顶空气相色谱法测定替卡西林钠原料药中残留溶剂

宋瑞芝，邢 军，常恩慧，袁 敏，黄秀芬

(1.山东鲁抗医药股份有限公司，山东济宁272021;2.济宁市药品检验所，山东济宁272020)

替卡西林钠为半合成β一内酰胺类抗生素，临床主要用于治疗败血症、呼吸道感染、胆道感染及泌尿道感染等。由于该药在合成过程中需使用乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃等有机溶剂，故应对原料药中有机溶剂的残留量进行检测。目前，《中国药典》2010年版(二部)以及JP15均未收载替卡西林钠的残留溶剂测定方法，而美国药典USP32只收载了替卡西林钠原料中二甲基苯胺一种残留溶剂的测定方法。本试验根据《中国药典》2010年版(二部)对有机溶剂残留量测定的指导原则［1］，采用顶空进样毛细管气相色谱法，测定了替卡西林钠原料药中乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃的残留量。方法简便灵敏，结果准确可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器 PerkinElmer Clarus500气相色谱仪，FID检测器，PerkinElmer Headspace Sampler TurboMatrix 40顶空仪。

1.2 试药 乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯乙烷所用试剂均为分析纯，水为高纯水。替卡西林钠原料药3批(批号为1108001、1108002、1108003)，为山东鲁抗医药提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 顶空进样器条件:热平衡温度85℃;进样针温度105℃;传输线温度115℃;热平衡时间30 min。气相色谱条件色谱柱:Elite－5(30 m×0.32 mm);载气为N2，载气流速35 cm·s－1;分流比10∶1;柱温60℃;进样口温度250℃;检测器温度300℃;进样量1.0 mL。5个主峰的理论板数、分离度均符合《中国药典》2010年版(二部)的有关规定，结果如图1所示。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取乙醇150.5 mg、乙腈20.1 mg、乙酸乙酯100.2 mg、四氢呋喃25.4 mg，加水溶解并定容至100 mL量瓶中，作为对照品储备液。再精密量取此溶液10.0 mL于50 mL容量瓶中，精密加入内标液10.0 mL，用水定容至刻度，摇匀，做为对照品溶液。

图1 对照品溶液色谱图

2.2.2 内标溶液的制备 精密吸取二氯乙烷30 mg，用水溶解并定容至100 mL量瓶中，作为内标溶液。

2.2.3 样品溶液的制备 取本品约1.0 g于20 mL顶空瓶中，精密加入内标溶液2.0 mL，纯化水8.0 mL，密封摇匀，作为样品溶液。

2.3 线性关系考察 分别精密量取对照品储备液2、4、6、8、10、12、14 mL，分别置50 mL量瓶中，精密加入10 mL内标溶液，依次用水定容至50 mL量瓶中，摇匀;分别精密量取10 mL于20 mL顶空瓶中，密封，依法测定。分别以浓度(mg· mL－1)为横坐标(C)，以各浓度下对照品峰面积A对与内标峰面积A内的比值为纵坐标(Y)，进行线性回归，结果如表1。结果表明，乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃在所研究范围内浓度与其对照品峰面积与内标峰面积的比值呈良好的线性关系(见表1)。

表1 线性关系考察结果(%，n=3)

2.4 精密度试验 分别取对照品溶液10 mL于5个20 mL顶空瓶中，密封，依法测定，测得乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃峰面积与内标二氯乙烷峰面积比值的相对标准偏差分别为1.9%、1.9%、1.7%、1.8%

2.5 最低检测限试验 采用对照品溶液逐步稀释法，依据S/N=3时测得最低检出浓度分别为乙醇0.19 μg· mL－1、乙腈0.08 μg·mL－1、乙酸乙酯0.01 μg· mL－1、四氢呋喃0.03 μg·mL－1。

2.6 定量限试验 采用对照品溶液逐步稀释法，依据S/N =10时测得定量限浓度分别为乙醇1.05 μg· mL－1、乙腈0.32 μg·mL－1、乙酸乙酯0.04 μg·mL－1、四氢呋喃0.11 μg·mL－1。

2.7 回收率试验 分别精密量取2.3项下的对照品储备液5、10、15 mL，置50 mL量瓶中，精密加入内标溶液10 mL，摇匀，分别作为低、中、高三个浓度的对照品溶液，备用。取本品供试品约1g，精密称定，置顶空瓶中，共12份，每3份为一组，其中一组分别精密加入内标溶液2.0 mL，纯化水8.0 mL，密封摇匀，作为测定供试品中各溶剂含量用;另外三组分别加入上述低、中、高3个浓度的对照品溶液各10 mL，使样品溶解，密封，依法测定含量并计算平均回收率。结果表明四种残留溶剂的平均回收率(n=9)及相对标准偏差分别为乙醇 102.7%、2.5%;乙腈 100.7%、2.6%;乙酸乙酯102.3%、2.0%;四氢呋喃101.5%、2.3%。

2.8 样品测定 取本品约1.0 g于20 mL顶空瓶中，精密加入内标溶液2.0 mL，纯化水8.0 mL，密封摇匀，作为样品溶液。依法测定，结果见表2，图谱见图2。

表2 样品测定结果(%，n=3)

图2 样品溶液色谱图

3 讨论

3.1 进样方式的选择 顶空进样可以避免将样品中的难挥发性物质引入色谱柱，减少对柱子的污染，同时该四种有机溶剂沸点均较低且较接近［2，3］，宜采用顶空进样方式。

3.2 本方法简便，灵敏，精密度、回收率均能满足中国药典的要求，故适用于替卡西林钠中四种有机溶剂的检测。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录61－65.

［2］ 程能林，胡声闻.溶剂手册［M］.北京:化学工业出版社，1986.

［3］ 谢元超，王维剑，巩丽萍.顶空气相色谱法测定头孢氨苄原料中残留溶剂［J］.齐鲁药事，2011，30(4):209－210.