果较佳、峰形对称、干扰较少，故选其作为流动相。

3.2 提取方法的考察

笔者考察了加热回流、超声2种样品提取方式，发现加热回流较超声法的提取率高出近10%，故选择加热回流提取法。再根据原儿茶酸易溶于水、甲醇、乙醇的性质，对提取溶剂的组成、用量等进行了考察。结果显示，以乙醇-醋酸（10∶1）为溶剂、用量50m L，提取效果最好。此外，还对加热回流的时间和次数进行了考察，结果发现加热回流提取1次、时间1 h即可基本提尽样品中的原儿茶酸。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：724.

[2] 唐秀玲，吕轶峰.HPLC法测定妇炎净胶囊中苦玄参苷ⅠA的含量[J].中国药师，2011，11（3）：429.

[3] 刘鹏翰，陆来祥，潘声遣，等.HPLC法测定妇炎净片中氯化两面针碱的含量[J].食品与药品，2005，7（10）：45.

[4] 陈军霞，卞 凌，李 炜，等.HPLC法测定妇炎净颗粒中绿原酸的含量[J].南京中医药大学学报，2009，25（6）：459.

[5] 徐 玲，张继芬，吴芳洲，等.HPLC法测定双花颗粒中绿原酸的含量[J].中国药房，2011，22（23）：2 156.

Determ ination of Protocatechuic Acid in Fuyanjing Capsules by RP-HPLC

YANG Shi-lin，SHU Hai-yan（Yangxin County People’s Hospital of Hubei Province，Hubei Yangxin 435200，China）
WANG Yu-lai（HuangshiMunicipal Central Hospital of Hubei Province，Hubei Huangshi435000，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the determ ination of protocatechuic acid in Fuyanjing capsules.METHODS：HPLC method was adopted.The determ ination was performed on Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）column w ith mobile phase consisted of methanol-0.05%phosphoric acid solution（20∶80）at the flow rate of 1.0 m L·m in－1.The detection wavelength was set at 258 nm and column temperature was 40℃.The injection volume was 20μL.RESULTS：The linear range of protocatechuic acid was 0.903～18.060μg·m L－1（r＝0.999 8）w ith an average recovery of 98.7%（RSD＝1.8%，n＝9）.CONCLUSION：Themethod is simple，accurate and reproducible，which can be used for the quality control of Fuyanjing capsules.

Fuyanjing capsules；Protocatechuic acid；Content determination；RP-HPLC

R283.65；R927.2

A

1001-0408（2012）23-2174-02

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.23.24

＊主管药师。研究方向：临床药学。电话：0714-7393081。E-mail：119139247@qq.com

2011-12-26

2012-04-19）