大孔树脂吸附分离荆芥总黄酮工艺研究

罗伟华

大孔树脂吸附分离荆芥总黄酮工艺研究

罗伟华

目的 筛选大孔树脂吸附法分离荆芥总黄酮的最佳洗脱工艺条件。方法 采用D-101型大孔树脂对荆芥总黄酮洗脱吸附，观察上样液流速、浓度、洗脱液浓度对荆芥总黄酮含量影响。结果实验结果表明，D-101型大孔树脂最佳洗脱工艺参数为上样药液流速3 ml/min，浓度10 mg/ml，洗脱液乙醇浓度70%。结论 D-101型大孔树脂洗脱条件可行方便，适合于荆芥总黄酮分离工艺。

大孔树脂;荆芥总黄酮;吸附

大孔吸附树脂是一种多孔性的高分子材料，不含交换基团，具有多孔性和较大的比表面积，具有解吸容易的特点，其是通过物理作用从溶液中有选择性地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的，目前应用于中草药有效成分分离较多［1］。中药材荆芥中主要化学成分有黄酮类、酸类、酚类化合物等，我们采用大孔吸附树脂技术，分析D-101型大孔树脂对荆芥总黄酮分离效果，结果报告如下。

1 材料与试药

1.1 仪器 旋转蒸发仪和低温冷却液循环泵为上海爱朗仪器公司生产;玻璃层析柱购于广州宇迪科学仪器公司;UV-2401型分光光度汁为日本岛津公司生产。

1.2 药品与试剂 中药材荆芥购于广东兴宁医药贸易公司，经鉴定符合国家药典标准;芦丁对照品购于中国药品生物制品鉴定所;D-101型大孔树脂、NaNO3、Al(NO3)3、NaOH、乙醇购于天津化学试剂厂。

1.3 实验方法

1.3.1 受试样品溶液制备及总黄酮含量测定 精密称取芦丁对照品适量，置100 ml量瓶中，用75%乙醇溶解并定容至100 m l，摇匀，得对照品溶液;精密吸取对照品溶液 0，1，2，3，4，5 ml，分别置 25 m l容量瓶中，分别加 75% 乙醇至 10 ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液1 m l，混匀，静置6 min，精密加入1O%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，静置，精密加入4%氧氧化钠溶液10 ml，再加75%乙醇摇匀，静置，以第1管为空白，在510nm波长处测定溶液的吸光度。以对照品溶液质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.013723X-0.0008，r=0.9999。

取荆芥药材，粉碎为粉末，称重100 g，加入85%乙醇浸泡回流提取3次，合并提取液，超声20 min，过滤，收集滤液，减压浓缩至200 m l，备用;采用分光光度法测定总黄酮含量，510nm处测定吸光光度值，计算含量。

1.3.2 D-101型大孔吸附树脂对荆芥总黄酮的吸附

1.3.2.1 药液流速对D-101树脂吸附影响 取荆芥药材提取液 100 m l，分别以 1 m l/min，2 ml/min，3 ml/min，4 ml/min，5 ml/min通过预处理好的D-101树脂柱，考察不同流速下的吸附效果。

1.3.2.2 药液不同浓度对D-101树脂吸附影响 分别取入5 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml的荆芥提取液，以 2 ml/min流速上样，计算黄酮的吸附量。

1.3.2.3 洗脱液乙醇浓度对D-101大孔树脂影响 将100 ml浓度为10 mg/m l的荆芥提取液，通过预处理好的树脂，用300 ml水洗脱后，依次用10%、30%、50%、70%、90%乙醇洗脱，各浓度分别收集100 ml洗脱液，并将水洗液浓缩至50 ml，各溶液取样，用分光光度法进行含量测定。总黄酮洗脱率=醇洗脱黄酮量/上柱黄酮量×100%。

2 结果

2.1 药液流速对D-101大孔树脂吸附效果影响 吸附量是随着上样药液流速的增加而减少的，吸附量随着接触时间的延长而增加，当吸附流速加快时，其接触时间也相应的减少，吸附量减少;从工艺操作时间等角度分析，选择3 ml/min的流速上样。具体结果见下表1。

表1 药液流速对吸附效果的影响

2.2 药液浓度对D-101大孔树脂吸附效果影响 药液浓度的不同对荆芥总黄酮的吸附结果不一，药液浓度不断升高，其吸附量呈降低趋势，其中荆芥药液浓度在10 mg/ml时大孔树脂的吸附总黄酮量最大。结果见下表2。

表2 药液浓度对D-101大孔树脂吸附效果影响(mg/ml)

2.3 不同浓度乙醇洗脱液对D-101树脂吸附黄酮的影响不同浓度乙醇洗脱液对D-101树脂吸附黄酮量影响不一，呈现正态分布;其中洗脱液乙醇浓度70%的黄酮量最高。结果见下表3。

表3 不同乙醇洗脱液浓度对D-101大孔树脂吸附黄酮影响

3 讨论

大孔树脂作为一种有机高聚吸附剂，具有选择性吸附有机化合物的能力，可应用于皂苷、黄酮、蒽醌、生物碱、水溶性酚性成分及中药提取、分离及纯化［1-2］。

本实验研究针对黄酮类化合物易溶于乙醇，而微溶于水的特点［3］，采用乙醇回流提取处理样品，浓缩提取液，加水溶解，再上大孔树脂柱进行吸附纯化，增加了大孔树脂对荆芥总黄酮的吸附能力。本实验所采用大孔吸附树脂吸附制备荆芥总黄酮，以D-101为吸附树脂，并对其工艺相关参数条件进行考察，筛选出最佳的洗脱工艺条件;研究结果表明将浓度为10 mg/ml的荆芥总黄酮提取液以3 ml/min的流速，经过预处理好D-101大孔吸附树脂动态吸附，用50%乙醇溶液进行洗脱所得总黄酮含量较高，该洗脱工艺简便易行。

［1］史作清，施荣富，范云鸽等.树脂吸附法在中草药有效成分提取中应用.中草药，2001，32(7):660.

［2］谭胜兵.大孔树脂在天然产物提取分离中的应用.菏泽学院学报，2007，29(2):81.

［3］彬果，郭文勇.大孔树脂吸附技术在中药制剂中的应用.解放军药学学报，2003，19(6):452-455.

514500 广东省兴宁市中医医院药剂科