新辅助化疗对局部进展期乳腺癌患者T淋巴细胞亚群及NK细胞免疫功能的影响

白海亚 马秀芬 (甘肃省妇幼保健院乳腺科，兰州730050)

近年来，乳腺癌发病率呈上升趋势，约占女性恶性肿瘤的30%，占女性恶性肿瘤致死率的15%左右［1］。新辅助化疗具有降低肿瘤分期、提高可手术率、减少细胞耐药性等作用，目前已成为局部晚期乳腺癌的常规治疗手段。然而，辅助化疗在杀灭肿瘤细胞的同时，亦可以影响机体的免疫功能［2］。据报道，乳腺癌患者尤其是局部进展期乳腺癌和转移性乳腺癌患者中T淋巴细胞数量明显低于正常人组［3］，然而，T淋巴细胞数量依赖于乳腺癌患者肿瘤分期，辅助化疗可以改变乳腺患者外周血中淋巴细胞亚群数量，Lissoni等［4］研究发现乳腺患者中降低的CD4+/CD8+比值在使用有效的辅助化疗1周期后恢复正常。本研究以正常女性人外周血为对照，对54例局部进展期浸润性导管癌患者新辅助化疗前后外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞进行测定，旨在了解乳腺癌患者新辅助化疗前、后免疫功能变化情况，并观察其与新辅助化疗疗效之间的关系，为临床上判断患者免疫水平、指导临床治疗提供参考。现分析如下：

1 资料与方法

1.1临床资料 实验组为2010年1月至2011年1月在我院进行首次治疗的54例女性乳腺癌患者，AJCC肿瘤分期为Ⅱb期(仅T3N0MO)和Ⅲ期(不包括N3)，年龄40～70岁，平均年龄51岁，所有患者住院前没有接受过免疫抑制药物及诊断过病毒性疾病，均无化疗禁忌证，化疗前血象、肝肾功能正常，其中有4例患者合并冠心病，但心功能正常，无其他系统疾病。化疗方案采用CEF方案：表阿霉素(EPI)80 mg/m2，第1天，静脉注射;环磷酰胺(CTX)500 mg/m2，第1 天，静脉滴注;5-氟尿嘧啶(5-Fu)500 mg/m2，第1天和第8天，静脉滴注，3周为1个周期，共3个疗程。新辅助化疗前经穿刺病理证实均为乳腺浸润性导管癌，对照组40例为体检健康女性，年龄38～65岁，中位年龄50岁。新辅助化疗前后采用临床查体、乳腺B超和(或)乳腺钼靶等方法测量肿瘤最大径和垂直径，同一患者在新辅助化疗开始及第3周期末用以上方法监测，主要以临床查体及乳腺超声为主。每周期化疗前常规检查血常规、肝、肾功能和心电图，化疗后每周查血常规及评价全身状况。

1.2试剂和仪器 单克隆抗体抗 CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16、CD56PE，均由美国Becton Dickinson 公司生产，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+分别代表 T、TH、TS、NK细胞。红细胞裂解液由BD公司生产。FASCCan流式细胞仪为美国Becton Dickinson公司产品。

1.3检测方法 对照组及实验组均采清晨空腹血，使用流式细胞术检测病例组化疗前及新辅助化疗3个疗程后和对照组T淋巴细胞亚群及NK细胞。

1.4疗效评价标准［5］采用WHO可测量实体瘤疗效统一标准：CR：临床检查肿瘤完全消失;PR：肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积减少＞50%以上;SD：肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积减少＜50%或增加＜25%;PD：肿瘤最大直径与其最大垂直径的乘积增加＞25%及其他转移征象。

1.5数据处理 所有数据均采用SAS9.2统计学软件进行数据统计分析和比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1 病例组新辅助化疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞结果比较(±s)Tab．1 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

表1 病例组新辅助化疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞结果比较(±s)Tab．1 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

Note：Between control group and pre or post-chemotherapy group：1)P＜0.01，2)P＜0.05.

Groups Case CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD16+56+Pre-chemotherapy 54 64.35±6.20 28.15±5.471) 32.56±6.411) 1.04±0.222) 15.23±4.462)Post-chemotherapy 54 65.54±8.38 30.24±6.371) 33.54±6.831) 1.08±0.442) 16.22±3.342)Control group 40 65.88±5.64 35.45±4.23 24.36±4.12 1.34±0.23 19.42±5.27

表2 病例组新辅助化疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞结果比较(±s)Tab．2 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

表2 病例组新辅助化疗前后T淋巴细胞亚群及NK细胞结果比较(±s)Tab．2 The contrast of T lymphocyte subsets and NK cells between pre or post-chemotherapy groups(±s)

Note：Between control group and pre or post-chemotherapy group：1)P＜0.01，2)P＜0.05;Between pre or post-chemotherapy groups：3)P＜0.05.

Groups N CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD16+56+Response group 38 Pre-chemotherapy 65.35±7.24 29.35±4.471) 33.32±5.311) 1.08±0.322) 16.18±4.462)Post-chemotherapy 69.46±6.873) 34.35±5.473) 26.12±4.453) 1.55±0.673) 20.45±2.453)Non-response group 16 Pre-chemotherapy 65.44±7.38 28.59±4.561) 32.34±5.121) 0.98±0.562) 15.45±3.412)Post-chemotherapy 61.37±8.792)3) 24.31±5.111)3) 37.54±4.831)3) 0.76±0.211)3) 12.27±2.381)3)Control group 40 65.88±5.64 35.45±4.23 24.36±4.12 1.34±0.23 19.42±5.27

病例组中CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞数量在化疗前、化疗后均低于对照组(P＜0.05)，CD8+T淋巴细胞较对照组明显升高(P＜0.01)，见表1。

病例组中54例乳腺癌患者，其中38例为化疗有效的患者(CR 7例，PR 31例)新辅助化疗后较化疗前CD3+、CD4+T淋巴细胞及NK细胞均升高(P＜0.05)，其中 CD4+/CD8+显著升高(P＜0.01)。16例化疗无效的患者(SD 14例，PD 2例)辅助化疗后CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+及NK细胞较治疗前下降(P＜0.05)，与对照组比较各项指标均有显著性差异(P＜0.05，见表2)。

3 讨论

现代免疫学表明，肿瘤的发生发展与肿瘤宿主的免疫状态有关，肿瘤免疫中起主要作用的是细胞免疫，在细胞免疫中，各种细胞亚群及其产物相互作用，相互调节，维持正常的免疫应答能力。

机体的免疫由T淋巴细胞介导，T淋巴细胞在肿瘤免疫中起调控作用，按照不同的分类标准，T细胞可以分为不同亚群，其中根据表面标志和分化抗原的不同，可以将T细胞分为CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞，而CD3 T淋巴细胞代表总T淋巴细胞。CD4+T细胞可以分泌大量细胞因子辅助CD8+T细胞及NK细胞杀伤肿瘤，而且CD4+T淋巴细胞在肿瘤免疫中具有免疫记忆和直接杀伤肿瘤细胞的功能［6］，CD8+抑制性T淋巴细胞，具有抑制体液和细胞免疫的功能。NK细胞是机体天然免疫的主要承担者，具有细胞毒性效应，可以直接杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞及移植的组织细胞和进行免疫调节，但对正常组织无杀伤作用，所以NK细胞是免疫应答中最早发挥作用的效应细胞，是人体抗肿瘤和抗感染的第一道防线。人类NK细胞为CD16和CD56阳性，少部分NK细胞可以为CD8阳性。正常情况下，CD4+T细胞与CD8+T细胞所代表的两大类最主要的T细胞亚群处于一种动态平衡状态，CD4+/CD8+比值基本恒定在1.5 ～2.0 之间［7］，二者互相协调，相互制约，共同参与对机体免疫应答的调节作用，只有在比值正常时，才能发挥抗肿瘤作用［8］。

恶性肿瘤患者因T淋巴细胞数量减少、功能不全、CD4+/CD8+比例失调，从而出现细胞免疫功能低下［9］。本次研究中，54例乳腺癌患者与40例正常女性的T淋巴细胞比较，CD3+、CD4+T淋巴细胞及NK细胞较正常组明显降低，而CD8+细胞升高，与国内报道基本一致［10］，提示本组中乳腺癌患者细胞免疫功能发生紊乱，可能与恶性肿瘤在发生发展中分泌大量免疫抑制因子有关。

有文献报道，恶性肿瘤患者经过有效的治疗后，其免疫功能可能恢复［11］。本组中54例乳腺癌患者治疗前免疫功能较正常对照组低，经过3周期CEF化疗后，化疗有效者38例，无效者16例，其中化疗有效的38例患者经新辅助化疗治疗后，CD3+、CD4+T淋巴细胞及NK细胞较治疗前明显提高，而CD8+细胞较治疗前降低CD4+/CD8+比值较治疗前升高，提示有效的治疗使肿瘤负荷减少，肿瘤分泌的免疫抑制因子数量减少，细胞免疫功能有所恢复，而16例化疗无效的患者，治疗后CD3+、CD4+T淋巴细胞及NK细胞较前明显下降，CD8+细胞较治疗前升高，提示本组中乳腺癌患者免疫功能低下，可能原因是对化疗方案药物有耐药，肿瘤恶性程度高，肿瘤细胞数量增加产生免疫抑制因子抑制了CD4+T淋巴细胞及NK细胞形成，最终导致患者细胞免疫功能下降。

本研究表明局部进展期乳腺癌患者存在免疫功能低下，有效的新辅助化疗可以使患者的免疫功能有所恢复。因此，笔者认为定期监测乳腺癌患者的免疫功能，对于了解患者免疫水平及指导临床治疗有一定价值。

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