HPLC法同时测定小建中汤中肉桂酸和桂皮醛的含量

2012-02-02陈海清

药学研究 2012年9期

陈海清

(郯城县第一人民医院，山东郯城276100)

小建中汤来源于汉代《伤寒论》，由桂枝、白芍、甘草(蜜炙)、生姜和大枣五味中药组成，具有温中补虚、和里缓急之功效［1］。其中桂枝中所含主要成分桂皮醛及肉桂酸具有抗癌及抗溃疡、加强胃、肠道运动等作用［2］。小建中合剂收载与《中国药典》2010年版(一部)，原标准中并无肉桂酸及桂皮醛的含量测定方法，本文采用HPLC法同时测定小建中汤中肉桂酸及桂皮醛的含量，为该制剂的质量控制提供有效的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪;SB3200型超声波清洗仪;XS205型微量分析天平。

1.2 试药肉桂酸及桂皮醛对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号分别为 110786－200503与 110710－200513);乙腈(迪马，色谱纯);甲醇(山东禹王，色谱纯)，其他试剂均为分析纯，水为娃哈哈纯净水，小建中汤为本院实验室自制(批号110912、110913、110914)。各味药材为本院自购。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱Phenomenex ODS3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.1%的磷酸水溶液(35∶65);流速:1.0 mL·min－1;柱温:30℃;检测波长:280 nm;进样量: 10 μL。

2.2 对照品溶液的制备精密称取肉桂酸、桂皮醛对照品各适量，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成单组分对照品溶液，其中肉桂酸浓度为1.0 mg· mL－1、桂皮醛浓度为2.0 mg·mL－1。分别精密量取上述肉桂酸对照品溶液1.0 mL，桂皮醛对照品溶液0.5 mL，置同一10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备按处方准确称取白芍9 g，生姜4.5 g，桂枝4.5 g，炙甘草3.0 g，大枣4.5 g(去核)，置于250 mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为80%，加入6倍量溶剂，浸泡30 min，加热回流0.5 h，过滤，重复提取2次，合并滤液置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干得浸膏，用甲醇溶解，转移至离心管中，超声振荡15 min，离心10 min，上清液移至100 mL量瓶中，再以甲醇洗涤残渣，合并洗液入量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，取1 mL至100 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液在上述色谱条件下进样，外标法计算含量。

阴性对照液的制备:按小建中汤处方比例精密称取全方中除桂枝外的其他药材，按“供试品溶液的制备”条件制备成阴性溶液。

2.4 系统适应性试验取供试品溶液，在“2.1”色谱条件下进样分析，理论塔板数按肉桂酸计算不低于5 000，按桂皮醛计算不低于3 000。各色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。拖尾因子均在0.95～1.05之间。

图1 系统性试验谱图

2.5 标准曲线的制备分别称取肉桂酸和桂皮醛对照品适量，精密称定，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成单组分对照品溶液，其中含肉桂酸1.0 mg ·mL－1、桂皮醛2.0 mg·mL－1。精密量取各单组分对照品储备液适量，置2 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的混合对照品溶液，分别进样10 μL，记录色谱图。以各色谱峰的峰面积A为纵坐标，质量浓度C(μg ·mL－1)为横坐标，绘制标准工作曲线。肉桂酸和桂皮醛分别在2.0～50.0 μg·mL－1与2.0～25.0 μg·mL－1范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。所得回归方程分别为:

肉桂酸回归方程为A=79.84×102C－5.317，r=0.999 9;

桂皮醛回归方程为A=82.74C+4.15，r=0.999 4。

2.6 精密度试验精密吸取肉桂酸和桂皮醛对照溶液10 μL，分别进样6次，以“2.1”色谱条件测定，以峰面积计算，测定肉桂酸和桂皮醛的RSD分别为0.7%、1.1%，表明仪器的精密度良好。

2.7 重复性试验取同一批号样品6份，按“2.3”项下的方法制得供试液，以“2.1”色谱条件进行测定，样品中肉桂酸和桂皮醛含量的RSD分别为0.5%、0.9%。

2.8 稳定性试验精密吸取供试品溶液，分别在0，1，2，4， 8，12，24 h测定，肉桂酸和桂皮醛的 RSD分别为0.6%、0.8%。表明样品在24 h内的稳定性良好。

2.9 加样回收率实验取已知含量的同一批(批号: 110912)小建中汤样品9份，分别按其处方1/10比例称取药材，精密称定，按照低、中、高浓度精密加入一定量对照品溶液，制成加标样品各3份，按“2.3”项下方法处理，进样10 μL分析测定，肉桂酸和桂皮醛平均回收率分别为99.8%，RSD =0.7%(n=9);101.0%，RSD=1.1%(n=9)结果见表1。