乳酸菌检验方法的探究

张全温 冯云

乳酸菌检验方法的探究

张全温 冯云

目的探究乳酸菌的检验方法，以求能更好地提高检出率和准确率。方法 使用改良番茄汁琼脂培养基检验自制酸奶中的乳酸菌，测定乳酸菌菌落总数，对乳酸菌菌种进行鉴定，对结果进行分析。结果杆菌和球菌外形特征明显，杆菌菌落大小中等，直径约为3 mm，淡白色，菌落湿润、边缘不整齐，棉絮状;球菌菌显淡白色，外形光滑，边缘整齐。计算得出1 ml酸奶中的乳酸菌菌数大约为4.2×106cfu/ml。结论目前对乳酸菌的检验技术比较成熟，运用改良番茄汁琼脂培养基培养乳酸菌，培养后平板内乳酸菌形态特征明显。

乳酸菌;检验方法;显微形态;改良番茄汁琼脂培养基

乳酸菌是指发酵能产生大量乳酸的一类细菌，这类细菌有23个属，200多种，分布广泛，人体的肠道内也存在很多乳酸菌，是一种存在于人体内的益生菌，与人类的健康生活息息相关［1］。由于上述原因，如酸奶这样的乳酸菌饮料在市场上很受人们的欢迎，但是随着酸奶产量的加大，其质量常常不稳定，人们对乳酸菌饮料的质量问题也越来越关注，急需一种能有效检验乳酸菌的方法。本文通过分析研究先前学者的文献，总结了目前国内外常用的各种乳酸菌的检测方法，并进行了初步的探究，以期为后续乳酸菌的检验工作做出贡献。

1 材料和方法

改良番茄汁琼脂培养基：加入番茄汁50 ml、酵母提取液5 g、牛肉膏 10 g、乳糖 20 g、葡萄糖2 g、磷酸氢二钾 2 g、聚山梨酯-80，1 g、乙酸钠5 g、琼脂15 g，加入适量蒸馏水加热溶解后，加入蒸馏水定容到1000 m l处，进行PH值检测应为(6.8±0.2)。然后进行灭菌操作备用。

嗜热链球菌由哈尔滨美华生物技术股份有限公司生产提供，保加利亚乳杆菌由上海志研生物科技有限公司生产提供，纯牛奶由蒙牛乳业股份有限公司生产提供。纯牛奶90℃加热10 min进行基本灭菌处理，期间加入适量白砂糖，待完全溶解后，冷却至42℃左右，进行2%接种，之后放入恒温箱内，40℃培养 3 d。

将制成的酸奶吸取1 ml加入到含有9 ml生理盐水的试管内，轻轻混均，再从试管内吸取1 ml第一次稀释液到另一只含9 m l生理盐水的试管内，如此反复，将其稀释到一个合适的浓度。之后吸取10-1、10-2、10-3、10-4、10-5稀释液到平板内，然后加入50℃左右的改良番茄汁琼脂培养基至平板中部略下位置，盖上培养皿盖，左右轻轻摇均，放入40℃恒温箱内再培养3 d，然后取出进行观察检验。以上操作都进行严格的无菌操作。

2 结果

通过观察我们可以看到乳酸菌中的杆菌在培养皿内的菌落大小中等，直径约为3 mm，颜色呈淡白色，菌落湿润、边缘不整齐，整体看上去就像一团棉絮一样;球菌的菌落也显淡白色，外形光滑，边缘整齐。

在进行菌落计数时10-1、10-2、10-3稀释度的菌落数都多到数不清，10-4、10-5稀释度的菌落数分别为350和70。选取10-5稀释度的培养皿进行显微镜观察、革兰氏染色和过氧化氢酶试验。从70个菌落中随机选取的5个菌落均为革兰氏阳性无芽孢的球菌或杆菌，其中3个菌落为过氧化氢酶阴性，这样我们就可以大约计算出1m l酸奶样本中的乳酸菌数，70×3/5×105，为4.2×106cfu/ml。

3 讨论

3.1 显微镜观察 通过显微镜我们能观察到细菌的一些形态特征，乳酸菌有一些形态特征，例如乳酸链球菌族，菌体通常呈球状，通常成对或成链;乳酸杆菌族，菌体通常呈杆状，有时也显丝状同时有假分枝产生。我们可以通过显微镜进行初步观察，看菌体是否存在鞭毛和芽孢等，但是这种方法也只能局限于初步判断。另外，不同的乳酸菌种对不同抗菌药物都有不同的敏感性，例如对于同一种抗生素，不同的乳酸菌种都会表现出不一致的敏感性，根据这个我们可以制定出抗菌谱，从而进一步进行判断。

［1］迟琼，邹泽红，傅意玲，等.乳酸菌免疫调节功能的研究进展.中华生物医学工程杂志，2011，17(4)：377-380.

454001 河南省焦作市第二人民医院检验科

3.2 检验代谢产物 不同的菌体会产生不同的代谢产物，所以我们也可以根据菌体代谢产物的不同进行检验。乳酸是乳酸菌在厌氧的条件下的重要产物，同时二氧化碳和乙酸等也是其代谢产物，并且根据不同的种，这些代谢产物的产出比例也不一样。因此我们要是可以检测出乳酸菌的代谢产物种类及其产出比例，就可以对其进行分辨。

3.3 分子生物学的应用 乳酸菌与人们的生活息息相关，是一种益生菌，所以说对乳酸菌的检验也很重要。随着科学技术的进步，乳酸菌的检验方法也在不断地进步，从简单地通过显微镜进行检验，到了更深层次的分子生物学和基因水平，目前主要有聚合敏链式反应方法、随机扩增多态性DNA方法、DNA的G+C含量测定法、DNA-DNA同源性分析法、细菌DNA限制性核酸内切酶分析法和探针杂交法等。

高科技在提高了检出率和准确率的同时，操作起来也相对复杂;传统的检验方法虽然检出率和准确率上不如这些新技术，但是操作起来相对简单易行，我们应该根据具体情况，采用不同的检验方法。