实验室血样保存条件对降钙素原浓度测定的影响

陈月华 邓小虎 于明明 郑瑞强

江苏省苏北人民医院，江苏省扬州市 225001

降钙素原（PCT）是降钙素的前体物质，近年来被广泛应用于鉴别细菌感染和非细菌感染。在正常人群中，血浆PCT＜0.1ng／ml，当全身细菌感染时，血浆PCT可明显升高，大于1ng／ml，甚至大于10ng／ml，而随着感染的控制PCT值可相应下降［1～3］。由于PCT基础值较低，PCT测定值的轻微变化可能对临床诊断产生重大的影响，因此，测定PCT时应将各种影响因素控制在最小。有关实验室血样保存条件，如血样类型、保存时间及温度、血样密封状态对PCT值影响的研究较少，对此，笔者比较了上述实验室条件对PCT检测的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 血样来源 所有血样均来源于2011年1－3月我院ICU病房明确诊断脓毒血症的患者，脓毒血症诊断标准参照《2004年拯救严重脓毒血症和感染性休克治疗指南》［4］，所有血样均经深静脉导管采集，共采集10位患者的血样。

1.2 标本的留取保存 按无菌原则空腹抽取无肝素管静脉血20ml，分2管保存：血清管和全血管，每管10ml，其中血清管待血块自然凝固收缩后，于常温3 000r／min离心5min，留取血清，再分2管分别于4℃、25℃保存0h、2h、4h、8h、12h、24h时检测PCT；全血管标本分2管，分别于4℃、25℃以全血保存0h、2h、4h、8h、12h、24h，检测前提取血清并即刻检测PCT。0h检测的血清样本随机分为密封管、非密封管保存于25℃，保存2h、4h、8h、12h、24h分别检测PCT。

1.3 仪器与试剂 PCT采用高敏免疫化学发光法，所有仪器为深圳市新产业生物医学工程有限公司的迈格鲁2000（MAGLUMI2000）免疫发光测定仪，试剂盒由同一公司提供，按说明书操作，所有试剂均在保质期内使用，仪器执行质控并在控，正常PCT＜0.5ng／ml。

1.4 统计学处理 所有数据采用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资料以0h检测的PCT值为基线值（100%），取基线值的百分数，并计算百分数的均数及其标准差（±s），组间比较采用两独立样本的非参数U检验，多组间比较采用多个独立样本的非参数检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 密封组与非密封组不同保存时间PCT变化（血清、25℃）（见图1）同一时间密封组与非密封组间PCT值差异无统计学意义（P＞0.05），两组保存4h后PCT值均较基线值下降，有统计学意义（P＜0.05）。

图1 密封组与非密封组PCT随保存时间的变化图

2.2 4℃时血清、全血标本不同保存时间PCT的变化（见图2）。

图2 4℃血清、全血标本PCT随保存时间的变化图

血清在4℃保存2h、4h、8h时，其PCT值较基线值分别升高了11.2%、3.9%、1.4%，保存12h、24h时，PCT值较基线值分别下降了1.8%、4.3%，且4℃血清保存2h时较基线PCT值显著升高，具有统计学意义（P＜0.05），其他时间PCT值与基线值间差异无统计学意义（P＞0.05）；全血4℃保存2h、4h、8h、12h、24h时，其PCT值较基线值分别下降了3.5%、9.6%、12.2%、13.1%、15.3%，保存4h后PCT值较基线值下降，有统计学意义（P＜0.05）；4℃保存2h后，两组间PCT值差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 25℃时血清、全血标本不同保存时间PCT的变化（见图3）。

图3 25℃血清、全血标本PCT随保存时间的变化图

血清在25℃保存2h、4h、8h、12h、24h时，其PCT值较基线值分别下降了4.2%、6.9%、9%、10.8%、12.8%，保存4h后PCT值较基线值下降，有统计学意义（P＜0.05）；全血25℃保存2h、4h、8h、12h、24h时，其PCT值较基线值分别下降了7.7%、12.5%、13.7%、15.0%、16.8%，全血25℃保存2h后PCT值较基线值下降，有统计学意义（P＜0.05）；其中，25℃保存4h时，两组间PCT值差异具有统计学意义（P＜0.05），其他时间两组间PCT值差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

正常情况下，PCT由甲状腺C细胞产生，在人体中水平极低（健康成人＜0.1ng／ml），PCT的半衰期为22～30h，在体内外稳定性很好［5，6］。有研究发现PCT检测在体外不受动静脉血、冷冻和复温的影响，血清与血浆之间PCT也无显著差别［7］。本研究也发现保存血样时密封与否对PCT影响不大。

Michael等学者的研究中发现降钙素原的降解速度较缓慢，血浆室温保存24h，PCT仅下降12.4%［7］，本研究也有相近的发现。本研究中，除4℃血清组外，4℃全血组、25℃血清组、25℃全血组PCT值在血样保存2h内下降最快，分别下降了基线值的3.5%、4.2%、7.7%。全血4℃、血清25℃保存4h后及全血25℃保存2h后PCT值较基线值下降，有统计学意义，据此建议采血后最好在2h内尽快检测PCT。但保存4h之后，PCT值降低速度非常慢，此后20h三组PCT值每小时下降基线值的0.2%～0.3%。保存24h后，三组PCT值较基线值仅下降了15%左右，因此，PCT在体外是相对稳定的。为提高PCT检测结果的准确性，建议采血后2h内完成检测，若实际工作中无法完成，建议制定规范的操作流程，确保从采血到检测的时间间隔相对恒定，以保证PCT动态检测的稳定性。

血清4℃保存2～8h，PCT值不降低反而升高，其机制尚不明确，分析其原因可能与以下几点有关，（1）和降钙素原与血清白蛋白的结合、解离有关。当温度降低时，降钙素原与白蛋白的解离远超过降钙素原的降解，因此PCT值不降低反而升高。（2）降钙素原降解为小分子片段，这些小分子片段可能与化学发光试剂中的有效成分有更高的亲和力，导致PCT值的假性升高［7］。目前尚无研究明确降钙素原的蛋白结合度及解离率，而且脓毒血症患者血清白蛋白浓度个体差异很大［8］，因此血清4℃时PCT检测值可能波动较大，本研究中4℃血清组PCT值均数的标准差较其他组明显高，也支持上述推测，因此不推荐血清4℃保存。4℃全血保存2～8h并未出现PCT值较基线升高，分析可能与降钙素原和（或）其降解产物被血细胞表面吸附有关。上述有关推测尚需进一步实验证实。

比较四组PCT检测结果可以发现，血清25℃组、全血4℃组PCT值较另外两组变化更平稳，因此，血样保存首选血清室温下保存，若以全血保存则建议冷藏保存。

综上所述，为提高PCT检测的准确性，保证PCT动态检测的稳定性，建议采血后2h内尽快完成检测，若无法完成，则建议制定规范的检测流程，确保采血与检测的时间间隔相对恒定，血样标本以血清室温下保存最好，若全血标本以冷藏保存为宜。

［1］ Simon L，Gauvin F，Amre DK，et al.Serum procalcitonin and C－reactive protein as markers of bacterial infection：a systematic review and meta－analysis〔J〕.Clin Infect Dis，2004，39：206.

［2］ 王澎，郭东风，许德凤，等.热休克蛋白70含量变化与脓毒血症严重程度的关系〔J〕.中华急诊医学杂志，2011，20（6）：610.

［3］ Clec HC，Fosse JP，Karoubi P，et al.Differential diagnosic value of procalcitonin in surgical and medical patients with septic shock〔J〕.Crit Care Med，2006，34：102.

［4］ 邱海波，刘大为.《2004年严重感染和感染性休克治疗指南》系列讲座〔J〕.中国危重病急救医学，2004，16（7）：515.

［5］ 张剑，张宁，刘宏，等.C反应蛋白和降钙素原检测对感染性休克患者的临床应用价值〔J〕.中国急救医学，2011，31（5）：444.

［6］ 吴丹霞，姚筱.血清降钙素原在急性感染性疾病诊断中的应用〔J〕.中国感染控制杂志，2011，10（1）：33.

［7］ Michael M，Klaus T，Stephan S，et al.Procalcitonin－Influence of Temperature，Storage，Anticoagulation and Arterial or Venous Asservation of Blood Samples on Procalcitonin Concentrations〔J〕.Eur J Clin Chem Clin Biochem，1997，35：597.

［8］ 孙漓，彭强，冯冬梅.脓毒血症预后的影响因素分析〔J〕.现代医学，2011，39（4）：465.